姚洪娟，彭紀銘，李小飛，劉思光，李鐵健，張貴民*

（1. 魯南制藥集團有限公司，山東 臨沂 276000；2. 國家手性制藥工程技術研究中心，山東 臨沂 276000）

藥品在臨床使用中產生的不良反應除了與主成份的藥理活性有關外，與藥品中的雜質也有很大關系[1-6]。同一藥品用不同工藝生產可能產生不同的雜質譜，且雜質的結構、理化性質和毒性情況復雜，所以為保證臨床用藥的安全性，需嚴格控制藥品中的雜質[7-8]。

十六醇，分子式為C16H34O，由天然油脂經甲酯化、氫化、精制而得[9]，作為基質用于各類化妝品，也可用于W/O乳化劑膏體，軟膏基質等，常用于制造香料、化妝品、洗滌劑、增塑劑等。

十六醇收載于《中華人民共和國藥典》（簡稱中國藥典）2020年版四部[9]、歐洲藥典（EP）10.0版[10]、美國藥典（USP）43-國家處方集（NF）38版[11]、印度藥典（IP）2010[12]、國際藥典（WHO藥典）第5版[13]等，各藥典標準均對十六醇含量進行檢查；只有中國藥典對十六醇的有關物質進行研究，但僅控制未知雜質總量，其他雜質未作要求。因十六醇是西吡氯銨含片的起始物料，引入的雜質包括十四醇、十五醇、十七醇、十八醇。為了有效控制西吡氯銨含片的質量，本文研究對十六醇的有關物質進行控制，結果表明，所建立的方法簡便、快捷、結果準確，能有效控制藥品質量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

MS205DU電子分析天平（瑞士，Mettler Toledo）；安捷倫Agilent 7890B氣相色譜儀（美國，安捷倫）；MING-CHE24UV超純水系統(tǒng)（Mingche）；KQ-500E型數控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥

十六醇：樣品1（廠家A，批號：CJ29025），樣品2（廠家A，批號FJ270013），樣品3（廠家A，批號：EX2RRK3X）；十四醇（批號：CP58M-AC，含量98 %）、十五醇（批號：JGXCH-BO，含量95 %）、十七醇（批號：IFCEL-OB，含量97 %）、十八醇（批號：WFVYK-LH，含量98 %）均購自于TLC；乙醇（Merck，批號：K51399827920，色譜純）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-5 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；柱溫：起始溫度為40 ℃，保持2 min，以45 ℃/min速率升溫至200 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min速率升溫至240 ℃，保持2 min，再以20 ℃/min速率升溫至300 ℃，保持5 min；進樣口溫度 270 ℃, 分流比30:1；氫火焰離子化檢測器330 ℃；空氣流量 400ml/min；氫氣流量：30 ml/min；載氣（N2）流速 1.5 ml/min；進樣量 1 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品儲備液及混合對照品溶液 取十四醇、十五醇、十七醇、十八醇對照品各約50 mg，精密稱定，置入同一10 ml量瓶，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液2 ml置入50 ml量瓶，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即成每1 ml中約含200 μg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約200 mg，精密稱定，置入5 ml量瓶，加乙醇溶解并稀釋制成每1 ml中約含40 mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2.3 測試溶液 取樣品約200 mg，精密稱定，置入5 ml量瓶，加對照品溶液溶解并稀釋至刻度，作為測試溶液。

2.2.4 空白溶液 取乙醇作為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2”項下的空白溶液、對照品溶液和供試品溶液（樣品批號CJ29025）各1 μl，在“2.1”項色譜條件下分別進樣，記錄色譜圖。結果顯示，空白溶劑不影響測定，各溶液色譜圖中相鄰的峰間分離度良好，均大于2.0（見圖1）；十四醇、十五醇、十七醇、十八醇的理論塔板數均大于5000。

