鄭夢莎，王海軍

病理診斷是臨床疾病診斷中的“金標(biāo)準(zhǔn)”，也是疾病診斷中的最終結(jié)果。組織切片質(zhì)量優(yōu)良直接影響病理醫(yī)師對結(jié)果的判讀，制片的關(guān)鍵步驟是組織處理，其包含組織固定、脫水、透明、浸蠟的過程。本實驗對新型組織脫水包埋盒與傳統(tǒng)組織脫水包埋盒進行對比，觀察單位時間內(nèi)的固定效果，間接反應(yīng)單位時間內(nèi)的試劑交換量，提高組織的脫水效率。

1 材料與方法

1.1 材料豬肝臟和腎臟組織；新型組織脫水包埋盒，由杭州海世嘉公司遵循浙江大學(xué)實用新型專利(專利號ZL201620582691.5)生產(chǎn)。傳統(tǒng)組織脫水包埋盒為常見組織脫水包埋盒(圖1)；脫水機使用賽默飛ES脫水機。新型組織脫水包埋盒在傳統(tǒng)組織脫水包埋盒的基礎(chǔ)上，其盒身側(cè)壁多了4個開口，開口深度達(dá)2 mm，合上蓋子后能保留1 mm的試劑交換口(圖2)。

圖1 傳統(tǒng)組織脫水包埋盒 圖2 新型組織脫水包埋盒

1.2 方法

1.2.1豬腎、肝臟組織固定 分別取豬腎、肝臟正常大小的組織塊[1]，大小1.5 cm×1 cm×0.3 cm，以及過大、過厚的組織塊[2]，大于1.5 cm×1 cm，厚度>0.3 cm，分別放入新型組織脫水包埋盒和傳統(tǒng)組織脫水包埋盒中，標(biāo)記為腎臟實驗組和肝臟實驗組(表1、2)。標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定[3]，推薦固定時間>5 h。本實驗固定時間為6 h，分別在2、4、6 h等3個時間點觀察對應(yīng)包埋盒中組織塊的狀態(tài)。

表1 豬腎臟組織實驗標(biāo)記方法

1.2.2新型組織脫水包埋盒切片穩(wěn)定性實驗 將豬腎、肝臟組織進行脫水、浸蠟處理，最后通過包埋制成蠟塊，對使用新型組織脫水包埋盒的組織蠟塊進行切片，觀察蠟塊在切片過程中的穩(wěn)定性。

表2 豬肝臟組織實驗標(biāo)記方法

1.3 結(jié)果判讀新鮮組織均經(jīng)10%中性福爾馬林滲透浸漬，1 h滲透深度可達(dá)0.2～0.3 cm，組織顏色由鮮紅色逐漸變?yōu)榛野咨玔4]。經(jīng)過較長時間的固定液滲透浸漬，醛基與氨基基團形成可逆的羥甲基衍生物和穩(wěn)定的亞甲基橋，從而使甲醛和組織中的蛋白質(zhì)發(fā)生廣泛的交聯(lián)，使組織變硬[5]。

2 結(jié)果

2.1 豬腎、肝臟組織固定實驗(1)固定2 h后的組織狀態(tài)：新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織切面灰白色部分比例明顯高于傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織；兩種組織脫水包埋盒內(nèi)組織表面均呈灰白色，無明顯差異(圖3)。(2)固定4 h后的組織狀態(tài)：新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織切面灰白色部分比例高于傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織，但差異縮?。挥|摸新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織硬度明顯大于傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織。(3)固定6 h后的組織狀態(tài)：兩種組織脫水包埋盒內(nèi)組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異；觸摸新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織比傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織質(zhì)地稍硬(圖4)。肝臟組織實驗結(jié)果與腎臟組織實驗結(jié)果一致。

圖3 A.腎過大、過厚組織固定2 h：新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織(腎1-1)切面灰白色部分比例明顯高于傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織(腎3-1)；B.腎正常大小組織固定2 h：新型組織脫水包埋盒內(nèi)組織(腎2-1)切面灰白色部分比例明顯高于傳統(tǒng)組織脫水包埋盒內(nèi)組織(腎4-1) 圖4 A.腎過大、過厚組織固定6 h：兩種組織(腎1-3、腎3-3)脫水包埋盒內(nèi)組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異；B.腎正常大小組織固定6 h：兩種組織(腎2-3、腎4-3)脫水包埋盒內(nèi)組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異

2.2 新型組織脫水包埋盒切片穩(wěn)定性實驗使用新型組織脫水包埋盒的組織蠟塊在切片時未發(fā)現(xiàn)跳片、震顫等，切片不穩(wěn)定現(xiàn)象。

3 討論

良好的病理組織切片是保證病理診斷質(zhì)量或準(zhǔn)確的基礎(chǔ)。在制片流程中，組織脫水處理的效果直接影響組織切片和染色質(zhì)量及后續(xù)的免疫組化檢測結(jié)果[6-8]。因此，保證良好的脫水流程是臨床工作中的關(guān)鍵步驟。

目前，脫水機組織處理缸主要有兩種運行方式：(1)以賽默飛公司為代表的組織旋轉(zhuǎn)運動型；(2)以徠卡公司為代表的試劑攪拌旋轉(zhuǎn)運動型。無論何種運動方式，其目的均為促進試劑流動，增加與組織的接觸以達(dá)到更快滲透和交換的作用[9]。本實驗應(yīng)用新型組織脫水包埋盒，通過在原傳統(tǒng)包埋盒的側(cè)壁上增加4個小口，使組織處理時試劑不僅可從原前后壁柵欄狀開口進入包埋盒，也可從側(cè)壁開口進入包埋盒以浸漬、滲透組織，特別是在組織塊過大、過厚，且在脫水架內(nèi)緊密排放影響試劑從前后開口進入包埋盒時，能起更好的處理作用。

本實驗通過觀察豬腎、肝臟組織在固定液中浸泡的過程，發(fā)現(xiàn)各組在相同固定時間有不同的固定效果。實驗中固定效果存在差異說明固定液進出組織(包埋盒)的量不同，本組新型組織脫水包埋盒的盒身側(cè)壁多了4個開口，使組織在脫水機內(nèi)進行處理時，試劑不僅可以從包埋盒前后壁進出，還可以從包埋盒側(cè)壁進出，增加單位時間內(nèi)包埋盒內(nèi)的試劑交換量，提高單位時間內(nèi)的組織處理效果或縮短組織處理時間。

日常工作中使用的切片機樣本夾是對包埋盒4個角進行固定，保持蠟塊在切片時的穩(wěn)定性。本實驗在側(cè)壁上含有4個開口的新型組織脫水包埋盒在切片時與普通組織脫水包埋盒穩(wěn)定性一致，不存在跳片、震顫等切片不穩(wěn)定現(xiàn)象。

目前，新型組織脫水包埋盒能提高組織脫水效率，投入日常工作中，單位時間內(nèi)能獲得更好的脫水效果，相同組織處理質(zhì)量要求下可縮短部分時間。