王 瑩， 韓恩善,夏 瀟

甲狀腺癌(TC)是最常見的內(nèi)分泌相關(guān)腫瘤，其發(fā)病率呈上升趨勢。TC的影響范圍很廣，從青春期兒童到老年人均易發(fā)病，女性發(fā)病率是男性的3倍[1]。甲狀腺外科手術(shù)是TC的主要治療方法，盡管大多數(shù)患者經(jīng)治療后能取得良好的總體生存率，然而治療后總體預(yù)后較差，急須發(fā)現(xiàn)可用于TC診斷及預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物以改善預(yù)后。細(xì)胞周期蛋白 D1 (Cyclin D1)和增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)在多種腫瘤的組織細(xì)胞增殖和凋亡過程中具有重要調(diào)控作用，可引起細(xì)胞異常增殖，最終導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展[2-4]。但是目前關(guān)于兩種生物標(biāo)志物在TC中的臨床作用尚不完全清晰。因此本研究采用免疫組化方法檢測Cyclin D1和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達(dá)，并分析其與患者病理診斷及預(yù)后的相關(guān)性，從而評價其臨床的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2015年2月-2019年12月于本院治療的TC患者納入研究，共收集131例TC組織和癌旁組織。同時，還從接受甲狀腺全切術(shù)的良性甲狀腺病變患者中收集122份正常甲狀腺組織作為正常對照。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或監(jiān)護(hù)人知情同意。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理診斷為TC且其他器官無嚴(yán)重疾??；手術(shù)前3周未接受任何放射治療,且甲狀腺功能正常者；患者無其他惡性腫瘤，無放射史。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或肺轉(zhuǎn)移(并發(fā)其他腫瘤或原發(fā)性肺癌)；因嚴(yán)重的精神疾病或情緒不穩(wěn)定而無法合作者；患有心肌梗死、中風(fēng)、心力衰竭和心房纖顫等慢性疾病者；有放射碘治療史者。

1.2 方法：所有組織切片均保存于10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋。獲得5 μm厚的切片，并使用標(biāo)準(zhǔn)的鏈霉親和素生物素過氧化物酶免疫組織化學(xué)方法表達(dá)Cyclin D1和Ki-67。 Cyclin D1(abcam)和Ki-67(abcam)單克隆抗體用于研究。 其中，陰性對照用PBS代替一抗。免疫組化染色評分通過抗原抗體特異性反應(yīng)集合陽性細(xì)胞百分比及染色強弱計算，所有結(jié)果均采用同一評分標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 隨訪：治療后1個月通過門診進(jìn)行隨訪，并用電話和電子郵件與每位患者進(jìn)行聯(lián)系。 第1年每3個月隨訪1次，第2年每6個月隨訪1次，此后每年1次。 隨訪于2019年12月31日結(jié)束，隨訪率為100%。 記錄所有患者的生存狀況及所有相關(guān)信息，包括臨床數(shù)據(jù)和5年隨訪的數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件，使用χ2和Fisher精確概率檢驗分析Cyclin D1和Ki-67表達(dá)的比較，應(yīng)用Kaplan-Meier方法分析TC患者的5年生存率，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者一般資料：病例組中男性43例，女性88例；年齡15～78歲，平均(45.3±8.2)歲。對照組中男性38例，女性84例；年齡20～74歲，平均(47.1±8.7)歲。2組患者間的性別和年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05)。病例組腫瘤直徑≥1.0 cm 87例，直徑≤1.0 cm 44例。根據(jù)甲狀腺腫瘤的組織病理學(xué)類型，乳頭狀癌76例，濾泡狀癌29例，甲狀腺髓樣癌26例。131例患者中52例發(fā)生囊膜浸潤，其余79例無囊膜浸潤。根據(jù)國際癌癥控制聯(lián)盟(UICC)提出的腫瘤-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(TNM)分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ+Ⅱ期51例，Ⅲ+Ⅳ期80例；69例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，62例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2.2 Cyclin D1和Ki-67表達(dá)與TC患者臨床病例特征的關(guān)系：Cyclin D1和Ki-67表達(dá)在性別、年齡、組織病理學(xué)類型和莢膜浸潤方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 Cyclin D1表達(dá)陽性率明顯升高，腫瘤直徑≥1.0 cm的TC組織中的Ki-67表達(dá)陽性率低于腫瘤直徑<1.0 cm的TC組織中的表達(dá)(P<0.05)。與Ⅰ+Ⅱ期患者相比，Ⅲ+Ⅳ期Cyclin D1表達(dá)陽性率升高，而Ki-67表達(dá)陽性率降低(P<0.05)。 與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者具有更高的Cyclin D1表達(dá)陽性率和較低的Ki-67表達(dá)陽性率(P<0.05)，見表1。

