雷雨，劉偉，包黎

作者單位：武漢市精神衛(wèi)生中心精神科，湖北 武漢 430022

精神分裂癥（episode schizophrenia，ES）是一種慢性、遺傳性精神障礙，病因目前尚未明確，主要有免疫和病毒學(xué)假說，ES 病人臨床癥狀主要有陽性癥狀、陰性癥狀及認知功能障礙、情緒異常等。首發(fā)的精神分裂癥病人一般較為年輕、病程短、社會功能缺損程度較輕，其病人長期服用抗精神藥物會引起心血管死亡，對病人病程發(fā)展和預(yù)后有著深遠影響 ，但目前缺乏ES診斷相關(guān)的生物學(xué)指標。陽性與陰性癥狀量表（positive negative syndrome ccale ，PANSS）評分是為評定不同類型精神分裂癥病人嚴重程度而設(shè)定的標準化量表評分，主要適用于成年人，由經(jīng)量表使用訓(xùn)練的精神科醫(yī)師對病人做檢查，再綜合有關(guān)信息進行評定，但一般ES病人臨床癥狀與其它類精神疾病相似 ，難以正確判斷。 微小 RNA（microRNA，miRNA）在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量非常豐富，可作為新的調(diào)節(jié)因子參與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的各個階段，目前許多種 miRNA 已被證實在 ES 病人體內(nèi)異常表達，可能影響 ES 發(fā)病，其中 mir-24-2、mir-30b 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神類疾病病人中表達異常，進而引發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，可能影響疾病發(fā)生。但是目前仍未有關(guān)于 ES 病人體內(nèi)血清 mir-24-2、mir-30b 表達水平的研究。因此，本研究分別通過檢測首發(fā) ES（first ES，F(xiàn)ES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b 表達水平，探討 FES 病人血清中mir-24-2、mir-30b 水平與 PANSS 評分的關(guān)系，為血清mir-24-2、mir-30b 作為生物學(xué)指標評價 ES 發(fā)生的早期危險性提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

前瞻性選取 2016年 11月 至 2018年 9月于武漢市精神衛(wèi)生中心就診的 98例FES 病人為研究對象（FES 組），病程（16.27±3.31）月；同期選取 76例健康體檢者作為對照（對照組）。本研究中所有病人均由主治醫(yī)師明確診斷，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，所有受試對象近親屬均由專業(yè)人員詳細告知研究內(nèi)容并簽署知情同意書。

納入標準：①符合國際疾病分類第十一次修訂本（ICD-11）精神與行為障礙（草案）關(guān)于精神分裂癥和其他原發(fā)性精神障礙診斷標準；② 智力正常者；③首次發(fā)病，入組前未服用過抗精神并藥物者；④無攻擊行為和自殺傾向。排除標準：①伴有急慢性感染疾病及各種免疫疾病者；②伴有嚴重的心、腦、肝、腎等器質(zhì)性疾病者；③有其它精神障礙性疾病或腦器質(zhì)性疾病，如：癡呆、抑郁癥、癲癇、精神發(fā)育遲緩等；④妊娠期或哺乳期婦女；⑤精神活性藥物濫用史。

收集病人入院時一般資料，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、FES 病人病程、受教育年限、吸煙史、飲酒史。

1.2 主要試劑與儀器

RNA提取試劑盒（貨 號R1200-100），購自北京索萊寶科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號 KL266），購自上?？道噬锟萍加邢薰荆籗YBR Premix Ex Taq Ⅱ（貨號 RR820A），購自北京百奧創(chuàng)新科技有限公司 ；Rox reference dye（貨號 XY320），購自上海信裕生物科技有限公司。ABI 7700 實時熒光定量 PCR 儀，購自美國 Applied Biosystems 公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 采集兩組受試者清晨空腹靜脈血樣，3 000 r∕min 離心 15 min 后收集血清，置于-80 ℃保存待測。

1.3.2 血清 mir-24-2、mir-30b水平測定采用

RNA 提取試劑盒提取兩組受試者血清總 RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為互補 DNA（cDNA）。采用實時熒光定量 PCR 儀對目的基因 mir-24-2、mir-30b和內(nèi)參 U6 進行擴增。反應(yīng)體系共 10 μL：cDNA 模板（50 mg∕L）1 μL，正反向引物（10 μmol∕L）各 0.4 μL，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）5 μL，Rox reference dye（50×）0.2 μL，雙蒸水 3.0 μL，引物由上海生工生物公司設(shè)計并合成（引物序列見表1）。反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，40 個循環(huán)。每個樣品重復(fù) 3 次。采用 2法對兩組受試者血清中 mir-24-2、mir-30b 表達水平進行定量分析。

表1 實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）引物序列

1.3.3 PANSS 評分PANSS 由 7 項陽性癥狀、7 項陰性癥狀及 16 項一般精神病理癥狀組成。本研究采用 PANSS 中的 P1、P3、P5、G9 項目評估陽性癥狀，N1、N2、N3、N4、N6、G7 項目評估陰性癥狀，P2、N5、G11 項目評估認知功能，P4、P7、G8、G14 項目評估興奮狀態(tài)，G2、G3、G6 評估抑郁情緒。每個項目分為 7級評分：7 分極重度，6 分重度，5 分偏重，4 分中度，3分輕度，2 分很輕，1 分無癥狀。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡等一般資料比較，均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（

