◎ 苗育可，王然然，王楠楠，董建鋒

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

隨著人們對動物源食品由需求型向質(zhì)量型的轉(zhuǎn)變，動物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關(guān)注的一個焦點，也是影響動物源性食品安全的重要因素之一。某些生產(chǎn)者為提高存活率會給批量生產(chǎn)的食用動物使用獸藥，但使用方法不當(dāng)、休藥期結(jié)束前屠宰動物或動物接觸含有抗生素的污水等都可能造成獸藥殘留超標(biāo)，蓄積在動物的細(xì)胞組織器官內(nèi)，或進(jìn)入乳汁、蛋中。喹諾酮類藥物是以4-喹諾酮為基本結(jié)構(gòu)的人工合成的抗菌藥，是使用較多的獸藥抗生素[1]。過量可引起人體的腸胃不適，甚至還會引起中樞系統(tǒng)的不良反應(yīng)。

我國有國家強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)、國家推薦標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)部公告和衛(wèi)生部公告等多種類型的食品標(biāo)準(zhǔn)。目前我國關(guān)于動物源性食品中喹諾酮類藥物殘留檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)行有效的有30余條，這些標(biāo)準(zhǔn)種類繁多，不同動源性類基質(zhì)提取方法各異、儀器方法不同，檢測喹諾酮的種類數(shù)量也不同。目前最常用的為GB/T 21312—2007與GB/T 20366—2006，均為高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，本文結(jié)合長期檢測經(jīng)驗，以兩種標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，優(yōu)化整合出一套便捷高效的喹諾酮類藥物殘留的實驗方案[2-3]。本文實施后對前處理過程的優(yōu)化，可簡化實驗步驟，最大程度涵蓋動物源性基質(zhì)的種類，降低實驗系統(tǒng)誤差，大大提高工作效率，避免浪費，節(jié)省實驗資金。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品：檢測樣品來自河北省承德市雙灤區(qū)超市，包括雞肉、豬肉、牛肉、雞蛋和牛奶。

試劑：冰乙酸（99.5%，凱通化學(xué)試劑公司）；正己烷（98.0%，凱通化學(xué)試劑公司）；檸檬酸（99.5%，凱通化學(xué)試劑公司）；甲酸（99.0%，羅恩試劑公司）；氫氧化鈉（96.0%，紅巖試劑廠）；乙二胺四乙酸二鈉（99.0%，羅恩試劑公司）；磷酸氫二鈉（99.0%，泰興試劑廠）；甲醇（色譜級，美國Fisher公司）；乙腈（色譜級，美國Fisher公司）；娃哈哈純凈水。

標(biāo)準(zhǔn)品：氧氟沙星（純度99.7%，壇墨質(zhì)檢）。

1.2 儀器

ME303T/02型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KS-500DE型超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）、HC-3018R高速冷凍離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（AB SCIEX公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士布奇公司）和氮吹儀（美國Biotage公司）。

1.3 儀器條件

本文所采用的儀器流動相為0.2%甲酸水溶液和乙腈，流速為0.2 mL·min-1，梯度洗脫情況見表1。

表1 流動相梯度洗脫表

1.4 樣品前處理

樣品前處理是檢驗檢測過程中重要的試驗步驟，其占據(jù)整個分析過程約60%的時間，主要的分析誤差都來自樣品前處理環(huán)節(jié)，樣品前處理直接影響到檢驗檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文主要依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB/T 21312—2007）與《動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20366—2006），在其中選取了3種喹諾酮類藥物殘留檢測前處理方法作為比較。

1.5 試驗方法

1.5.1 相同基質(zhì)

以豬肉為基質(zhì)，氧氟沙星為例。①前處理方法1。使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化。稱取試樣加入20 mL 0.1 mol·L-1的EDTA Mcllvaine緩沖溶液，進(jìn)行旋渦混合超聲離心后，使用HLB固相萃取柱進(jìn)行凈化。使用1 mL 0.2%甲酸水溶液渦旋溶解。供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定[2]。②前處理方法2。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸 稱取均質(zhì)試樣加入20 mL甲酸-乙腈溶液進(jìn)行提取，均質(zhì)離心后，用20 mL甲酸-乙腈溶液再重復(fù)提取一次，合并上清液。使用25 mL乙腈飽和的正己烷進(jìn)行凈化，旋蒸氮吹，準(zhǔn)確加入1.0 mL甲酸-乙腈溶液溶解殘渣定容，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定[3]。③前處理方法3。根據(jù)QuEchERS方法的要求，進(jìn)行提取凈化，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.5.2 不同基質(zhì)

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，以氧氟沙星為例，以豬肉、雞肉、牛肉、雞蛋和牛奶[4]為基質(zhì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種前處理方法的回收率比較

由圖1知，使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化，最終回收率為31.2%。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，最終回收率為74.3%。采用QuEchERS方法最終回收率為75.0%[5]。

圖1 3種前處理方法的回收率圖

2.2 5種基質(zhì)的回收率比較

由圖2知，豬肉回收率為73.2%，雞肉回收率為72.9%，牛肉回收率為75.4%，雞蛋回收率為69.1%，牛奶回收率為66.4%。結(jié)論為畜禽類基質(zhì)回收率較好，雞蛋、牛奶較低。

圖2 5種基質(zhì)的回收率圖

3 結(jié)論與討論

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸和QuEchERS方法回收率相差不大，且二者均比使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化的方法回收率高。使用固相萃取柱在具體實驗過程中對于目標(biāo)物質(zhì)的損失更大，且更加耗時。而對于畜禽肉、雞蛋牛奶來說，使用QuEchERS方法或0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸的方法，回收率較高，試驗效率較高。此結(jié)果為喹諾酮藥物殘留檢測方法提供技術(shù)支撐。