表1 Cyclin D1和Ki-67表達(dá)與TC患者臨床病例特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 Cyclin D1和Ki-67表達(dá)與TC患者預(yù)后的關(guān)系:131例受試者隨訪5年后，53例生存，78例死亡，TC的死亡率為59.5%。Cyclin D1和Ki-67表達(dá)不同的患者Kaplan-Meier曲線見圖1(目錄后)。Cyclin D1陽性表達(dá)患者5年生存率為28.44%，顯著低于Cyclin D1陰性表達(dá)患者(P<0.05)。Ki-67陰性表達(dá)患者5年生存率為35.2%(37/105)，這與Ki-67陽性表達(dá)的TC患者5年生存率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

TC在我國為常發(fā)腫瘤，女性比男性的發(fā)病率高3倍，同時隨著年齡增加，其發(fā)病率逐漸增加，而由于臨床診治方法的缺乏，使其嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[5]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，為甲狀腺癌的早期診斷及預(yù)后判斷提供了可能。

Cyclin D1是腫瘤細(xì)胞所依賴的重要細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子，其過表達(dá)可用于多種腫瘤的診斷及預(yù)后判斷[6-8]。關(guān)高娃等[9]研究發(fā)現(xiàn)Cyclin D1表達(dá)與結(jié)腸癌患者的長期生存率顯著相關(guān)，其高表達(dá)是結(jié)腸癌預(yù)后的獨立危險因素。馮欽等[10]研究發(fā)現(xiàn)在口腔鱗癌中Cyclin D1表達(dá)顯著升高，同時影響患者的總體生存率。蔣艷等[11]研究發(fā)現(xiàn)Cyclin D1在良性葉狀腫瘤與纖維腺瘤的免疫表型存在差異，可用于二者的診斷及預(yù)后評估。有研究表明[12-13]，Cyclin D1表達(dá)可用于侵襲性分化型甲狀腺癌的臨床診斷，同時與分化型甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在甲狀腺癌中，Cyclin D1表達(dá)在性別、年齡、組織病理學(xué)類型和莢膜浸潤方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05)。 然而，Cyclin D1表達(dá)陽性率與腫瘤直徑、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，同時其表達(dá)與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)。本研究進(jìn)一步證實Cyclin D1在甲狀腺癌中的作用，為其應(yīng)用于甲狀腺癌臨床診斷及預(yù)后評估提供可能。

Ki-67于細(xì)胞核內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，同時隨著細(xì)胞周期的變化，Ki-67的表達(dá)呈動態(tài)變化過程，其已作為多種腫瘤的生物標(biāo)志物應(yīng)用于臨床診斷及預(yù)后評估。在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中[14]，Ki-67表達(dá)增高，同時與患者臨床病例特征及預(yù)后顯著相關(guān)，可作為患者預(yù)后的獨立危險因素。張國臣等[15]研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67在膠質(zhì)瘤中陽性表達(dá)率較高，尤其是高級別膠質(zhì)瘤，可用于膠質(zhì)瘤療效評估的重要指標(biāo)。在老年胃癌中[16]，Ki-67在癌前病變及早期胃癌中表達(dá)增高，提示其與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為老年人胃癌的早期診斷指標(biāo)。周冠磊等[17]研究發(fā)現(xiàn)，在甲狀腺微小乳頭狀癌中，Ki-67蛋白陽性表達(dá)率僅與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可判斷疾病的臨床進(jìn)展。本研究發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌中，Ki-67表達(dá)在性別、年齡、組織病理學(xué)類型和莢膜浸潤方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05)，而與腫瘤直徑、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，同時其表達(dá)與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)。