佟玉潔,祖曉冬

（天津職業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，天津 300410）

血脂異?；蚋哐侵秆獫{中總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、載脂蛋白 B（apolipoprotein B，Apo B）中的一種或多種升高，高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoproteincholesterol，HDL-C）和載脂蛋白 A（apolipoproteinA，Apo A）降低的一種病癥。血清中TC、TG含量增加是高脂血癥的主要指標(biāo)，高脂血癥與心血管疾病、動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)。根據(jù)2012年全國調(diào)查結(jié)果，我國成人血脂異?？傮w患病率高達(dá)40.4%；高膽固醇血癥的患病率為4.9%；高甘油三酯血癥的患病率達(dá)13.1%；低、高密度脂蛋白膽固醇血癥的患病率達(dá)33.9%。

有許多傳統(tǒng)藥食同源原料具有輔助降血脂功效，高血脂癥患者及血脂偏高人群可以通過日常食用有降脂功能的藥食同源植物達(dá)到改善效果。沖泡飲用是消費(fèi)者樂于接受的一種食用方式。功能性茶飲具有很大的市場發(fā)展?jié)摿Γ芏嘌哒呷粘_泡葛根、山楂、荷葉等藥食同源植物代茶飲起到保健效果。

茶是健康飲品，在我國已有上千年的飲用歷史，普洱茶以具有較好的減肥、降血糖、降血脂、抗氧化等功效被人們所熟知[1]。市場上有多種功能性茶類食品，為了吸引更多消費(fèi)者，有些產(chǎn)品將傳統(tǒng)藥食同源原料與茶結(jié)合，但藥食同源原料與茶復(fù)配是否能達(dá)到協(xié)同起效作用，需要深入探索研究。本研究選擇高脂飼料誘導(dǎo)的混合高血脂大鼠模型進(jìn)行輔助降血脂的功能評價，確定普洱茶及其組分能否與葛根山楂協(xié)同發(fā)揮功效。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物、飼料、飲水

SPF級SD雄性大鼠[許可證號：SCXK（浙）2014-0001]70 只，180 g～220 g：浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心；基礎(chǔ)飼料（鼠全價顆粒飼料）、高脂飼料（78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油、0.2%膽鹽）、墊料（滅菌顆粒墊料）：南京市江寧青龍山動物養(yǎng)殖場。飲水：飲用純化水，經(jīng)酸化后自由飲用。

1.2 材料與試劑

血脂康膠囊（0.3 g/粒）：北京北大維信生物科技有限公司；甘油三酯檢測試劑盒、總膽固醇檢測試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒：南京建成生物工程研究所；乙醇（95%）：濟(jì)南潤昌化工有限公司；普洱茶：云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司；葛根、山楂：市售中藥飲片。

1.3 藥食同源復(fù)合物提取工藝

1.3.1 葛根山楂提取物

葛根和山楂按照質(zhì)量比2∶1混合均勻，加6倍水煎煮提取，每次1 h，提取3次，經(jīng)濃縮、干燥制成葛根山楂提取物（收率約為23%）。

1.3.2 普洱茶提取物及普洱茶組分

普洱茶提取物為普洱熟茶加8倍水煎煮提取，每次1 h，提取3次，濃縮干燥制成（收率約為25%）。將制備的普洱茶提取物用80%乙醇醇沉，收集上清液干燥得普洱茶茶多酚粗提物（收率約為12.5%）；收集上述80%醇沉沉淀，干燥得普洱茶茶多糖粗提物（收率約為12.5%，其茶多糖含量為24.66%，茶褐素含量為49.31%）。

1.3.3 受試物制備

將葛根山楂提取物分別與普洱茶多糖粗提物、普洱茶多酚粗提物、普洱茶提取物按照日服用量，制備成：復(fù)合物A（葛根6.5 g+山楂3.25 g+茶多糖粗提物0.75 g，3 g/d），復(fù)合物 B（葛根 6.5 g+山楂 3.25 g+茶多酚粗提物0.5 g，2.75 g/d），復(fù)合物C（葛根6.5 g+山楂3.25 g+普洱茶提取物 1.25 g，3.5 g/d）。

