許志 謝夢洲 許必祥 劉雪輝 賀靜 王筱宇

〔摘要〕 目的 觀察鶩芪口服液聯(lián)合化療對Lewis肺癌小鼠化療效果的影響。方法 將腋下接種Lewis肺癌細胞小鼠隨機分為6組，分別為模型對照組、化療組、化療+貞芪扶正顆粒組（貞芪扶正組）、化療+鶩芪口服液低劑量組（鶩芪低劑量組）、化療+鶩芪口服液中劑量組（鶩芪中劑量組）、化療+鶩芪口服液高劑量組（鶩芪高劑量組），同時設(shè)立正常對照組，各組按照給藥方法進行連續(xù)給藥21 d。給藥后每隔3 天，對Lewis肺癌小鼠的腫瘤的長徑和短徑進行測定、給藥21 d后對血液中炎性細胞WBC、Neu、Lym、Mon、Eos、Bas的數(shù)目進行測定，并對胸腺、脾臟、胃進行組織病理學檢查。結(jié)果 與化療組比較，鶩芪低、中劑量組小鼠給藥第15～21天腫瘤體積減少;鶩芪高劑量組小鼠給藥第21天腫瘤體積明顯減少（P<0.05）。與化療組比較，鶩芪低、中、高劑量組小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos數(shù)目明顯減少（P<0.05或P<0.01）。鶩芪口服液聯(lián)合化療能明顯改善小鼠脾臟紅髓造血情況，改善胸腺萎縮和局灶性纖維化。結(jié)論 鶩芪口服液聯(lián)合化療用藥對Lewis肺癌荷瘤小鼠具有明顯的增效減毒作用。

〔關(guān)鍵詞〕 鶩芪口服液;化療;腫瘤體積;增效減毒;炎性細胞

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.05.008

The Study About Effect-enhancing and Toxicity-reducing Effects of Wuqi Oral Liquid

Combined with Chemotherapy in Mice with Lewis Lung Cancer

XU Zhi1， XIE Mengzhou2*， XU Bixiang1， LIU Xuehui1， HE Jing1， WANG Xiaoyu1

（1. Hunan Tianjin Pharmaceutical Co.， Ltd. Changsha， Hunan 410205， China; 2. Hunan University of

Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy on the chemotherapy effect of Lewis lung cancer mice. Methods Mice inoculated with Lewis lung cancer cells under the armpits were randomly divided into 6 groups： model control group， chemotherapy group， chemotherapy+Zhenqi Fuzheng granule group （Zhenqi Fuzheng group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid low-dose group （Wuqi low-dose group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid medium-dose group （Wuqi medium-dose group）， chemotherapy+Wuqi Oral Liquid high-dose group （Wuqi high-dose group）， and a normal control group was set up at the same time， each group was dealt with the administration method. The administration of drug was continued for 21 days. The long and short diameters of the tumors in Lewis lung cancer mice were measured every 3 days after the administration. After 21 days of administration， the blood inflammatory cells WBC， Neu， Lym， Mon， Eos and Bas was measured， and histopathological examination was performed on the thymus， spleen， and stomach. Results Compared with the chemotherapy group， the volume of tumors in mice of Wuqi low and medium doses group decreased from 15 to 21 days after administration; the volume of tumors in mice of Wuqi high-dose group was significantly reduced on the 21st day （P<0.05）. Compared with the chemotherapy group， the number of WBC， Neu， Mon， Eos inflammatory cells in the blood of mice of Wuqi low， medium and high doses group significantly reduced （P<0.05 or P<0.01）. Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy can significantly improve the hematopoiesis of the red marrow of the mouse spleen， and improve thymic atrophy and focal fibrosis. Conclusion Wuqi Oral Liquid combined with chemotherapy has a significant effect of increasing efficacy and reducing toxicity in mice with Lewis lung cancer.

