段天才 朱玲云 張海玲

摘要：[目的] 為了了解云南省楚雄州哺乳仔豬腹瀉病毒性病因分析。[方法] 對來自楚雄州5個地區(qū)6個養(yǎng)殖場的253份出現(xiàn)腹瀉癥狀的仔豬糞便樣品進行RT-PCR分子生物學(xué)鑒定。[結(jié)果] 結(jié)果顯示，此次試驗共檢出131份豬圓環(huán)病毒，陽性率51.78%;豬輪狀病毒15份，陽性率5.93%;豬流行性腹瀉病毒15份，陽性率5.93%;檢測結(jié)果表明，豬圓環(huán)病毒是引起當(dāng)?shù)夭溉樽胸i腹瀉的主要病因，部分豬場還存在兩種或多種病原的混合感染。[結(jié)論] 本次檢測從病毒性病因的角度對致哺乳仔豬腹瀉綜合癥的病因進行了初步的分析，為哺乳1仔豬腹瀉病的病毒性病因的控制和預(yù)防提供更合理、更切合實際情況的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：仔豬腹瀉;病毒性病因;RT-PCR

哺乳仔豬的腹瀉問題在養(yǎng)豬業(yè)的生產(chǎn)中很常見，在近幾年里哺乳仔豬的腹瀉性疾病在全國很多地方的養(yǎng)殖場暴發(fā)，給養(yǎng)殖場造成重大的經(jīng)濟損失。哺乳仔豬發(fā)生腹瀉后因其個體小，抗病率低 ，常導(dǎo)致豬場大面積的死亡 ，嚴(yán)重影響了仔豬的生產(chǎn)，給生豬生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟損失[1]。

豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種急性、高接觸性腸道傳染病。臨診上以發(fā)熱、嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、脫水、排泄物腥臭為主要特征。豬輪狀病毒病（Rotavirus）是由輪狀病毒（PoRV）感染引起仔豬爆發(fā)性消化道功能性紊亂的一種急性腸道性傳染病。該病毒于1969年首先由Mebus在腹瀉的犢牛糞中分離出來。在我國，龐其方等于1979年首次從兒童腹瀉糞便中檢測出輪狀病毒 [5]。輪狀病毒感染主要發(fā)生在寒冷的晚秋、冬春以及早春季節(jié)。PoRV均可感染各種年齡和性別的豬只，但只有仔豬有發(fā)病癥狀，感染率和死亡率均有所提高，成年的豬只多呈隱形感染。豬圓環(huán)病毒感染（Porcine circovirus infection）是由豬圓環(huán)病毒（PCV）引起豬的一種新的傳染病（斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征）。1998年，Ellis等首次分離到該病的病原，引起了人們對該病毒的重視。圓環(huán)病毒可以從已經(jīng)感染的豬只的鼻液、糞便等廢物中排出病毒，感染的途徑為消化道、呼吸道，對已感染的懷孕母豬，PCV可以經(jīng)胎盤垂直傳染給腹中的仔豬。PCV的主要宿主是豬只，各種年齡段的均較易感，但仔豬感染后發(fā)病嚴(yán)重。胚胎期或生后早期感染的豬，往往在受到較為強烈的刺激后才會發(fā)病，本病還可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制，從而導(dǎo)致繼發(fā)或并發(fā)感染[9]。

據(jù)資料調(diào)查顯示哺乳仔豬腹瀉發(fā)病率為54.83%，死亡率為16.27%。生豬的健康養(yǎng)殖對畜牧業(yè)的良性發(fā)展有著極其重要的作用。目前的調(diào)查數(shù)據(jù)表明，腹瀉已成為影響楚雄州部分豬場仔豬存活率的主要因素。因此，非常迫切需要查明引起腹瀉的各種可能因素，從而為有效防治提供可行依據(jù)。本研究通過PCR和RT-PCR方法檢測腹瀉癥狀的豬的糞便，從病毒性病原的角度對致哺乳仔豬腹瀉綜合征的病因進行了初步的分析，為當(dāng)?shù)刎i場發(fā)生仔豬腹瀉綜合征的病因和臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源 采集自楚雄州6個出現(xiàn)腹瀉癥狀的規(guī)?；B(yǎng)殖場的仔豬糞便253份。

1.1.2 實驗試劑 Takara RNAiso Plus Total RNA、DNA快速提取試劑盒、RI?Enzyme?Mix、2×ES?Reaction?Mix、2×Trans?Taq?HiFiPCR?Super?Mix、異丙醇、75%乙醇、氯仿等均由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物傳染病實驗室提供。

2.1.3 實驗設(shè)備 PCR儀 [MJ Research，型號：PTC-150]、低溫冷凍離心機[Thermo Electron Corporation INC，型號：D-37520]、超凈工作臺[蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品，型號：SW-CJ-1FD]、高壓蒸汽消毒器[上海醫(yī)用核子儀器廠，型號：YH00L-71]等儀器均由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物傳染病實驗室提供。

2. 結(jié)果與分析

本次實驗共調(diào)查分析了楚雄州5個地區(qū)的6個規(guī)?；i場，樣本量共253份。其中，共檢出131份豬圓環(huán)病毒2型，陽性率為51.78%;此外，本次樣品采自楚雄州不同地區(qū)，具有一定的代表性，降低了因個別豬場陽性率偏高所帶來的誤差。不同豬場致哺乳仔豬腹瀉病毒性病因統(tǒng)計結(jié)果及混合感染統(tǒng)計結(jié)果如下表;

3 結(jié)論與討論

隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化的發(fā)展，利用有限的空間進行高密度的飼養(yǎng)，給各種疾病，尤其是消化道及呼吸道疾病的感染創(chuàng)造了有利的條件。當(dāng)前世界各國因仔豬腹瀉造成的損失相當(dāng)巨大，嚴(yán)重的影響?zhàn)B豬行業(yè)的發(fā)展。腹瀉的病源很多，有相關(guān)的病毒、細菌、寄生蟲等病原體，但依據(jù)多國的數(shù)據(jù)統(tǒng)計資料表明哺乳期的仔豬腹瀉多數(shù)是由病毒所致[8-9]。

豬圓環(huán)病毒感染通常是一種慢性的感染過程，可以引起細胞的凋亡，導(dǎo)致機體免疫抑制，為其他病原的入侵提供了便利。這也是圓環(huán)病毒檢出率如此之高及仔豬腹瀉難以根除的重要原因?，F(xiàn)有腹瀉的活疫苗和滅活疫苗的臨床使用效果不佳。流行毒株發(fā)生較大的基因變異，在不同位點發(fā)生氨基酸的突變和缺失，是導(dǎo)致經(jīng)典的疫苗毒株臨床免疫保護率下降和病毒性腹瀉病因一直無法根除的重要原因。

本研究從病毒性病因的角度對致哺乳仔豬腹瀉綜合征的病因進行了初步的分析，對發(fā)病豬場的病毒性病因進行分析，為當(dāng)?shù)刎i場及散養(yǎng)戶發(fā)生仔豬腹瀉綜合征的病因和臨床治療提供一定的基礎(chǔ)。

參考文獻

[1] 林初文，莊金秋，謝印乾，等. 我國主要豬病毒性腹瀉疾病的特點及其防治對策[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2007，34（5）：121-123

[2] 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，第五版 2012：453.

[3] 張坤.豬病毒性腹瀉多重RT-PCR診斷方法的建立和應(yīng)用及輪狀病毒的分離[D]，2010，07.

[4] 曾艷.豬輪狀病毒NSP4基因原核與真核表達載體的構(gòu)建及其表達研究[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008，01.