1.4 分組和劑量設(shè)計(jì)

選擇實(shí)驗(yàn)開始時動物體重的差異不超過平均體重的10%的60只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、復(fù)合物A組（1.5 g/kg）、復(fù)合物B組（1.375 g/kg）、復(fù)合物C組（1.75 g/kg）以及血脂康（陽性對照）組（120 mg/kg），共6組，每組10只。各復(fù)合物劑量均為人體推薦攝入量的30倍。

1.5 試驗(yàn)方法

造模前所有大鼠喂飼基礎(chǔ)飼料觀察10 d，采血測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余實(shí)驗(yàn)組開始高脂飼料喂養(yǎng)10 d以建立高血脂大鼠模型，采血測定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，根據(jù)TC水平進(jìn)行隨機(jī)分組。正常組灌胃純凈水，繼續(xù)給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；模型組灌胃純凈水，其它組灌胃受試樣品，同時繼續(xù)給予高脂飼料，連續(xù)給藥4周。給藥期間，每2周禁食16 h，同法采血測定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用ANOVA法進(jìn)行單因素方差分析，然后進(jìn)行非配對t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清總膽固醇（TC）

復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TC水平的影響見表1。

表1 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TC水平的影響（±s，N=10）Table 1 Effect of compound on serum TC level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

表1 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TC水平的影響（±s，N=10）Table 1 Effect of compound on serum TC level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

注：**P<0.01，與正常組相比；＃P<0.05，＃＃P<0.01，與模型組相比。

TC/（mmol/L）造模前 造模10 d 給藥2周 給藥4周正常組 3.94±0.35 3.84±0.43 3.17±0.46 3.55±0.87模型組 3.91±0.48 5.33±0.53** 4.30±0.27** 4.57±0.43**血脂康組 3.93±0.36 5.03±0.40 3.73±0.85 4.03±0.57#復(fù)合物 A 3.91±0.54 5.18±1.08 3.33±0.64## 3.29±0.55##復(fù)合物 B 3.99±0.52 5.13±0.68 3.79±0.47## 3.94±0.56#復(fù)合物 C 4.05±0.50 5.18±1.51 2.68±0.42## 4.19±0.64組別

由表1可以看出，與正常組相比，模型組大鼠的TC水平極顯著升高（P<0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功，給藥4周后維持較高的血清TC水平（P<0.01）。與模型組相比，隨著給藥時間的延長，受試樣品復(fù)合物A、B組對高脂飲食誘導(dǎo)大鼠的血清TC水平具有不同程度的明顯改善作用（P<0.01，P<0.05），復(fù)合物C改善作用相對較弱。

2.2 血清甘油三酯（TG）

復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TG水平的影響見表2。

表2 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TG水平的影響（±s，N=10）Table 2 Effect of compound on serum TG level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

表2 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清TG水平的影響（±s，N=10）Table 2 Effect of compound on serum TG level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

注：**P<0.01，與正常組相比；＃P<0.05，＃＃P<0.01，與模型組相比。

組別TG/（mmol/L）造模前 造模10 d 給藥2周 給藥4周正常組 0.73±0.21 0.77±0.13 0.88±0.27 0.92±0.29模型組 0.76±0.13 1.81±0.43** 1.76±0.43** 1.42±0.27**血脂康組 0.73±0.12 1.71±0.31 1.49±0.43 1.24±0.29復(fù)合物 A 0.81±0.15 1.77±0.42 1.30±0.32# 1.08±0.29#復(fù)合物 B 0.75±0.10 1.79±0.60 1.33±0.28# 1.07±0.29#復(fù)合物 C 0.76±0.18 1.75±0.29 1.25±0.30## 1.01±0.20##

