楊夢琳 周小青 伍大華 張運(yùn)輝 鄭彩杏 童天昊

〔摘要〕 目的 應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測何首烏-丹參抗阿爾茨海默病（AD）的作用靶點(diǎn)及相關(guān)信號(hào)通路，挖掘其抗AD的作用機(jī)制。方法 通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)（TCMSP）網(wǎng)站檢索何首烏-丹參的活性成分及對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)，再通過Drugbank數(shù)據(jù)庫、Dis Ge NET數(shù)據(jù)庫和TTD數(shù)據(jù)庫獲得AD的主要致病靶點(diǎn)，采用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建藥物活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，利用STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建蛋白與蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，然后運(yùn)用生物信息學(xué)的方法對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行基因功能分析和通路富集分析，最后采用MTT法、ELISA法、比色法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)主要預(yù)測的生物過程與信號(hào)通路進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 研究共篩選出何首烏-丹參藥對(duì)的有效成分24個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)274個(gè)，與AD相關(guān)靶點(diǎn)共107個(gè)，相關(guān)信號(hào)通路前10條，GO分析相關(guān)度前20個(gè)靶點(diǎn)分子功能。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了何首烏-丹參能有效提高PC12細(xì)胞的細(xì)胞存活率及抑制PC12細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，并促進(jìn)Nrf2/HO-1信號(hào)通路的激活。結(jié)論 何首烏-丹參主要是通過抗炎和抗氧化應(yīng)激對(duì)AD產(chǎn)生重要的治療作用，為后續(xù)臨床治療AD提供新的思路。

〔關(guān)鍵詞〕 何首烏;丹參;阿爾茨海默病;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制

〔中圖分類號(hào)〕R285? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.04.012

〔Abstract〕 Objective To predict he anti-Alzheimer's disease （AD） target and related signaling pathways， and explore the anti-AD mechanism of Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）-Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma） by network pharmacology. Methods The Chinese medicine system pharmacology technology platform （TCMSP） was used to search the active ingredients and corresponding targets of Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）-Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma）. The Drugbank database， the Dis Ge NET database and the TTD database were used to obtain the main pathogenic targets of AD. Cytoscape 3.7.1 software was used to construct the active ingredient-target network diagram. STRING database was used to construct the protein-protein interaction （PPI） network. The bioinformatics method was used to analyze the gene function and pathway enrichment analysis of key targets. Finally， the MTT， ELISA， colorimetry method and qRT-PCR were used to verify the main biological processes and signal pathways predicted by network pharmacology. Results A total of 24 active ingredients of Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）-Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma） were screened ， 274 corresponding targets， 107 targets related to AD， top 10 related signaling pathways， and top 20 target molecular functions by GO analysis. Cell experiments also proved that Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）-Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma） could effectively improve the cell survival rate of PC12 cells and inhibit inflammation and oxidative stress response of PC12 cells， and promote the activation of Nrf2/HO-1 signaling pathway. Conclusion Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）-Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma） has an important therapeutic effect on AD mainly through anti-inflammatory and anti-oxidative stress， which provides a new idea for subsequent clinical treatment of AD.

〔Keywords〕 Heshouwu （Polygoni Multiflori Radix Praeparata）; Danshen （Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma）; Alzheimer's

disease; network pharmacology; mechanism of action

阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease， AD）是一種以認(rèn)知功能下降、精神行為功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變[1]。隨著全球人口老齡化，AD發(fā)病率不斷升高，已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)亟需解決的難題[2]。目前，西醫(yī)對(duì)AD病因及發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，尚無根治AD的藥物[3]。中醫(yī)通過辨病與辨證相結(jié)合，抓住AD病機(jī)特點(diǎn)，隨證加減用藥，在改善AD患者學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能、提高生活和社會(huì)交往能力方面具有較確切的療效[4]。

前期運(yùn)用中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)治療AD證候組合中，以腎虛血瘀型最多，腎精虧虛、瘀血阻絡(luò)是AD的主要病機(jī)，補(bǔ)腎活血法是治療AD的基本方法[5]。提取腎虛血瘀型方劑核心藥對(duì)何首烏-丹參，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析藥物的化學(xué)成分、靶點(diǎn)和通路之間的關(guān)系，試圖從整體層面揭示中藥治療AD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? AD核心藥對(duì)挖掘及其化學(xué)成分篩選