〔Keywords〕 Wuqi Oral Liquid; chemotherapy; tumor volume; effect-enhancing and toxicity-reducing; inflammatory cells

腫瘤化療是目前癌癥治療的主要手段之一，化療藥物進入機體后廣泛分布于肝臟、腎臟、血液等組織器官，并主要由肝臟、腎臟代謝和排出[1]。因此，化療藥物在殺滅腫瘤細胞的同時，也不可避免地損傷了機體正常的細胞，表現(xiàn)出一系列化療的不良反應，如免疫功能下降、骨髓抑制、肝臟毒性、腎臟毒性、消化道障礙等[2-4]。中醫(yī)學認為化療屬于以毒攻毒的治法[5]，最易傷人正氣，而表現(xiàn)出機體虛弱等癥狀。在全球癌癥（GLOBOCAN）2018數(shù)據(jù)庫中，每年全球估計有209萬新病例，176萬人死于肺癌[6]。鶩芪口服液為湖南天勁制藥有限責任公司獨家品種，以鴨為君藥入藥，功效為養(yǎng)陰益氣、補虛扶正，能夠提升機體正氣。本次采用Lewis肺癌細胞接種小鼠，進行腫瘤小鼠模型制備，研究鶩芪口服液聯(lián)合化療藥物對增加化療耐受性的影響，貞芪扶正顆粒是化療期間常用的中成藥[7]，對化療所致的毒性有一定的減毒作用，此次研究以此藥作為陽性對照藥。

1 材料

1.1? 實驗動物

雄性C57BL/6J小鼠140只，體質(zhì)量12～15 g，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物質(zhì)量合格證號：43004700057020、43004700060135，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2016-0002;在湖南省藥物安全評價研究中心屏障環(huán)境飼養(yǎng)，實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2015-0016。

1.2? 主要藥品

鶩芪口服液（10 mL/支，批號：1812012，湖南天勁制藥有限責任公司）;貞芪扶正顆粒（15 g/袋，批號：20180403，湖南時代陽光藥業(yè)股份有限公司）;順鉑注射液（2 mL∶10 mL，批號：181204，江蘇豪森藥業(yè)集團有限公司）;依托泊苷注射液（5 mL∶0.1 g，批號：CB1K7005，齊魯制藥（海南）有限公司）;0.9%氯化鈉注射液（批號：18073101C，湖南康源制藥有限公司）

1.3? 主要儀器

BC-5000Vet型獸用五分類血液細胞分析儀（邁瑞公司）;游標卡尺（永康正豐五金有限公司）;ME2002E型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。

2 方法

2.1? 分組及劑量設(shè)計

接種Lewis肺癌細胞小鼠，根據(jù)瘤體體積隨機分為6組，每組20只，分別為：模型對照組、化療組（依托泊苷3.0 mg/kg+順鉑2.0 mg/kg）、化療+貞芪扶正顆粒組（貞芪扶正組，3.9 g/kg）、化療+鶩芪口服液低劑量組（鶩芪低劑量組）（2.6 mL/kg）、化療+鶩芪口服液中劑量組（鶩芪中劑量組，5.2 mL/kg）、化療+鶩芪口服液高劑量組（鶩芪高劑量組，10.4 mL/kg）。另外取20只未接種Lewis肺癌細胞小鼠作為正常對照組。鶩芪口服液成人臨床劑量為10 mL，2次/d，20 mL/d，按體表面積法換算動物等效劑量為2.6 mL/kg。鶩芪口服液低、中、高劑量分別為2.6、5.2、10.4 mL/kg。貞芪扶正顆粒成人擬推薦劑量為15 g，2次/d，30 g/d，按體表面積法換算動物等效劑量為3.9 g/kg。順鉑注射液臨床使用15 mg/d，換算小鼠等效劑量為2 mg/kg。經(jīng)查閱文獻，依托泊苷注射液劑量為3.0 mg/kg[8]。

2.2? 給藥方法

除正常對照組與模型對照組外，化療組、貞芪扶正組、鶩芪低劑量組、鶩芪中劑量組、鶩芪高劑量組動物均腹腔注射給予化療藥物，1次/d，連續(xù)給藥7 d，同時貞芪扶正組、鶩芪低劑量組、鶩芪中劑量組、鶩芪高劑量組分別給予相應濃度藥液，給予體積為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥21 d，正常對照組、模型對照組、化療組小鼠分別灌胃給予同體積蒸餾水。

2.3? 測定方法

2.3.1? 公式法測定瘤體體積? 給藥后每隔3 d用游標卡尺檢測腫瘤的長徑和短徑，根據(jù)公式計算腫瘤體積并繪制腫瘤生長曲線。計算公式為：腫瘤體積=ab2/2（a為長徑，b為短徑）[9]。

2.3.2? 血液細胞分析儀測定血液中炎性細胞數(shù)目? 造模后及末次給藥后采用BC-5000Vet型獸用五分類血液細胞分析儀進行血常規(guī)功能檢測，檢測指標為：白細胞（white blood cell， WBC）、中性粒細胞（neutrophil， Neu）、淋巴細胞（lymphocyte， Lym）、單核細胞（monocytes， Mon）、嗜酸性粒細胞（eosinophils， Eos）、嗜堿性粒細胞（basophils， Bas）。