由表2可以看出，與正常組相比，模型組大鼠的TG水平極顯著升高（P<0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。與模型組相比，隨著給藥時間的延長，受試樣品復(fù)合物A、B、C組對高脂飲食誘導(dǎo)大鼠的血清TG水平均有不同程度的明顯改善作用（P<0.01，P<0.05）。

2.3 低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）

復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清LDL-C水平的影響見表3。

表3 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清LDL-C水平的影響（±s，N=10）Table 3 Effect of compound on serum LDL-C level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

表3 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清LDL-C水平的影響（±s，N=10）Table 3 Effect of compound on serum LDL-C level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

注：**P<0.01，與正常組相比；＃P<0.05，與模型組相比。

LDL-C/（mmol/L）造模前 造模10 d 給藥2周 給藥4周正常組 1.93±0.33 1.93±0.24 1.95±0.15 2.06±0.21模型組 1.90±0.29 2.25±0.42 2.29±0.37* 2.57±0.27**血脂康組 1.82±0.31 2.21±0.49 2.23±0.33 2.22±0.41*復(fù)合物 A 1.99±0.51 2.23±0.26 2.06±0.25 2.28±0.30#復(fù)合物 B 2.03±0.24 2.11±0.17 2.12±0.34 2.36±0.32復(fù)合物 C 1.84±0.39 2.13±0.24 2.15±0.16 2.37±0.30組別

由表3可以看出，與正常組相比，模型組大鼠在給藥2周后，血清LDL-C水平明顯升高（P<0.05），受試樣品復(fù)合物A組在給藥4周時對血清LDL-C水平具有明顯改善作用（P<0.05），其余受試樣品對血清LDLC水平改善作用不明顯。

2.4 高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）

復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清HDL-C水平的影響見表4。

表4 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清HDL-C水平的影響（±s，N=10）Table 4 Effect of compound on serum HDL-C level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

表4 復(fù)合物對高脂飼料大鼠血清HDL-C水平的影響（±s，N=10）Table 4 Effect of compound on serum HDL-C level in rats fed with high fat diet（±s，N=10）

HDL-C/（mmol/L）造模前 造模10 d 給藥2周 給藥4周正常組 0.67±0.10 0.66±0.12 0.69±0.11 0.65±0.16模型組 0.62±0.06 0.73±0.17 0.78±0.15 0.76±0.12血脂康組 0.62±0.03 0.66±0.09 0.76±0.10 0.69±0.08復(fù)合物 A 0.63±0.07 0.71±0.12 0.75±0.14 0.72±0.08復(fù)合物 B 0.59±0.07 0.69±0.15 0.78±0.11 0.70±0.10復(fù)合物 C 0.63±0.05 0.70±0.11 0.75±0.12 0.71±0.07組別

由表4可以看出，與正常組相比，試驗(yàn)期間高脂飼料模型大鼠血清HDL-C水平有增加趨勢，未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，受試樣品各組對模型大鼠血清HDL-C水平未見明顯影響。