借助中國中醫(yī)科學(xué)院研制的中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)（2.5版本）建立AD方劑數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘[6]，數(shù)據(jù)庫收集120位現(xiàn)代醫(yī)家的214個(gè)方劑，通過組方規(guī)律分析，獲得腎虛血瘀型方劑26個(gè)，涉及藥物164味，其中補(bǔ)腎藥中，何首烏出現(xiàn)20次，使用頻次最高;活血化瘀藥中，丹參出現(xiàn)16次，使用頻次最高。設(shè)置支持度為0.09，置信度為0.85時(shí)，何首烏-丹參配伍頻次最高（見表1）。關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，出現(xiàn)何首烏時(shí)，出現(xiàn)丹參的概率為88.6%。因此，選取何首烏-丹參為腎虛血瘀型AD的核心藥對(duì)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析。

1.2? 何首烏和丹參有效成分及其靶點(diǎn)的篩選

以“何首烏”“丹參”為關(guān)鍵詞，從TCMSP數(shù)據(jù)庫（中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)，http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）查詢何首烏-丹參2味中藥的有效成分，本研究基于ADME（藥物吸收、分布、代謝、排泄）模型，運(yùn)用OBioavail 1.1來預(yù)測有效成分的口服利用度（oral bioavailability， OB），對(duì)何首烏-丹參的化學(xué)組分進(jìn)行OB和類藥性（drug likeness， DL）篩選，并設(shè)置OB≥20%及DL≥18%作為篩選條件。借助美國國家生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫（NCBI）和Uniprot數(shù)據(jù)庫，將物種限定為“Homo sapiens”，將靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換成對(duì)應(yīng)的基因。

1.3? AD疾病相關(guān)基因檢索

在Drugbank數(shù)據(jù)庫（https：//www.drugbank.ca/）、DisGeNET數(shù)據(jù)庫（http：//www.disgenet.org/）和TTD數(shù)據(jù)庫（https：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）中篩選治療AD的相關(guān)靶點(diǎn)，以“Alzheimer”為檢索關(guān)鍵詞，并對(duì)檢索到的靶點(diǎn)進(jìn)行處理，之后將3個(gè)數(shù)據(jù)庫重復(fù)項(xiàng)去除從而獲得最終的疾病靶點(diǎn)。

1.4? 何首烏-丹參有效成分與AD共同靶點(diǎn)篩選及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將何首烏-丹參有效成分的相關(guān)靶點(diǎn)和AD的靶點(diǎn)導(dǎo)入OmicShare平臺(tái)（https：//www.omicshare.com/）找出何首烏-丹參活性成分與AD的交集靶點(diǎn)，再將這些交集靶點(diǎn)導(dǎo)入到STRING數(shù)據(jù)庫，選擇物種為“Homo sapiens”進(jìn)行操作，最小相互作用閥值設(shè)為“medium confidence=0.4”，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，即“何首烏-丹參-靶點(diǎn)-AD”網(wǎng)絡(luò)。

1.5? 關(guān)鍵靶基因的篩選

應(yīng)用Cytoscape 3.7.1軟件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵傩苑治?，?jì)算PPI網(wǎng)絡(luò)整體的度（degree）、緊密度（closeness）和中介性（betweenness）”，以betweenness、closeness和degree的均數(shù)為“閾值”，選取betweenness、closeness和degree同時(shí)在閾值之上的靶點(diǎn)為“關(guān)鍵靶點(diǎn)”，明確PPI網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.6? 關(guān)鍵靶基因的代謝通路與生物過程分析

為進(jìn)一步研究何首烏-丹參抗AD的作用情況，采用Metascape平臺(tái)對(duì)何首烏-丹參的AD靶點(diǎn)群進(jìn)行KEGG代謝通路富集分析，研究何首烏-丹參靶點(diǎn)的主要抗AD代謝通路;再進(jìn)行GO分子功能富集分析，詮釋何首烏-丹參靶點(diǎn)的抗AD生物過程，Metascape的平臺(tái)列表與背景均選擇“Homo Sapiens”進(jìn)行操作。篩選出AD與何首烏-丹參有效組分相關(guān)性前20的分子功能和前10的信號(hào)通路。

1.7? 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將何首烏-丹參有效成分、對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1構(gòu)建何首烏-丹參有效成分-基因靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.8? 體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