圖1 GC色譜圖

2.4 線性關系考察

稱取樣品約1600 mg，精密稱定，置入20 ml量瓶，精密加入混合對照品儲備液1600 μl，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為200 %線性儲備液；依次稀釋200 %線性儲備液至限度濃度的40 %，60 %，80 %，100 %和150 %，作為線性溶液1 ～5號， 200 %線性儲備液作為線性溶液6。結果見表1。

2.5 檢測限與定量限

將“2.4”項下的線性溶液5用乙醇逐級稀釋，進樣測定。當信噪比約為3 時，測得檢測下限；當信噪比約為10 時，測得定量下限。結果見表1。

表1 線性試驗結果

2.6 精密度試驗

2.6.1 重復性 精密量取測試溶液1 μl，按“2.2”項下測試溶液方法配制測試溶液，平行6份，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖及峰面積值。結果測得十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含量的RSD值為0.78 %，0.85 %，0.50 %，0.70 %，結果表明，儀器進樣精密度良好。

2.6.2 中間精密度 由另一名分析人員，于不同日期使用不同的儀器，同“重復性”試驗操作。綜合重復性試驗的結果，評估2人所得結果。結果測得十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含量的RSD值為1.7 %，2.4 %，1.6 %，2.3 %，結果表明，儀器進樣精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密量取測試溶液1 μl，分別于0，2，4，6，8，10 h，按“2.1”項下的色譜條件進樣測定，記錄色譜圖及峰面積值。結果測得十四醇、十五醇、樣品、十七醇、十八醇峰面積的RSD值為1.4 %，1.2 %，1.4 %，1.6 %，1.5 %，結果表明，其溶液在10 h內基本保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗

分別精密稱取已知含量的樣品（批號：CJ29025）約0.2 g，共9 份，依次加入“2.2.1”項下的混合對照品儲備液0.40，0.80，1.2 ml，各3份，再分別加乙醇稀釋至20 ml，即得低、中、高3 個質量濃度的供試溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定并計算回收率。結果見表2，表明各成分的低、中、高3 個濃度回收率均在84.3 % ～100.9 %之間，RSD 在3.6 % ～4.3 %之間，表明本方法準確度良好。

表2 回收率試驗結果

2.9 十六醇中有關物質的測定

取3批樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表3。

表3 3批樣品中有關物質測定結果/%

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

由于十六醇中雜質較多，且十四醇、十五醇、十六醇、十七醇和十八醇的沸點較高，在本試驗中選擇不同的毛細管柱進行測定，在選擇ZB-FFAP柱時，空白對供試品無干擾，但主物質峰形較差。在選擇安捷倫-DB-1柱時，各成分分離度均達到要求，但響應低、峰形差。而使用安捷倫-DB-5柱時，十六醇中各組分分離度較好、靈敏度高、峰形對稱，且分析時間控制較短。

3.2 色譜條件的選擇

因十六醇和其雜質十四醇、十五醇、十七醇、十八醇含碳量較高，沸點范圍為210 ～ 344 ℃，因此需設置較高的進樣口溫度，在進樣口溫度低于250 ℃時，長時間進樣會出現(xiàn)鬼峰，進樣口溫度升至270 ℃及以上，鬼峰消失，同時柱溫和檢測器皆需要配置較高溫度，以防出現(xiàn)殘留和鬼峰。

3.3 結論

通過對比外標法和面積歸一化法測定十六醇的含量結果，無明顯差距，最終按面積歸一化法計算，十六醇含量不得少于98.0 %，十八醇不得過0.5 %，其他單個單雜不得過0.3 %，雜質總和不得過2.0 %。

十六烷醇為飽和脂肪烷烴，紫外吸收弱，不易用液相色譜檢測，同時由于其沸點較高，受熱不易揮發(fā)，所以本文采用氣相色譜法對十六醇的有關物質進行檢測，為無紫外吸收的高沸點化合物提供了新的檢測思路。本法能有效地對十六烷醇進行質量控制，同時操作方法簡便、分析時間較短。