范少峰 張輝 趙輝 汪勇 蘇華斌

【摘要】 目的：探討異常凝血酶原（PIVKA-Ⅱ）及磷酸酶-張力蛋白同源物基因（PTEN）聯(lián)合檢測對肝細胞癌（HCC）患者5年死亡率的預(yù)測價值。方法：回顧性分析2014年1月-2015年1月本院收治并進行肝癌根治術(shù)的80例HCC患者的臨床資料。將5年內(nèi)死亡的34例設(shè)為死亡組，存活的46例設(shè)為存活組。取HCC腫瘤組織，檢測入組患者樣本中PIVKA-Ⅱ及PTEN表達。比較兩組的臨床相關(guān)資料，多因素logistic回歸分析HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素，ROC曲線分析PIVKA-Ⅱ及PTEN在HCC患者預(yù)后評估中的價值;進一步用統(tǒng)計學(xué)方法分析PIVKA-Ⅱ與PTEN聯(lián)合檢驗對HCC患者預(yù)后評估的價值。結(jié)果：兩組年齡、TNM分期、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;死亡組患者腫瘤組織中AFP、PIVKA-Ⅱ均明顯高于生存組，PTEN含量低于生存組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。多因素logistic回歸模型分析結(jié)果顯示AFP、PIVKA-Ⅱ、PTEN是HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素（P<0.05）。ROC曲線分析顯示PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測預(yù)測HCC患者5年內(nèi)死亡率的靈敏度和特異度優(yōu)于單一檢測PIVKA-Ⅱ或PTEN。結(jié)論：PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測可提高對HCC術(shù)后患者5年生存率的預(yù)測價值，對臨床具有一定的參考價值。

【關(guān)鍵詞】 肝細胞癌 磷酸酶-張力蛋白同源物基因 異常凝血酶原 聯(lián)合檢測

Predictive Value of PIVKA-Ⅱ and? PTEN Combined Detection in 5-year Mortality of Patients with Hepatocellular Carcinoma/FAN Shaofeng， ZHANG Hui， ZHAO Hui， WANG Yong， SU Huabin. //Medical Innovation of China， 2021， 18（12）： 0-092

[Abstract] Objective： To investigate the predictive value of abnormal prothrombin （PIVKA-Ⅱ） and phosphatase-tensin homologue gene （PTEN） in 5-year mortality of patients with hepatocellular carcinoma （HCC）. Method： The clinical data of 80 patients with HCC who underwent radical hepatectomy in our hospital from January 2014 to January 2015 were retrospectively analyzed. 34 cases died within 5 years were set as death group and 46 cases survived were set as survival group. The expressions of PIVKA-Ⅱ and PTEN were detected in HCC tissues， the clinical data of two groups were compared， multivariate logistic regression analysis was used to analyze the influencing factors of death in HCC patients within 5 years， ROC curve was used to analyze the prognostic value of PIVKA-Ⅱ and PTEN in HCC patients. The value of PIVKA-Ⅱ combined with PTEN in the prognosis of HCC patients was further analyzed by statistical method. Result： There were no significant differences in age， TNM stage and tumor diameter between two groups （P>0.05）. The levels of AFP and PIVKA-Ⅱ in tumor tissue of death group were significantly higher than those of survival group， and the level of PTEN was lower than that of survival group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Multivariate logistic regression model analysis showed that AFP， PIVKA-Ⅱ and PTEN were the influencing factors for the death of HCC patients within 5 years （P<0.05）. ROC curve analysis showed that the sensitivity and specificity of combined detection of PIVKA-Ⅱ and PTEN were better than that of single detection of PIVKA-Ⅱ or PTEN. Conclusion： The combined detection of PIVKA-Ⅱ and PTEN can improve the predictive value of 5-year survival rate of HCC patients， which has a certain reference value for clinical.