1.8.1? 細(xì)胞與試劑? 大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞（長沙贏潤生物技術(shù)有限公司，批號(hào)2015032007）;Aβ25-35（美國Sigma公司，批號(hào)053M4804V）;谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px，批號(hào)A00512）、丙二醛（MDA，批號(hào)A00312）和超氧化物歧化酶（SOD，批號(hào)A00112）（均購自南京建成生物研究所）;ELISA測定試劑盒（南京建成生物研究所南京建成生物研究所，IL-1β批號(hào)Y16036021，TNF-α批號(hào)Y17036022，IL-6批號(hào)Y14036607）;Nrf2、HO-1引物合成（由上海生工生物工程有限公司提供）;qRT-PCR試劑盒（中國北京康為世紀(jì)公司，批號(hào)50445）;總RNA抽提試劑Trizol（中國北京康為世紀(jì)公司，批號(hào)36320）;DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司，批號(hào)SH3002201）;10%新生小牛血清（Hyclone Lab，批號(hào)220118612）;PBS（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)SH30256）;FBS（吉泰遠(yuǎn)成生物科技有限公司，批號(hào)10099141）。何首烏和丹參飲片均購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，經(jīng)鑒定為正品。

1.8.2? 藥物制備? 采用水提醇沉法制備何首烏-丹參水提物：何首烏-丹參質(zhì)量比1∶2，水和藥材質(zhì)量比9∶1，煎煮3次，每次50 min，合并藥液，加入75%乙醇定容置于4 ℃冰箱過夜，過濾雜質(zhì)，低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到藥物干燥粉末（每克含生藥 3.6 g），4 ℃密封避光保存。

1.8.3? 細(xì)胞培養(yǎng)及分組干預(yù)? PC12細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基（含10%FBS、1%P/S），37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，分為5組。對(duì)照組：加入不含 FBS、P/S的DMEM中孵育24 h;模型組：予Aβ25-35（20 umol/L）孵育24 h[7];何首烏-丹參低劑量組（20 μg/mL）、中劑量組（40 μg/mL）、高劑量組（80 μg/mL）孵育24 h。

1.8.4? MTT法檢測細(xì)胞存活率? 將5×MTT用稀釋液稀釋成1×MTT溶液;每孔加50 μ L1×MTT溶液，37 ℃孵育4 h;棄上清液，每個(gè)孔加入200 μL DMSO，在平板搖床上搖2～3 min使其均勻。酶標(biāo)儀在570 nm波長處檢測每個(gè)孔PC12細(xì)胞的吸光度值。計(jì)算PC12細(xì)胞的存活率：

1.8.5? ELISA法檢測PC12細(xì)胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α水平? PC12細(xì)胞以1×107接種于96孔板中，100 μL/孔，當(dāng)80%融合時(shí)，分別給予各組處理因素，每組3個(gè)復(fù)孔。按實(shí)驗(yàn)要求處理完成后，收集上清液留作待測標(biāo)本。采用ELISA測定進(jìn)行檢測，按照 ELISA測定試劑盒的說明進(jìn)行操作。

1.8.6? 比色法檢測PC12細(xì)胞培養(yǎng)上清液SOD、GSH-Px和MDA? 冰上裂解細(xì)胞，離心，取上清，制成樣品溶液，按GSH-Px、MDA和SOD試劑盒說明書操作，檢測各項(xiàng)指標(biāo)。

1.8.7? 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測PC12細(xì)胞上清液Nrf2、HO-1mRNA表達(dá)? Trizol法提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。預(yù)變性引物見表2。

1.8.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理? 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“x±s”表示，采用SPSS 24.0軟件做統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)，方差齊者用LSD檢驗(yàn)（方差不齊者先將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使之方差齊），P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 何首烏-丹參有效成分的篩選

本研究共篩選出何首烏-丹參藥對(duì)中含有的24個(gè)有效化學(xué)組分，其中何首烏有效成分9個(gè)（HSW1-9），丹參有效成分15個(gè)（DS10-24）。見表3。

2.2? 有效成分-基因靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將篩選后的24個(gè)有效組分及274個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入 Cytoscape 3.7.1構(gòu)建“有效成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)”（圖1）。24個(gè)橢圓形表示何首烏-丹參的有效成分，274個(gè)“V”形為有效成分作用靶點(diǎn)，共有1 610條邊代表靶點(diǎn)和化學(xué)成分之間的相互作用，體現(xiàn)了何首烏-丹參多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。

2.3? AD相關(guān)基因

在Drugbank、DisGeNET和TTD數(shù)據(jù)庫AD的靶基因，共得到2 245個(gè)基因。

2.4? 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建圖

在Drugbank、DisGeNET和TTD數(shù)據(jù)庫檢索AD的靶點(diǎn)與何首烏-丹參作用的靶點(diǎn)有107個(gè)重復(fù)，這107個(gè)靶基因可能為何首烏-丹參抗AD的靶點(diǎn)。為研究各靶點(diǎn)在體內(nèi)的相互作用關(guān)系，尋找核靶點(diǎn)，將潛在靶點(diǎn)蛋白群進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)107個(gè)靶蛋白發(fā)生相互作用，產(chǎn)生786條代表蛋白之間相互作用的邊。見圖2。

