◎ 郭海柔，陳麗香

（1.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東 廣州 511442）

稻谷是我國(guó)主要的農(nóng)作物之一，其去殼后即為日常主食大米，可為人體提供日常能量和豐富的蛋白質(zhì)以及多種微量元素[1-3]。大米的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基本包括約7%的蛋白質(zhì)、0.5%～2.8%的脂肪、約75%的碳水化合物[4]。稻米除了作為主食的原料來源，同時(shí)也是重要的能量飼料和工業(yè)原材料，在食品產(chǎn)業(yè)鏈中占有很大的比重[5]。

嗪氨靈是一種甾醇生物合成抑制類的內(nèi)吸性殺菌劑，能有效防護(hù)谷類和蔬菜水果白粉病、銹病、黑星病。嗪氨靈作用在葉和根上，被吸收后，在體內(nèi)運(yùn)輸?shù)阶魑矬w的其他部位發(fā)生作用，以達(dá)到保護(hù)和治療作用。嗪氨靈及其殘留物三氯乙醛對(duì)人體健康具有潛在的毒性風(fēng)險(xiǎn)，在2A類致癌物清單中，對(duì)動(dòng)物有致癌性。GB 2763—2019規(guī)定，嗪氨靈稻谷的最大殘留限量為0.1 mg·kg-1，但無指定檢測(cè)方法，其殘留物包括嗪氨靈和三氯乙醛，現(xiàn)階段嗪氨靈的檢測(cè)方法有氣相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[6]、高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法[7]等，但是對(duì)其殘留物三氯乙醛并沒有太多研究。本方法建立了氣相色譜法測(cè)定大米中嗪氨靈及其殘留物三氯乙醛殘留量的分析方法，使用了QuEChERS快速凈化，前處理簡(jiǎn)單，儀器分析高效準(zhǔn)確，適用于大米中嗪氨靈及其殘留物三氯乙醛的殘留量分析。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備與材料

Agileng 7890B氣相色譜儀[安捷倫科技（上海）有限公司]、Shakers Mixers渦旋振蕩器（德國(guó)Heidolph公司）、TTL-DCII氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）、電子天平[十萬分之一天平，梅特勒-托利多（上海）有限公司]、JYL-Y922組織搗碎機(jī)（九陽(yáng)股份有限公司）及3K15高速離心機(jī)（北京博勱行儀器有限公司）。

大米（超市）、乙腈（色譜級(jí)，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?、正己烷（色譜級(jí)，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?、丙酮（色譜級(jí)，廣州化學(xué)試劑廠）、甲醇（色譜級(jí)，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?、異丙醇（色譜級(jí)，霍尼韋爾有限公司）、二氯甲烷（色譜級(jí)，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?、嗪氨靈（純度85.5%，Dr.Ehrenstorfer）及三氯乙醛（純度98.0%，TCI公司）。QuEChERS凈化材料：C18（40～60 μm，Agela Technologies）、PSA（40～60 μm，Agela Technologies）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配置

準(zhǔn)確稱取嗪氨靈0.011 7 g于10 mL容量瓶，用異丙醇定容至刻度線，配制成儲(chǔ)備液1 000 μg·mL-1；準(zhǔn)確稱取三氯乙醛0.010 2 g于10 mL容量瓶，用異丙醇定容至刻度線，配制成儲(chǔ)備液1 000 μg·mL-1。再分別準(zhǔn)確吸取100 μL的1 000 μg·mL-1嗪氨靈和三氯乙醛儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶，異丙醇定容至刻度線，配制成10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。再準(zhǔn)確吸取1 mL的10 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL容量瓶，異丙醇定容至刻度線，配制成1 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。使用基質(zhì)配標(biāo)：吸取凈化后溶液8 mL氮吹全干，用異丙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.005 μg·mL-1、0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.04 μg·mL-1、0.08 μg·mL-1、0.1 μg·mL-1和 0.2 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 儀器條件

色譜柱參數(shù)：HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.32 μm）；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；色譜柱流量：1.2 mL·min-1；進(jìn)樣體積：1 μL；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器溫度：300 ℃；檢測(cè)器尾吹流量：60 mL·min-1；柱箱升溫程序：50 ℃保持1 min，以8 ℃·min-1程序升溫至110 ℃，以2℃·min-1程序升溫至140 ℃，以40 ℃·min-1程序升溫至 300 ℃，保持 3 min。