P

＞0.05），見表2。

表2 兩組首發(fā)精神分裂癥（FES）一般資料比較

2.2 兩組 PANSS 評分比較

FES 組 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分顯著高于對照組（

P

＜0.05），見表3。

表3 兩組首發(fā)精神分裂癥（FES）陽性與陰性癥狀量表（PANSS）評分比較∕（分）

2.3 兩組受試者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比較

FES 組血清 mir-24-2、mir-30b 水平顯著高于對照組（

P

＜0.05），見表4。

2.4 FES病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與PANSS 評分相關(guān)性

FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分均呈正相關(guān)（

P

＜0.05），見表5。

表4 兩組首發(fā)精神分裂癥（FES）受試者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比較

表5 首發(fā)精神分裂癥（FES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b水平與陽性與陰性癥狀量表（PANSS）評分相關(guān)性

2.5 血清中 mir-24-2、mir-30b 水平對FES的診斷價值

分別以血清中 mir-24-2、mir-30b 單個指標及兩者聯(lián)合預(yù)測值為檢驗變量繪制 ROC 曲線，結(jié)果顯示 ，血清 mir-24-2 診斷FES的曲線下面積（AUC）為0.863（95%

CI

：0.808～0.919），截斷值為 1.407，特異度為 93.4%，靈敏度為 68.4%；血清 mir-30b 診斷 FES的 AUC 為 0.856（95%

CI

：0.801～0.911），截斷值為1.913，特異度 為 84.2%，靈敏度為 76.5%；兩者聯(lián)合診斷 FES 的 AUC 為 0.936（95%

CI

：0.899～0.973），特異度為 88.2%，靈敏度為 89.8%。

3 討論

ES 是一組癥狀群組成的臨床綜合征，通常青壯年時期起病，ES 發(fā)病率、復(fù)發(fā)率、致殘率均較高且治愈率低，病人需長期服用抗精神藥物緩解，但長期服用此類藥物易造成心源性猝死、心血管死亡等嚴重后果。因此尋找特異性較高的生物學(xué)指標，快速、客觀地實現(xiàn) ES 的正確診斷，是精神病學(xué)領(lǐng)域的一大難題。

miRNA 是一類高度保守的內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，廣泛存在于真核細胞內(nèi)，長約 22 個核苷酸，可通過調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄后過程調(diào)控細胞增殖和凋亡。miRNA 可與靶基因 mRNA3' 端非編碼區(qū)特異性結(jié)合，結(jié)合后可影響神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模式，使其表達或沉默，進而干擾神經(jīng)生物。miRNA 在神經(jīng)細胞的增殖發(fā)育、分化、凋亡及突觸塑形等過程中有著非常重要的作用，且目前有研究表明，許多 miRNA 在 ES 病人體內(nèi)異常表達，可能與 ES 發(fā)病有關(guān)。Sun 等研究顯示，miR-30 可調(diào)控大鼠神經(jīng)生成影響海馬區(qū)功能。而人類海馬區(qū)與學(xué)習(xí)、記憶等高級認知功能密切聯(lián)系，此外海馬區(qū)神經(jīng)功能的異常表達與精神疾病之間存在重要相關(guān)性。Sun 等研究結(jié)果中顯示 mir-24 在腦梗死病人神經(jīng)元細胞凋亡中發(fā)揮重要作用，提示 mir-24 可能與神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)系密切。本研究結(jié)果表明，F(xiàn)ES 組血清 mir-24-2、mir-30b 水平顯著高于對照組。提示血清 mir-24-2、mir-30b 的高表達可能會影響 FES，且可能對 FES 發(fā)病機制和診斷的研究具有重要意義。PANSS 是為評價不同類型 ES 癥狀嚴重程度設(shè)計的評定量表，本研究結(jié)果顯示 FES 組 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分顯著高于對照組。FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分均呈正相關(guān)。提示血清中 mir-24-2、mir-30b 水平升高可能加重 FES 病人臨床癥狀表現(xiàn)，即加重病人疾病程度。血清 mir-24-2、mir-30b 診斷 FES 的 AUC 分別為 0.863、0.856，特異度分別為 93.4%、84.2%，靈敏度分別為 68.4%、76.5%。提示兩者對 FES 的診斷可能均有重要參考價值 ，且血清 mir-24-2的參考價值可能優(yōu)于 mir-30b。兩者聯(lián)合診斷 FES 的 AUC 為 0.936，特異度為88.2%，靈敏度為 89.8%。提示兩者聯(lián)合檢測有助于提高FES的診斷價值，臨床中可將兩者作為參考指標。

綜上所述，ES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平高于正常人，血清中 mir-24-2、mir-30b 水平可能與ES 疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血清 mir-24-2、mir-30b 可能對評價 ES 發(fā)生的早期危險性有重要意義，對 ES 的診斷具有一定的參考價值。但本研究只通過查閱門診及住院病例來研究，樣本資料的質(zhì)量、數(shù)據(jù)的準確性和完整性均會對結(jié)果造成一定的影響，此研究存在一定不足。且本研究中血清中 mir-24-2、mir-30b 水平影響 ES 的具體作用機制及兩者之間的互作機制有待深入研究。