2.5? 核心靶點(diǎn)分析結(jié)果

Cytoscape 3.7.1計(jì)算得到，PPI網(wǎng)絡(luò)平均度值為15.5，平均介數(shù)為3.66×10-2，平均緊密度為0.52，度值、介數(shù)和緊密度均超過平均值的靶蛋白共8個(gè)，依次為GNB1、MAOB、SOD2、APP、Caspase-3、AKT1、GSK3β、MAPK1，說明以上8個(gè)靶點(diǎn)在PPI網(wǎng)絡(luò)中處于關(guān)鍵位置，很可能是何首烏-丹參抗AD的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.6? KEGG和GO分析結(jié)果

通過GO數(shù)據(jù)庫分析，何首烏-丹參有效成分靶標(biāo)與AD疾病靶標(biāo)基因功能有炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)、老化、記憶、調(diào)亡過程等條目。見圖3。

通過KEGG數(shù)據(jù)庫富集何首烏-丹參治療AD關(guān)鍵靶標(biāo)所參與的通路主要涉及Nrf2/HO-1信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Toll-like receptor信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、AD等，說明何首烏-丹參可能主要通過調(diào)控炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、凋亡信號(hào)通路來防治AD。

2.7? 各組PC12細(xì)胞存活率比較

與對(duì)照組比較，模型組的PC12細(xì)胞的存活率明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）;與模型組相比，隨著何首烏-丹參濃度增加，PC12細(xì)胞存活率顯著上升（P<0.05，P<0.01），表明何首烏-丹參對(duì)PC12細(xì)胞具有明顯保護(hù)作用。見表4。

2.8? 各組PC12細(xì)胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-？琢水平

何首烏-丹參作用PC12細(xì)胞24 h后，與對(duì)照組比較，模型組PC12細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-？琢水平均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，何首烏-丹參中、高劑量組的PC12細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-？琢水平均明顯降低（P<0.05，P<0.01），表明何首烏-丹參對(duì)PC12細(xì)胞的炎癥反應(yīng)具有明顯的抑制作用。見表5。

2.9? 各組PC12細(xì)胞培養(yǎng)上清液SOD、GSH-Px和MDA比較

與對(duì)照組比較，模型組SOD、GSH-Px明顯活力降低，MDA含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，何首烏-丹參各組SOD、GSH-Px活力升高，MDA含量顯著降低（P<0.05，P<0.01），表明何首烏-丹參對(duì)PC12細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有明顯的抑制作用。見表6。

2.10? 各組PC12細(xì)胞上清液Nrf2、HO-1 mRNA的表達(dá)

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，何首烏-丹參各組能夠明顯提高Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)水平（P<0.05，P<0.01），說明何首烏-丹參能夠明顯促進(jìn)Nrf2、HO-1基因的表達(dá)。見表7。

3 討論

AD屬于中醫(yī)學(xué)“癡呆”“呆證”等范疇，清代程國彭《醫(yī)學(xué)心悟》云：“腎主智，腎虛則智不足，故喜忘其前言”。腦為髓之海，腦髓的充養(yǎng)依靠腎的藏精，腎中精氣充盈，髓海得養(yǎng)[8]。張景岳在《景岳全書》中說：“凡心有瘀血，亦令健忘。”腎虛可致血瘀。而血瘀又進(jìn)一步影響氣血運(yùn)行，且“瘀血不去，新血不生”，血瘀可致血虛;又“精血同源”，血虛可致腎精衰少，因而血瘀也可致腎虛?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究亦表明腎虛與血瘀常相伴而行：腎虛時(shí)血液處于高凝狀態(tài)，腎虛者常兼有血液流變學(xué)及微循環(huán)不同程度的異常[9]。全血黏度、血漿比黏度、紅細(xì)胞電泳、纖維蛋白原等與年齡的增加呈正比，血液朝著濃、黏、凝、聚的方向變化發(fā)展，微循環(huán)障礙遍及全身，出現(xiàn)不同程度的血瘀[10]。故AD其本為腎虛，其標(biāo)為血瘀，腎虛血瘀為其主要證型，補(bǔ)腎活血為基本治法。