2.3.3? 蘇木素-伊紅（HE）染色法觀測組織病理學變化? 末次給藥后，對正常對照組、模型對照組、化療組、貞芪扶正組、鶩芪低劑量組、鶩芪中劑量組、鶩芪高劑量組進行固定、包埋、切片、HE染色、顯微鏡觀察，進行組織病理學檢查，受檢臟器為：胸腺、脾臟、胃。

2.4? 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0 進行統(tǒng)計分析，計量資料采用“x±s”表示，用Levens test方法檢驗正態(tài)性和方差齊性，如果符合正態(tài)性和方差齊性（P>0.05），用單因素方差分析（ANOVA）和LSD檢驗進行統(tǒng)計分析;如果符合正態(tài)性和方差齊性，則用Kruskal-Wallis檢驗，如果Kruskal-Wallis檢驗有統(tǒng)計學意義（P≤0.05），則用Dunnetts Test（非參數(shù)方法）進行比較分析，統(tǒng)計學意義的水平設(shè)定為P<0.05。

3 結(jié)果

3.1? 鶩芪口服液對Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤體積的影響

模型對照組小鼠腫瘤體積在第0～18天持續(xù)增長，在第21天有所減少;與化療組比較，鶩芪低劑量組、鶩芪中劑量組、鶩芪高劑量組，小鼠在給藥第15～21天腫瘤體積減小;與化療組比較，鶩芪高劑量組小鼠在給藥第21天腫瘤體積明顯減少（P<0.05）。見圖1。

3.2? 鶩芪口服液對Lewis肺癌荷瘤小鼠炎性細胞數(shù)目影響

給藥21 d后，與正常對照組比較，模型對照組小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos、Bas明顯升高（P<0.01）。與模型對照組比較，化療組小鼠血液中Bas明顯減少（P<0.05）;貞芪扶正組小鼠血液中WBC、Neu、Bas明顯減少（P<0.05）;鶩芪低、中、高劑量組小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos、Bas明顯減少（P<0.05或P<0.01）。與化療組比較，貞芪扶正組小鼠血液中WBC、Neu明顯減少（P<0.05）;鶩芪低、中、高劑量組小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos明顯減少（P<0.05或P<0.01）;鶩芪中、高劑量組小鼠血液中Bas明顯減少（P<0.05或P<0.01）。見表1。

3.3? 鶩芪口服液對Lewis肺癌荷瘤小鼠脾臟、胸腺和胃組織病理學檢查

正常對照組小鼠脾臟、胸腺、胃組織學結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯異常。模型對照組、化療組小鼠脾臟紅髓造血明顯，細胞類型多樣，紅系、粒系、巨核細胞均增生，胸腺萎縮、纖維化，脂肪組織包裹;貞芪扶正組小鼠脾臟白髓淋巴組織尚存，紅髓中度造血，細胞類型多樣，粒系為主，胸腺萎縮、纖維化，脂肪組織包裹;鶩芪低劑量組小鼠白髓淋巴組織尚存，紅髓輕度造血，胸腺萎縮、纖維化，脂肪組織包裹;鶩芪中高劑量組小鼠白髓淋巴組織尚存，紅髓輕度造血，胸腺輕度萎縮，局灶性纖維化。各組小鼠胃組織均未見明顯異常。見圖2-4。

4 討論

化療為目前治療癌癥的主要手段之一[10]，化療藥物治療腫瘤易產(chǎn)生骨髓抑制、白細胞下降、腹瀉等副作用，為了降低副反應發(fā)生率，臨床上建議使用中藥輔助治療[11]，并且大量的臨床實踐已經(jīng)證明中醫(yī)藥輔助化療能減少化療毒性的發(fā)生率，減輕化療毒性程度，保證化療的順利完成[12]。

全身炎癥反應與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[13]。Balkwill等[14]研究表明，宿主的炎性細胞可促進腫瘤生長、進展并抑制宿主的免疫系統(tǒng)，實驗中減少宿主的炎性細胞介質(zhì)或阻斷其作用通路可以抑制腫瘤的進展。中性粒細胞作為一種重要的炎性細胞，其絕對值可以反映腫瘤導致機體的炎癥反應。胸腺和外周免疫器官均有調(diào)節(jié)作用，脾臟具有非特異性和特異性免疫功能，機體的免疫狀態(tài)與惡性腫瘤的發(fā)生、進展、治療措施的效果和患者的存活時間均密切相關(guān)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，免疫功能往往被抑制，而對免疫器官化療過程中的保護有助于腫瘤的治療[15]。