[Key words] Hepatocellular carcinoma PTEN PIVKA-Ⅱ Combined detection

First-authors address： Eighth Affiliated Hospital of Guangdong Medical University， Guangzhou 510440， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.12.021

肝癌多起病隱匿，大多數(shù)患者直至出現(xiàn)癥狀方到醫(yī)院進行診療，錯過了治療的最佳時機，造成患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高等不良影響[1]。肝細胞癌（HCC）是原發(fā)性肝癌的一種，我國HCC發(fā)病例數(shù)占原發(fā)性肝癌患者整體的90%，占世界HCC總例數(shù)的55%，其中大多數(shù)患者有乙型肝炎或肝硬化病史[2]。目前，肝細胞癌臨床治療仍以手術(shù)和放療為主，但治療效果仍不盡人意，有研究顯示，部分地區(qū)患者術(shù)后中位生存時間僅17個月[3]。因此，尋找對HCC患者術(shù)后生存率進行精準預(yù)測的方法尤為重要。已有研究顯示，異常凝血酶原（PIVKA-Ⅱ）與磷酸酶-張力蛋白同源物基因（PTEN）在肝癌的發(fā)生及發(fā)展中起重要作用[4-5]，其中PIVKA-Ⅱ在肝癌組織中呈高表達，PTEN則呈低表達，有可能對HCC患者術(shù)后3年內(nèi)死亡率進行預(yù)測。本研究回顧性分析2014年

1月-2015年1月本院收治并進行肝癌根治術(shù)的HCC患者80例為研究對象，探討PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測對HCC患者5年生存率的預(yù)測價值。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2014年1月-2015年1月本院收治并進行肝癌根治術(shù)的80例HCC患者的臨床資料。納入標準：所有入組患者均需符合2019年版《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[6];年齡≥18歲;可進行有效溝通;均確診為HCC后，行肝癌根治術(shù)，部分患者必要時進行放療治療;均為單發(fā)HCC。排除標準：合并高血壓病及2型糖尿病;并發(fā)其他腫瘤;出現(xiàn)門靜脈瘤栓;病例信息不全;無法按時回訪。將5年內(nèi)死亡的34例設(shè)為死亡組，存活的46例設(shè)為存活組。本研究通過本院倫理委員會審核，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)和國際醫(yī)學(xué)研究慣例。

1.2 樣本取樣及目標蛋白檢測 取各組患者腫瘤組織最中間部分樣本，進行冷研磨，并提取總蛋白，制作懸濁液，采用ELISA法檢測樣本中PTEN蛋白含量，試劑盒購自北京六一公司，檢測方法嚴格按照說明書進行;甲胎蛋白（AFP）檢測采用羅氏E601型全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測;PIVKA-Ⅱ采用富士公司Lumipiles G1200全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測。

1.3 觀察指標 所有患者信息均由高年資主治醫(yī)師及以上職稱專業(yè)醫(yī)務(wù)人員收集完整的臨床資料，比較生存組和死亡組患者腫瘤樣本中PIVKA-Ⅱ與PTEN蛋白含量，分析兩組PIVKA-Ⅱ及PTEN與HCC患者臨床病理學(xué)特征關(guān)系，ROC曲線分析PIVKA-Ⅱ及PTEN在HCC患者預(yù)后評估中的價值;進一步用統(tǒng)計學(xué)方法分析PIVKA-Ⅱ與PTEN聯(lián)合檢驗對HCC患者預(yù)后評估的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。PIVKA-Ⅱ及PTEN對HCC患者的5年生存率診斷效能采用ROC曲線分析，多因素logistic回歸模型分析HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 死亡組男20例，女14例;年齡41～63歲，平均（56.33±7.25）歲;TNM分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期11例，Ⅲ期17例;腫瘤直徑≤5 cm者17例，腫瘤直徑>5 cm者19例。存活組男29例，女17例;年齡38～65歲，平均（57.12±9.63）歲;TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期16例，Ⅲ期22例;腫瘤直徑≤5 cm者21例，腫瘤直徑>5 cm者25例。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組臨床相關(guān)資料比較 兩組年齡、TNM分期、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;死亡組患者腫瘤組織中AFP、PIVKA-Ⅱ均明顯高于生存組，PTEN含量低于生存組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 多因素logistic回歸分析HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素 將所有入組患者進行多因素logistic回歸模型分析，變量賦值：AFP、PIVKA-Ⅱ、PTEN均采用實測值，年齡≤50歲=0，年齡>50歲=1;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期=0，TNM分期Ⅲ期=1;腫瘤直徑≤5 cm=0，腫瘤直徑>5 cm=1。結(jié)果顯示：年齡、TNM分期及腫瘤直徑均非HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素，而AFP、PIVKA-Ⅱ、PTEN是HCC患者5年內(nèi)死亡的影響因素（P<0.05）。見表2。