1.4 樣品前處理步驟

稱取10 g大米（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，2 000 r·min-1自動(dòng)渦旋10 min，8 500 r·min-1離心3 min，取上層清液10 mL于裝有200 mg PSA凈化粉的15 mL離心管中，2 000 r·min-1自動(dòng)渦旋5 min，8 500 r·min-1離心3 min，吸取上層清液8 mL于15 mL離心管，30 ℃氮吹至近干，異丙醇定容至1 mL，供氣相色譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱與定容溶劑的選擇

選用兩種不同級(jí)性的色譜柱，弱極性色譜柱HP-5和中極性色譜柱DB-1701，同時(shí)分別使用正己烷、甲醇、丙酮、二氯甲烷和異丙醇進(jìn)行配置曲線，比較峰形和線性，結(jié)果表明，丙酮中三氯乙醛在兩種色譜柱均沒有響應(yīng)；二氯甲烷中嗪氨靈在兩種色譜柱中均沒有響應(yīng)；甲醇中三氯乙醛在兩種色譜柱中的出峰很不理想，會(huì)出現(xiàn)峰分叉；正己烷中嗪氨靈在兩種色譜柱中線性不良，達(dá)不到0.99的要求；異丙醇中三氯乙醛在DB-1701柱上的峰形不理想，會(huì)嚴(yán)重拖尾；只有異丙醇在HP-5柱上兩種化合物峰形和線性良好。因此方法選用弱極性色譜柱HP-5，異丙醇作為最終定容溶劑進(jìn)行檢測(cè)分析。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法ME=（基質(zhì)標(biāo)曲斜率/溶劑標(biāo)曲斜率-1）×100%，研究嗪氨靈及其殘留物三氯乙醛在大米中的基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME值處于0～20%為弱基質(zhì)效應(yīng)，處于20%～50%為中等基質(zhì)效應(yīng)，處于50%以上為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明，嗪氨靈和三氯乙醛的ME值均大于50%，嗪氨靈溶劑標(biāo)的響應(yīng)值比之基質(zhì)標(biāo)小，三氯乙醛相反，因此考慮使用基質(zhì)標(biāo)曲。

2.3 提取溶劑的選擇

選用乙腈、甲醇、丙酮、正己烷和二氯甲烷作為提取溶劑，通過在大米中添加0.08 μg·mL-1加標(biāo)水平的嗪氨靈和三氯乙醛進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果見表1。

表1 嗪氨靈和三氯乙醛在不同的提取溶劑中回收率及RSD表（n=3）

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，甲醇提取液氮吹的結(jié)果不理想，會(huì)出現(xiàn)白色的絮狀物，干擾最終結(jié)果，因此甲醇不適合作為提取物。由表1數(shù)據(jù)可得出，乙腈對(duì)三氯乙醛的提取率在83.1%～85.8%，對(duì)嗪氨靈的提取率在83.8%～90.0%；正己烷對(duì)三氯乙醛的提取率在26.0%～28.8%，對(duì)嗪氨靈的提取率在32.5%～37.0%，提取效果太差，不合適做提取溶劑；丙酮對(duì)三氯乙醛的提取率在59.3%～59.9%，對(duì)嗪氨靈的提取率在70.6%～81.3%，丙酮對(duì)三氯乙醛提取效果不好，不適合做兩種的提取溶劑；甲醇對(duì)三氯乙醛的提取率在23.8%～21.9%，對(duì)嗪氨靈的提取率在22.4%～25.6%，對(duì)兩種的提取效果不好，同時(shí)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，氮吹的結(jié)果不理想，會(huì)出現(xiàn)白色的絮狀物，干擾最終結(jié)果，因此不適合做提取溶劑；二氯甲烷對(duì)三氯乙醛的提取率在58.2%～63.6%，對(duì)嗪氨靈的提取率在82.5%～88.8%，二氯甲烷對(duì)三氯乙醛的提取效果不理想，不適合做提取溶劑。因此5種溶劑中，選用乙腈作為提取溶劑是合適的。

