丁保鋒，劉全成，于秀冰

(佳木斯市中心醫(yī)院腫，黑龍江 佳木斯 154002)

0 引言

隨著對結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制的深入研究，目前普遍認(rèn)為表觀遺傳學(xué)改變是繼遺傳學(xué)改變之外，與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展和治療具有密切關(guān)系的另一重要機(jī)制，抑癌基因的異常甲基化通過沉默抗增殖、抗凋亡、抗血管生成和DNA 修復(fù)等基因的活性致使其正常生理功能缺失從而在腫瘤的發(fā)生中具有重要的作用[1-2]。人類相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(RUNX3)屬于位于1 號染色體的腫瘤抑制基因，特別是在結(jié)腸癌發(fā)展過程中更為關(guān)鍵[3-4]。腫瘤血管的生成不僅會受到很多血管生成因子的調(diào)節(jié)，還會受到抑制因子的影響，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)[5]屬于最強(qiáng)的一種血管生成因子，在血管新生中起著至關(guān)重要的作用，RUNX3 與VEGF 二者之間與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移及血管新生可能存在密切的關(guān)系，在腫瘤的多步驟演進(jìn)中起重要作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2017 年6 月至2019 年11 月到本醫(yī)院接受治療的160 例結(jié)腸癌患者為研究對象，其中男性患者為95 例，女65 例，年齡區(qū)間：29-90 歲，平均：(63.54±1.19) 歲。所有患者術(shù)前未接受任何針對腫瘤的治療，術(shù)后經(jīng)病例檢查為結(jié)腸癌。其中乳頭狀腺癌32 例，管狀腺癌104 例，黏液癌、未分化癌、印戒癌各8 例。Dukes 分期，A 期40 例，B 期46 例，C期42 例，D 期32 例。

1.2 方法

所有標(biāo)本均采用濃度10%的中性福爾馬林溶液進(jìn)行固定，采用石蠟進(jìn)行包埋，連續(xù)切成4 pum 的厚片，采用免疫組化S-P法進(jìn)行檢測[6]。血管內(nèi)皮生長因子先用高溫煮沸法進(jìn)行處理，之后再采用EDTA 液進(jìn)行抗原修復(fù)；VEGF 屬于鼠抗人單克隆濃縮型抗體，按照1:40 的比例進(jìn)行稀釋，均采用由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)所提供的儀器和試劑進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判斷

分析切片中的陽性細(xì)胞在所有同類細(xì)胞數(shù)中的比例，以及陽性細(xì)胞的著色強(qiáng)度情況，通過分析結(jié)果來判斷免疫組化的具體狀況：細(xì)胞質(zhì)主線棕黃色的顆粒為陽性細(xì)胞，在400 倍下，對5 個視野中所包括的癌細(xì)胞總數(shù)以及VEGF 陽性的癌細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算后取陽性細(xì)胞所占百分比的平均數(shù)，1分表示為：陽性細(xì)胞10%以下(包括10%)，2 分表示為：11%-50%；三分表示為51%-75%；4 分為表示為：76%以上(包括76%)。陽性癌細(xì)胞的著色強(qiáng)度可以劃分四個標(biāo)準(zhǔn)，分別為0分、1 分、2 分，每個等級的顏色分別為黃色、棕黃色、棕褐色。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞所占的百分比相乘積如果大于3 分，就說明免疫反應(yīng)呈陽性。微血管密度(MVD)值計(jì)數(shù)[7]：在40 倍的低倍鏡下對癌組織間質(zhì)微血管密集的部位進(jìn)行觀察并計(jì)算，之后再在200 倍的高倍鏡下進(jìn)行觀察，每例標(biāo)本分別計(jì)數(shù)出5 個視野，在計(jì)算過程中需要由2 為經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生同時進(jìn)行計(jì)算，最后去計(jì)算的平均值作為該例的MVD 值。腫瘤區(qū)域只要是染成棕色的單個內(nèi)皮細(xì)胞，或者是內(nèi)皮細(xì)胞簇，都可以直接作為血管計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0 處理器對此次研究中的數(shù)據(jù)和信息進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用(%)表示，用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RUNX3 與VEGF 在結(jié)腸癌中的表達(dá)

RUNX3 在正常結(jié)腸癌中表達(dá)，陽性率分別是陰性組的46.25%，弱陽性組的35.00%，強(qiáng)陽性組的18.75%，陽性表達(dá)率呈下降趨勢；VEGF 在正常結(jié)腸癌中表達(dá)，陽性率分別是陰性組的22.50%，弱陽性組30.0%，強(qiáng)陽性組的47.50%，可見，陽性表達(dá)有明顯升高的跡象。