2.4 HCC患者腫瘤組織中PIVKA-Ⅱ及PTEN檢測對HCC患者5年內(nèi)死亡率的ROC曲線預(yù)測值 對PIVKA-Ⅱ及PTEN進行ROC曲線分析結(jié)果顯示：PIVKA-Ⅱ在HCC患者5年內(nèi)死亡的特異性優(yōu)于PTEN，靈敏度低于PTEN。多元邏輯回歸算得PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合預(yù)測HCC患者5年內(nèi)死亡時各因子前的系數(shù)（PIVKA-Ⅱ & PTEN）=5.267×PIVKA-Ⅱ+5.113×PTEN-13.682。PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測靈敏度和特異度均優(yōu)于單一檢測PIVKA-Ⅱ、PTEN檢測。見圖1和表3。

3 討論

HCC雖然手術(shù)成功率高，但由于其易發(fā)生血行性轉(zhuǎn)移導(dǎo)致復(fù)發(fā)率較高，有研究報道，原發(fā)性肝癌5年生存率僅為50%[7]。本研究回顧性分析的80例HCC患者中，死亡34例，占入組患者的42.5%，與文獻[7-9]報道相近，但死亡率略低，可能由于本研究納入的患者均為單發(fā)HCC，腫瘤均為單一起源，另一方面排除出現(xiàn)門靜脈瘤栓者，這均可能是導(dǎo)致HCC患者5年死亡率略低的原因。

PIVKA-Ⅱ是一種維生素K缺乏誘導(dǎo)蛋白，對肝癌具有較高的特異性，尤其對于AFP陰性肝癌患者的特異性仍具有良好的臨床參考價值，有希望成為新的肝癌腫瘤標記物[10-11]。辛文瀚等[12]對PIVKA-Ⅱ用于肝癌診療的研究進展進行綜述，認為PIVKA-Ⅱ不僅對肝癌的診斷價值較高，并且在不同腫瘤分期、不同腫瘤直徑患者血清中存在差異性表達[13]，但本研究對入組患者局限性較強，且入組例數(shù)較少，僅入組TNM分期Ⅰ～Ⅲ期患者，故而對TNM分期及不同腫瘤直徑并未檢測出存在差異性表達。PTEN具有雙重磷酸酶活性，對肝癌具有抑制作用，其在多種肝癌中均呈低表達，導(dǎo)致腫瘤細胞粘附性不強，易轉(zhuǎn)移、分化，并且近年來研究發(fā)現(xiàn)，其對腫瘤預(yù)后評估具有一定的參考價值[14-15]。有基礎(chǔ)研究顯示，PTEN可通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR信號通路或PTEN/AKT/SGK1信號通路調(diào)節(jié)肝癌細胞增殖能力[16-17]。近期研究顯示，血清、腫瘤組織中多種因子或miRNA聯(lián)合檢測，可提高對肝癌的診斷效能，對患者轉(zhuǎn)歸亦有一定參考價值[18-20]。

本研究首先通過臨床病理學(xué)特征分析，證實PIVKA-Ⅱ及PTEN在HCC術(shù)后5年死亡及生存患者腫瘤組織中的表達存在差異，死亡組患者PIVKA-Ⅱ含量升高，PTEN含量降低，并且通過多因素logistic回歸分析證實PIVKA-Ⅱ及PTEN是HCC術(shù)后患者5年內(nèi)死亡的獨立影響因素。本團隊最后采用多元邏輯回歸算得PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合預(yù)測HCC患者5年內(nèi)死亡率時各因子前的系數(shù)，并ROC曲線分析PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測對HCC術(shù)后患者5年內(nèi)死亡率的預(yù)測評估價值，結(jié)果證實，PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測AUC值為0.87，95%CI（0.79，0.93），靈敏度和特異度均優(yōu)于單一檢測PIVKA-Ⅱ或PTEN。說明PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測可彌補單一檢測靈敏度和特異度不佳的缺點，做到1+1>2的臨床診斷效能。

綜上所述，PIVKA-Ⅱ及PTEN聯(lián)合檢測可提高對HCC術(shù)后患者5年生存率的預(yù)測價值，可對患者預(yù)后做出有效評估，有可能成為預(yù)測患者生存周期重要的參考標準之一。

參考文獻

[1]劉雙勇，吳德全.肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移原因及治療現(xiàn)狀[J].疑難病雜志，2018，17（3）：311-314.