鶩芪口服液主要成份是鴨（去毛，內(nèi)臟留胃、腸、肝）、丹參、女貞子、黃芪、山楂、大棗、枸杞子、甘草，具有養(yǎng)陰益氣和補虛扶正作用[16]。本研究中發(fā)現(xiàn)鶩芪口服液聯(lián)合化療藥物使用能夠明顯減少Lewis肺癌荷瘤小鼠血液中WBC、Neu、Mon、Eos等炎性細胞數(shù)目，同時，鶩芪中、高劑量組可明顯減少Bas數(shù)量，緩解腫瘤發(fā)展的分期和進程，能夠明顯改善Lewis肺癌小鼠脾臟、胸腺的組織病理學變化，可在一定程度上緩解免疫器官的損傷。

綜上所述，鶩芪口服液在腫瘤化療過程中能夠發(fā)揮中藥在減輕化療副反應方面的優(yōu)勢，因此，鶩芪口服液聯(lián)合化療對Lewis肺癌荷瘤小鼠具有明顯的增效減毒作用。

參考文獻

[1] BANDU R， AHN H S， LEE J W， et al. Distribution study of cisplatin in rat kidney and liver cancer tissues by using liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry[J]. Journal of Mass Spectrometry： JMS， 2015， 50（6）： 844-853.

[2] 曹思思，張畢奎.順鉑肝毒性機制的研究進展[J].中南藥學，2016， 14（6）：641-643.

[3] TOMINAGA T， NONAKA T， SUMIDA Y， et al. The C-reactive protein to albumin ratio as a predictor of severe side effects of adjuvant chemotherapy in stage III colorectal cancer patients[J]. PLoS One， 2016， 11（12）： e0167967.

[4] LI S L， LIU J N， VIRNIG B A， et al. Association between adjuvant chemotherapy and risk of acute kidney injury in elderly women diagnosed with early-stage breast cancer[J]. Breast Cancer Research and Treatment， 2017， 161（3）： 515-524.

[5] 曹利平，陳國慶.肺癌放化療后中醫(yī)診療思路[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2012，

32（3）：69-70.

[6] FERLAY J， COLOMBET M， SOERJOMATARAM I， et al. Estimating the global cancer incidence and mortality in 2018： GLOBOCAN sources and methods[J]. International Journal of Cancer， 2019， 144（8）： 1941-1953.

[7] 黃常新，陳靈芝，趙建剛，等.貞芪扶正顆粒對結(jié)直腸癌術(shù)后化療骨髓毒性的保護作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2008，14（5）：441-446.

[8] 李? 寨，陸? 榕，李榮珊，等.依托泊苷亞微乳在大鼠體內(nèi)的藥動學研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2015，30（8）：938-942.

[9] 李? 曜，王志恒，李鵬鵬，等.三維可視化技術(shù)與公式法測定肝臟腫瘤體積的對比研究[J].腹部外科，2019，32（1）：17-22.

[10] 王安峰，劉? 明，翟福山，等.益氣健脾法防治惡性腫瘤放化療毒副作用[J].河北中醫(yī)，2008，30（9）：935-936.

[11] 顧玉彪，馮? 輝，鄭? 林，等.加味血府逐瘀湯聯(lián)合利伐沙班對全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后深靜脈血栓發(fā)生的影響[J].中醫(yī)雜志，2018，59（18）：1578-1582.

[12] 甄永蘇.抗腫瘤藥物研究與開發(fā)[M].北京：化學工業(yè)出版社，2004.

[13] GOH B K， CHOK A Y， ALLEN J C Jr， et al. Blood neutrophil-to-lymphocyte and platelet-to-lymphocyte ratios are independent prognostic factors for surgically resected gastrointestinal stromal tumors[J]. Surgery， 2016， 159（4）： 1146-1156.

[14] BALKWILL F， MANTOVANI A. Inflammation and cancer： Back to Virchow？[J]. The Lancet， 2001， 357（9255）： 539-545.

[15] SALEHI-RAD R， DUBINETT S M. Understanding the mechanisms of immune-evasion by lung cancer in the context of chronic inflammation in emphysema[J]. Journal of Thoracic Disease， 2019， 11（2）： 382-385.

[16] 陳建軍.18例高血壓并糖尿病患者用鶩芪口服液治療的臨床分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志，2020，8（36）：186.