趙 丹

（衡水學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院 河北 衡水053000）

純露是指芳香植物在進(jìn)行水中蒸餾萃取的過(guò)程中，提取精油時(shí)分離出來(lái)的一種飽和的蒸餾原液，是精油的一種副產(chǎn)品，成分無(wú)雜，純凈，香味清新雅淡[1]。純露中含礦物養(yǎng)分單寧酸及類(lèi)黃酮，這些是精油中缺乏的，由于其濃度很低，皮膚很容易吸收，并且沒(méi)有任何香精和酒精的成分，溫和無(wú)刺激性，受到許多女性的青睞，尤其是一些肌膚敏感的女性。純露具有良好的抑菌性[2]，不同植物純露抑菌性效果存在差異，篩選優(yōu)良純露需要對(duì)其進(jìn)行抑菌性試驗(yàn)。國(guó)內(nèi)純露市場(chǎng)缺少抑菌性方向的研究，純露應(yīng)用功能性較為單一。通過(guò)研究常見(jiàn)藥用植物的抑菌性，兼顧純露其他特性，以期開(kāi)發(fā)篩選出新型抑菌性強(qiáng)、多功能的優(yōu)質(zhì)純露，拓寬藥用植物在化妝品、醫(yī)藥等方面的運(yùn)用渠道。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

1.1.1 藥用植物。蒲公英、生姜、薄荷。

1.1.2 菌種。大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，由衡水學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.3 試驗(yàn)藥品。牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂(均為國(guó)產(chǎn)分析純)，蒸餾水、超純水。

1.2 試驗(yàn)儀器與設(shè)備。SW-CJ-2F超凈工作臺(tái)、BSD-250全溫振蕩培養(yǎng)箱、SPX-150B-Z生化培養(yǎng)箱、BGZ-140電熱鼓風(fēng)干燥箱、YXQ-LS-50SII立式壓力蒸汽滅菌鍋、移液槍、蒸餾裝置、游標(biāo)卡尺、pH計(jì)、皮膚水分測(cè)試儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 純露的提取。選取常見(jiàn)的藥用植物蒲公英、生姜、薄荷，蒸餾水清洗干凈，在超凈工作臺(tái)中將材料和超純水按1∶2的比例加入蒸餾瓶中，整理裝置使其處于密閉狀態(tài)，用水蒸氣蒸餾法[3，4]蒸餾萃取出3種植物純露。將提取的3種純露分別裝入滅菌的棕色試劑瓶中，于4℃冰箱中避光保存。

1.3.2 菌種活化。在超凈工作臺(tái)中，用接種環(huán)分別將枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌菌斑在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上劃線，37℃培養(yǎng)3 d。挑取單菌落接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)20～24 h，使菌液濃度達(dá)到1×105～106CFU/mL。

1.4 純露抑菌性測(cè)定

1.4.1 紙片抑菌圈法[5]。用打孔器將濾紙裁成6 mm的圓片，干熱滅菌備用。在凈化工作臺(tái)中進(jìn)行無(wú)菌操作，將活化濃度為1×105～106CFU/mL的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌，用移液器分別吸取100μL接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，并用滅菌的涂布棒涂布均勻，在每個(gè)含菌培養(yǎng)基上放置4個(gè)濾紙片，將濾紙片均勻分布在培養(yǎng)基上，其中3個(gè)濾紙片分別滴加5μL蒲公英、生姜、薄荷純露，另1個(gè)濾紙片滴加5μL滅菌的超純水作為對(duì)照。3種純露、3種菌種做3組平行試驗(yàn)。放在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察菌落生長(zhǎng)情況，用十字交叉法測(cè)量抑菌圈的大小，記錄并整理好試驗(yàn)數(shù)據(jù)。由抑菌圈的直徑大小比較純露的抑菌性，以滅菌的超純水作為對(duì)照。抑菌性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1[6]。

表1 抑菌圈法抑菌性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.4.2 自然沉降法。本試驗(yàn)將3種藥用植物純露，在無(wú)菌條件下用移液器分別吸取150μl的純露在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，用涂布棒涂布均勻。以滅菌的超純水為空白對(duì)照。在衡水學(xué)院實(shí)驗(yàn)樓進(jìn)行自然沉降試驗(yàn)30 min。沉降結(jié)束后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24 h，計(jì)數(shù)并統(tǒng)計(jì)結(jié)果。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)計(jì)數(shù)后，觀測(cè)培養(yǎng)皿中菌落的生長(zhǎng)狀況，以此來(lái)判斷純露的抑菌效果[7]。

1.5 純露酸堿度的測(cè)定。用pH計(jì)分別測(cè)定3種純露的酸堿度。

1.6 純露保濕性能比較。選用人體法[8，9]進(jìn)行3種純露保濕性能的比較，以5%甘油作為陽(yáng)性對(duì)照。招募30名皮膚健康的志愿者，在室溫22℃±2℃、相對(duì)濕度40%～50%的環(huán)境中，用皮膚水分測(cè)試儀進(jìn)行測(cè)試。首先將志愿者的手臂清洗干凈自然晾干，在手臂內(nèi)側(cè)畫(huà)出3 cm×3 cm的5個(gè)區(qū)域進(jìn)行測(cè)試，用移液槍吸取不同純露，以(2.0×0.2)mg/cm2的濃度分別涂抹在手臂的測(cè)試區(qū)域，用戴乳膠手套的手指按摩至吸收，用皮膚水分測(cè)試儀分別測(cè)量各個(gè)位置的含水量[10]，共設(shè)置7個(gè)時(shí)間梯度，分別是：0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min，同時(shí)間段同一位置重復(fù)3次測(cè)定皮膚水分含量，記錄并統(tǒng)計(jì)，最后求平均值，計(jì)算在測(cè)試時(shí)間內(nèi)皮膚水分變化率。皮膚水分變化率為皮膚水分含量的變化值與涂抹純露前的測(cè)定值之比。