2.4 凈化方式的選擇

由于谷類中基本都含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等成分，這些成分在ECD（電子捕獲檢測(cè)器）上會(huì)有響應(yīng)，對(duì)目標(biāo)峰會(huì)有干擾，而且對(duì)于儀器和色譜柱也有一定的損耗，因此需要對(duì)提取液進(jìn)行凈化。參考其主要成分，采用PSA和C18兩種凈化粉，分別進(jìn)行不同質(zhì)量梯度的凈化實(shí)驗(yàn)，做3次平行水平的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平為0.08 μg·mL-1。實(shí)驗(yàn)具體步驟：準(zhǔn)確稱取10 g大米，加入20 mL乙腈，2 000 r·min-1自動(dòng)渦旋10 min，8 500 r·min-1離心3 min。分別準(zhǔn)確稱取50 mg、100 mg、200 mg、400 mg的PSA凈化粉于15 mL離心管中，分別準(zhǔn)確稱取50 mg、100 mg、200 mg、400 mg的C18凈化粉于15 mL離心管中，制成凈化管。將提取液吸取10 mL于凈化管中，2 000 r·min-1自動(dòng)渦旋5 min，8 500 r·min-1離心3 min，吸取上層清液8 mL于15 mL離心管，30 ℃氮吹至近干，異丙醇定容至1 mL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2～表3，凈化后圖譜見圖1～圖3。

表2 不同質(zhì)量PSA凈化方法下嗪氨靈和三氯乙醛的回收率表（n=3）

表3 不同質(zhì)量C18凈化方法下嗪氨靈和三氯乙醛的回收率表（n=3）

圖1 樣品在200 mg PSA凈化后色譜圖

圖2 樣品在400 mg C18凈化后色譜圖

圖3 嗪氨靈和三氯乙醛加標(biāo)樣色譜圖

從表2中得知，使用PSA凈化粉，50 mg和100 mg的用量下，三氯乙醛的回收率在72.3%～73.2%，嗪氨靈在81.7%～82.7%，200 mg和400 mg的用量下，三氯乙醛的回收率在81.2%～83.6%，嗪氨靈在83.3%～85.9%，隨著使用量的增大，三氯乙醛的回收率會(huì)稍稍增加，嗪氨靈的回收率則變化不明顯。因此PSA選用200 mg用量即可。從表2中得知，使用C18凈化粉，隨著C18凈化粉的用量增大，嗪氨靈回收率會(huì)下降，同時(shí)從圖1和圖2中可以看出，C18凈化后的效果，即使用量達(dá)到400 mg，其凈化效果也不如PSA凈化效果強(qiáng)，嗪氨靈出峰位置處還是會(huì)出現(xiàn)鼓包，不利于定量。因此選用PSA凈化粉200 mg為最優(yōu)凈化方案，圖3為加標(biāo)樣品在200 mg PSA粉末凈化后效果圖，凈化效果理想。

2.5 定量限和線性范圍

使用1.3的儀器條件，嗪氨靈和三氯乙醛的最小檢出濃度可以達(dá)到0.005 μg·mL-1，兩者的信噪比均大于10。據(jù)加標(biāo)回收率試驗(yàn)，在上述的實(shí)驗(yàn)方法下，嗪氨靈和三氯乙醛的最低檢出濃度為0.002 mg·kg-1。

根據(jù)2.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配置出的標(biāo)曲，在0.005 ～ 0.2 μg·mL-1， 嗪 氨 靈 和 三 氯 乙 醛 的 相 關(guān) 系數(shù)r分別為0.999 8和0.999 7，其線性方程分別為y=415 900.551 1x+34.068 9和y=193 459.082 4x+421.227 4，說明在0.005～0.2 μg·mL-1的線性范圍內(nèi)，嗪氨靈和三氯乙醛的線性關(guān)系均良好。

2.6 回收率試驗(yàn)和精密度

按上述實(shí)驗(yàn)方法對(duì)大米進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果如表4所示，3個(gè)添加水平下，回收率在81.7%～112%，而方法精密度在2.8%～6.0%，說明該方法的檢測(cè)有較高的精密度和準(zhǔn)確度。

表4 不同添加水平下嗪氨靈和三氯乙醛的回收率和精密度表（n=7）

2.7 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)23批次大米進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)，在經(jīng)本方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后，22批次的大米樣品檢測(cè)結(jié)果為未檢出，1批次檢出嗪氨靈，檢測(cè)結(jié)果為0.006 2 mg·kg-1。

3 結(jié)論

對(duì)大米中嗪氨靈和三氯乙醛的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，建立了QuEChERS-氣相色譜（ECD檢測(cè)器）檢測(cè)方法，本方法準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)單、靈敏，適合大米中嗪氨靈及其殘留物三氯乙醛的殘留量檢測(cè)。