3 討論

現(xiàn)代研究證實(shí)，葛根的主要功效成分葛根素通過調(diào)節(jié)膽固醇合成途徑 [3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMGCR）降低]、膽固醇攝取途徑[低密度脂蛋白受體（low-density lipoprotein receptor，LDLR）升高]、膽固醇外排途徑[ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1）升高]、膽汁酸合成經(jīng)典途徑 [膽汁酸7α羥化酶（cholesterol 7α-hydroxylase，CYP7A1）升高]中關(guān)鍵蛋白/酶和基因表達(dá)，降低膽固醇水平[2-5]。山楂或山楂提取物能通過調(diào)節(jié)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c/脂肪酸合成酶[SREBP-1c（sterolregulatory element binding proteins）/FAS（fatty acid synthase）]通路抑制脂肪酸合成、上調(diào)脂肪酸氧化關(guān)鍵基因過氧化物酶體增殖物激活受體-α[PPAR（Peroxisome proliferator-activated receptors）-α]的表達(dá)水平，促進(jìn)脂肪酸氧化分解，從而降低甘油三酯水平；通過調(diào)節(jié)膽固醇合成途徑（HMGCR降低）、膽固醇酯化途徑[膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（cholesterol acyltransferase，ACAT）降低]、膽固醇攝取途徑（LDLR升高）、膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)途徑[膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（cholesterol acyltransferase，LCAT）升高、Apo A-I（apolipoprotein A-I）升高]、膽汁酸合成經(jīng)典途徑[膽汁酸 7α-羥化酶（cholesterol 7α-hydroxylase，CYP7A1） 和膽固醇12α-羥化酶（sterol 12α-hydroxylase，CYP8B1）升高]中關(guān)鍵酶活性及其基因表達(dá)，從而降低膽固醇水平[6-11]。從以上研究結(jié)果可以看出，葛根能夠通過膽固醇外排途徑降低膽固醇水平，而山楂能夠通過促進(jìn)脂肪酸氧化降低甘油三酯水平、通過膽固醇酯化途徑、膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)途徑降低膽固醇水平，兩種藥食同源原料能夠通過多種不同脂質(zhì)代謝機(jī)制協(xié)同起效降低血脂水平。

普洱茶提取物主要是由茶褐素、茶多糖、茶多酚和咖啡因等物質(zhì)組成。茶多糖粗提物的主要活性物質(zhì)是茶多糖和茶褐素，兩種活性成分可顯著降低高脂血癥動物的TC、TG、LDL-C水平、升高HDL-C水平[12-15]。有學(xué)者揭示茶褐素的輔助降血脂作用機(jī)制是通過抑制腸道膽鹽水解酶（bile salt hydrolase，BSH）菌，促進(jìn)回腸中包括?；蛆Z去氧膽酸（taurine chenodeoxycholic acid，TCDCA）和?；切苋パ跄懰幔╰auroursodeoxycholic acid，TUDCA）在內(nèi)的結(jié)合型膽汁酸的累積，進(jìn)一步抑制腸道類法尼醇X受體（farnesoid X receptor，F(xiàn)XR）-成纖維細(xì)胞生長因子（recombinant fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）19/FGF15信號通路，同時激活肝臟FXR-小異二聚體配體（FXR-small heterodimer partner，F(xiàn)XRSHP）信號通路，二者共同調(diào)節(jié)膽酸合成酶，促進(jìn)膽汁酸合成替代途徑的關(guān)鍵酶氧固醇和氧固醇7α-羥化酶（oxysterol 7α-hydroxylase，CYP7B1）表達(dá)，促進(jìn)膽汁酸合成并通過糞便排出體外，降低膽固醇[16]。普洱茶多糖粗提物與葛根山楂復(fù)配，能夠通過多途徑協(xié)同作用達(dá)到輔助降血脂目的。

含有茶多酚的復(fù)配組輔助降血脂效果不及茶多糖復(fù)配組，有學(xué)者認(rèn)為普洱熟茶在后發(fā)酵過程中，以茶多酚為主的多酚類成分大量氧化衍生成為茶色素，兒茶酚含量下降，而沒食子酸和咖啡因的含量提高會造成普洱茶中茶多酚輔助降血脂的功效不明顯；有學(xué)者認(rèn)為茶中的鞣酸在消化道內(nèi)與中藥功效物質(zhì)生物堿等結(jié)合，可降低藥效；也有學(xué)者考慮到咖啡因可促進(jìn)代謝循環(huán)，影響功效物質(zhì)發(fā)揮最大藥效，具體原因還需進(jìn)一步深入研究[17-21]。

4 結(jié)論

通過動物功效實(shí)驗(yàn)證實(shí)，葛根山楂和普洱茶的功效成分配伍均具有一定的輔助降低血脂功效，尤其葛根山楂與茶多糖粗提物復(fù)配優(yōu)于其他兩組，可有效降低高血脂大鼠的TC、TG及LDL-C水平。本文的研究對未來藥食同源與茶復(fù)配功能性食品開發(fā)及應(yīng)用具有借鑒意義。