2 結(jié)果與分析

2.1 3 種藥用植物純露體外抑菌試驗(yàn)。本試驗(yàn)選用枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌3種菌種對(duì)3種純露進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。通過(guò)試驗(yàn)得出3種純露對(duì)枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果明顯，但對(duì)大腸桿菌無(wú)抑菌作用。其中蒲公英、生姜、薄荷純露對(duì)枯草芽孢桿菌平均抑菌圈直徑分別為12.48 mm、11.30 mm、10.90 mm，對(duì)枯草芽孢桿菌的敏感度達(dá)到中度敏感，抑菌強(qiáng)度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英、生姜、薄荷純露對(duì)金黃色葡萄球菌平均抑菌圈直徑分別為15.63 mm、13.25 mm、12.07 mm，對(duì)金黃色葡萄球菌的敏感度達(dá)到中度敏感，抑菌強(qiáng)度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英純露對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌性，結(jié)果如表2。

表2 3種純露對(duì)3種供試菌的抑菌作用

2.2 自然沉降法試驗(yàn)。通過(guò)自然沉降試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)各培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，所選3種藥用植物純露培養(yǎng)皿的菌落數(shù)明顯低于對(duì)照菌落數(shù)，比較結(jié)果如圖1，通過(guò)本試驗(yàn)可以證明，這3種藥用植物純露均具有抑菌性，抑菌效果：蒲公英＞生姜＞薄荷。

圖1 自然沉降法藥用植物純露抗菌性試驗(yàn)計(jì)數(shù)結(jié)果

2.3 純露酸堿度測(cè)定結(jié)果。用pH計(jì)測(cè)定3種純露的酸堿性，測(cè)定結(jié)果顯示3種純露均為弱酸性，蒲公英純露pH值為5.40，生姜純露pH值為5.53，薄荷純露pH值為5.61，人體皮膚的pH范圍是4.2～6.5[11]，pH值5～6的護(hù)膚品是最適合人體皮膚的，因此這3種純露均符合標(biāo)準(zhǔn)，適合用來(lái)做護(hù)膚品，不會(huì)對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激。

表3 3種純露酸堿性測(cè)定結(jié)果

2.4 純露保濕性能測(cè)定結(jié)果。將純露和5%的甘油分別涂抹到手臂內(nèi)側(cè)，利用皮膚水分測(cè)試儀對(duì)2 h內(nèi)的皮膚水分變化率進(jìn)行測(cè)定。在0～90 min內(nèi)，蒲公英和薄荷純露的皮膚水分變化率高于5%甘油，具有顯著性差異(P＜0.05)，在達(dá)到120 min時(shí)無(wú)顯著性差異。在0～120 min內(nèi)，生姜純露的皮膚水分變化率均低于5%甘油。純露保濕性能測(cè)定結(jié)果表明，蒲公英和薄荷純露保濕能力高于5%甘油，可以作為一種天然保濕劑使用。

圖2 使用純露后的皮膚水分變化率

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)選用蒲公英、生姜、薄荷3種常見(jiàn)藥用植物進(jìn)行純露的提取，研究了這3種純露對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌3種細(xì)菌的抑菌性，并對(duì)這3種純露的pH值、皮膚水分變化率進(jìn)行測(cè)定。

3.1 在抑菌性試驗(yàn)中，紙片法試驗(yàn)得出3種純露均對(duì)枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌具有抑菌作用，且對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最強(qiáng)，3種純露對(duì)大腸桿菌無(wú)抑菌性。3種純露的抑菌效果為蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英純露的抑菌性最強(qiáng)。自然沉降法試驗(yàn)得出這3種藥用植物純露均具有抑菌性，抑菌效果為蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英純露的抑菌性最強(qiáng)。

3.2 純露酸堿度測(cè)定試驗(yàn)中，得出3種純露均呈弱酸性，與人體正常皮膚所需pH值相符，適合做皮膚的護(hù)理產(chǎn)品，不會(huì)因?yàn)閜H值對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激。

3.3 通過(guò)皮膚水分變化率的測(cè)定可以得出，蒲公英和薄荷純露保濕能力高于5%甘油，可以作為天然保濕劑使用，其中蒲公英純露的保濕性能最佳。

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果表明，蒲公英純露在供試的3種藥用植物純露中抑菌性最強(qiáng)，保濕性能最佳。對(duì)藥用植物的綜合利用和開(kāi)發(fā)有借鑒意義，可以為蒲公英附加值產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)要注意試驗(yàn)操作誤差，如在純露提取過(guò)程，需要反復(fù)摸索藥用植物和超純水的比例，保證純露的提取效率；菌種的放置時(shí)間會(huì)對(duì)菌種的活性產(chǎn)生影響，避免菌種存放時(shí)間過(guò)久，若菌種活性降低也可以通過(guò)多次接種保持菌種的活性，試驗(yàn)過(guò)程中要排除因菌種活性降低對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。