本研究通過數(shù)據(jù)挖掘找出了治療腎虛血瘀型AD的一組核心藥對(duì)何首烏-丹參，該藥對(duì)是中醫(yī)臨床家廣泛使用的補(bǔ)腎活血藥物?！侗静菥V目》記載何首烏，氣溫，味苦澀，能固精益腎、養(yǎng)血益肝、健筋骨、烏須發(fā)，為滋補(bǔ)腎精良藥。據(jù)《何首烏錄》記載，何首烏能“長筋益精……延年”。丹參具有活血祛瘀、安神之功效?！兜崮媳静荨吩唬骸把a(bǔ)心定志，安神寧心，治健忘怔忡，驚悸不寐。”[11]何首烏、丹參配伍可補(bǔ)腎填精、活血化瘀，其功效契合AD腎虛血瘀的基本病機(jī)。研究借助系統(tǒng)藥理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和生物信息學(xué)方法來確定何首烏-丹參的活性化合物及與AD相關(guān)的靶點(diǎn)和通路。通過TCMSP平臺(tái)的OB和DL篩選，獲得何首烏-丹參的24個(gè)化合物，其中何首烏的有效成分中二苯乙烯苷的活性最高，可以作用39個(gè)靶點(diǎn)，而在丹參中活性最高的是丹參酮IIA，作用靶點(diǎn)達(dá)到了36個(gè)。研究發(fā)現(xiàn)[12-13]，二苯乙烯苷可降低BACE1、Caspase-3表達(dá)，減少Aβ產(chǎn)生，改善神經(jīng)元損傷，以及增加突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而發(fā)揮對(duì)AD的治療作用。研究[14-15]顯示，丹參酮IIA可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞增生，并進(jìn)一步降低IL-1β、TNF-α炎性細(xì)胞因子的表達(dá)以及抑制Tau蛋白過度磷酸化對(duì)抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮治療AD的作用。

將潛在有效成分和AD共同靶點(diǎn)相映射，得到藥物-疾病共同作用靶點(diǎn)107個(gè)。關(guān)鍵靶點(diǎn)居前三位的是GNB1、MAOB、SOD2。GNB1參與炎癥趨化因子調(diào)節(jié)通路，研究發(fā)現(xiàn)GNB1介導(dǎo)Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并促進(jìn)NF-κB的活化[16]。MAOB基因的異常表達(dá)或突變與AD的發(fā)生具有密切關(guān)系[17]。MAOB活性下降有利于保持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能，對(duì)機(jī)體的抗氧化及抗衰老有促進(jìn)作用[18]。基于對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷的AD治療研究中發(fā)現(xiàn)，SOD-2基因多態(tài)性與AD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[19]。GO富集分析結(jié)果表明，“何首烏-丹參”藥對(duì)的作用靶點(diǎn)分布在多種細(xì)胞組分中，以胞質(zhì)為主，通過多種結(jié)合方式參與生物進(jìn)程，包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、凋亡過程、積極調(diào)節(jié)白細(xì)胞激活等。隨著近年對(duì)AD發(fā)病機(jī)制的研究，許多學(xué)者指出，腦內(nèi)炎性反應(yīng)是AD發(fā)病的重要環(huán)節(jié)[20]。氧化應(yīng)激反應(yīng)在AD的發(fā)生和發(fā)展的過程中扮演著極其重要的角色[21]。在本研究篩選出的信號(hào)通路中，與何首烏-丹參有效靶點(diǎn)的關(guān)聯(lián)度最高的是Nrf2/HO-1信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn)[22-24]，Nrf2/HO-1信號(hào)通路是調(diào)控AD過程中炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激的重要信號(hào)通路，Nrf2/HO-1信號(hào)通路的激活可以顯著增加大腦皮質(zhì)和海馬組織的抗炎和抗氧化應(yīng)激反應(yīng)能力，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析結(jié)果，本研究選擇了何首烏-丹參對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的細(xì)胞存活率、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、Nrf2/HO-1信號(hào)通路的調(diào)控作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果表明何首烏-丹參能有效抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)，并提高其細(xì)胞存活率，上調(diào)Nrf2/HO-1信號(hào)通路，最終抑制AD的發(fā)展。

綜上，何首烏-丹參具有多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同治療AD的作用。本文基于系統(tǒng)藥理學(xué)研究何首烏-丹參對(duì)AD的具體作用靶點(diǎn)及機(jī)制，對(duì)今后臨床運(yùn)用中藥治療AD具有重要指導(dǎo)意義。

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（本文編輯? 蘇? 維）