[2] Chen W，Zhen R，Baade P D，et al.Cancer statistics in China 2015[J].CA Cancer J Clin，2016，55（2）：115-132.

[3]朱海濤，劉哲豪.多發(fā)與單發(fā)乙肝相關(guān)肝細胞癌根治術(shù)后的復(fù)發(fā)率及總生存率[J].貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2018，43（7）：816-823.

[4]汪源，李向農(nóng)，楊軍，等.腫瘤標志物PIVKA-Ⅱ在肝細胞癌診斷中的價值[J].中國腫瘤外科雜志，2018，10（2）：102-108.

[5]徐鋼，高秩，嚴茂生.miR-155/PTEN調(diào)控軸在肝癌中的表達及其機制[J].腫瘤防治研究，2018，45（2）：67-72.

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會醫(yī)政醫(yī)管局.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2019年版）[J].中國實用外科雜志，2020，40（2）：121-138.

[7] Lazzara C，Navarra G，Lazzara S，et al.Does the margin width influence recurrence rate in liver surgery for hepatocellular carcinoma smaller than 5 cm[J].Eur Rev Mmd Pharmac，2017，21（3）：523-529.

[8]王建國，劉海峰.矩形準直器體部伽瑪?shù)吨委煝驜期以上原發(fā)性肝癌伴門靜脈瘤栓的療效分析[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2019，40（5）：32-34.

[9]周素軍，吳寶林，周軍，等.藥物緩釋微球肝動脈化療栓塞術(shù)治療中晚期原發(fā)性肝癌的近期療效及安全性分析[J].武漢大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2019，40（5）：742-746.

[10]侯帥，歐陽錫武，李榮華，等.血清PIVKA-Ⅱ與AFP檢測在原發(fā)性肝細胞癌診斷中的應(yīng)用[J].生命科學(xué)研究，2019，23（2）：128-134，167.

[11]何彪，邱振華，黃燕金.PIVKA-Ⅱ與GP73聯(lián)合檢測在AFP低濃度肝癌診斷中的臨床價[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2018，15（4）：98-100.

[12]辛文瀚，羅萍.PIVKA-Ⅱ用于肝癌診療的研究進展[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（7）：991-993.

[13]楊季萍.肝癌患者介入治療前后血清異常凝血酶原、甲胎蛋白及甲胎蛋白異質(zhì)體檢測的意義[J].臨床合理用藥雜志，2020，13（14）：160-161.

[14]孫巨勇，李偉，牟娜，等.FN與PTEN在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達及聯(lián)合診斷與預(yù)后評估的價值[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2019，29（15）：30-35.

[15]張謝，譚麟，林劍，等.PTEN-Long對肝癌細胞的抑制作用研究[J].浙江醫(yī)學(xué)，2019，41（15）：1575-1578，1583.

[16]徐瑞，李文娜，王文娟.Hippo信號通路介導(dǎo)PTEN調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR信號通路影響肝癌細胞增殖能力[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2020，51（12）：1277-1283.

[17]劉小美，潘志強，方肇勤，等.黃連-大黃-肉桂復(fù)方對肝癌細胞增殖及PTEN-PI3K-AKT/SGK1信號通路的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，30（1）：50-54.

[18]丁錦根.血清鐵蛋白、甲胎蛋白和甲胎蛋白異質(zhì)體L3聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2019，17（29）：60-61.

[19]袁沖，趙征，廖子君，等.血清miR-122和miR-570聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的臨床診斷價值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2021，29（2）：267-270.

[20]陳澤衍，陳曉靜，鄭文斌，等.miR-146a、miR-375聯(lián)合AFP檢測在診斷原發(fā)性肝癌中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2019，16（36）：132-135.

（收稿日期：2021-03-01） （本文編輯：姬思雨）