2.2 RUNX3、VEGF 表達(dá)MVD 的關(guān)系

RUNX3 表達(dá)陰性組的MVD 屬于為(50.12±9.27)，弱陽性組為(38.22±7.61)，強(qiáng)陽性組(19.41±6.77)，數(shù)據(jù)對比，顯著遞減(P＜0.05)；RUNX3 表達(dá)與MVD 之間的關(guān)系為負(fù)相關(guān)性(rs=-0.741，P＜0.01)；VEGF 表達(dá)陰性組(23.25±6.79)、弱陽性(46.82±7.24)、強(qiáng)陽性(51.32±8.71) 數(shù)據(jù)對比，顯著遞增(P＜0.05)；VEGF 表達(dá)和MVD 之間的關(guān)系為正相關(guān)(rs=0.684，P＜0.01)。

3 討論

結(jié)腸癌是常見的一種消化道惡性腫瘤，主要發(fā)生在結(jié)腸部位，隨著人們生活水平的提高，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢，男性的發(fā)病率要女性，但對于絕經(jīng)后的女性，發(fā)病率會有明顯升高的現(xiàn)象，一旦患有結(jié)腸癌，最常見的癥狀是消化道出血，患者還可能出現(xiàn)貧血或是大便里有膿血；如果腫瘤較大，患者還會出現(xiàn)梗阻或是不完全梗阻的現(xiàn)象，在臨床上都是采用手術(shù)方式或者是輔助化療方式進(jìn)行治療，結(jié)腸癌患者的預(yù)后效果較為理想，40%左右的人可以活到五年以上，但是對于晚期的結(jié)腸癌患者，通過一些綜合治療，五年生存率也可以到20%以上[8]。結(jié)腸癌的發(fā)生是一個多因素、多步驟、多基因參與的過程，是環(huán)境和遺傳共同作用的結(jié)果，結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展涉及到多種癌基因與抑癌基因的異常改變，是多基因變異導(dǎo)致的結(jié)果，不同的基因可能在不同的修復(fù)過程中起作用。多種癌基因的活化或失活及多種外源致癌物的刺激因素作用導(dǎo)致了結(jié)腸癌的發(fā)生[9]。RUNX3 是一個在細(xì)胞生長、凋亡以及分化和腫瘤發(fā)生過程中起著重要作用的基因，在人類細(xì)胞增殖和分化中起著中樞的作用，參與了結(jié)腸上皮細(xì)胞增殖的抑制、背根神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)發(fā)生以及T 細(xì)胞的分化，其對胃腸道上皮細(xì)胞生長和分化的調(diào)控很可能起著重要的作用[10]。在本次研究中，RUNX3、VEGF 在結(jié)腸癌中的表達(dá)在性別、年齡、病理類型方面無顯著差異，但是在分期上充分顯示出RUNX3 在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著有效的作用，以及VEGF 促進(jìn)腫瘤生長方面的作用。

表1 RUNX3 與VEGF 在結(jié)腸癌中的表達(dá)[n(%)]

表2 RUNX3、VEGF 表達(dá)MVD 的關(guān)系()

表2 RUNX3、VEGF 表達(dá)MVD 的關(guān)系()

本次研究結(jié)果顯示，RUNX3 表達(dá)與MVD 之間呈負(fù)相關(guān)性(rs=-0.741，P＜0.01)，而VEGF 表達(dá)和MVD 之間存在正相關(guān)性(rs=0.684，P＜0.01)?？梢?，結(jié)腸癌RUNX3、VEGF 表達(dá)與MVD 之間差異顯著?？赡茉赗UNX3 抑癌基因發(fā)揮自身作用的同時，對VEGF 于MVD 的抑制作用也起到一定的影響。在本次研究中充分表明在形態(tài)學(xué)方面，RUNX3 失活和VEGF激活在結(jié)腸癌進(jìn)程和發(fā)展過程中都起著至關(guān)重要的作用，通過對潛在的機(jī)制加強(qiáng)深入性的研究，能夠?qū)笃诮Y(jié)腸癌的治療和診斷提供有利的依據(jù)。VEGF 通過增加血管的通透性，導(dǎo)致血漿外滲，增加間質(zhì)內(nèi)液體量和壓力，加快了淋巴回流，從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移。因此，我們認(rèn)為RUNX3，VEGF 與MVD 聯(lián)合檢測能夠有效對結(jié)腸癌進(jìn)行監(jiān)測，同時還可以有效抑制腫瘤血管生成的相關(guān)因子，可以基于多個靶點(diǎn)來有效抑制腫瘤血管的形成，能夠?yàn)榕R床治療提供有力的依據(jù)，另外，對掌握結(jié)腸癌的生物學(xué)習(xí)行為和改善預(yù)后都可以起到?jīng)Q定性的作用。

綜上所述，以RUNX3 為靶點(diǎn)，聯(lián)合VEGF 對結(jié)腸癌的抗血管生成治療，該治療方案具有廣闊的發(fā)展前景，通過加強(qiáng)進(jìn)一步的研究，希望RUNX3 可以為診斷結(jié)腸癌提供有利的依據(jù)。