杜鳳嬌，李瑞岐，朱玉琴，歐陽能勇，區(qū)頌邦，王文軍

（中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院生殖中心，廣東廣州 510120）

在體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）周期中，為使配子和胚胎在體外能夠良好的生長發(fā)育，體外受精（in vitro fertilization，IVF）實驗室執(zhí)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制與管理，包括實驗室儀器設(shè)備、培養(yǎng)用耗材與培養(yǎng)液、技術(shù)人員、培養(yǎng)環(huán)境等，實驗室程序和操作的每一步都必須以嚴(yán)格的無菌技術(shù)紀(jì)律進行。然而人類泌尿生殖系統(tǒng)不能被認(rèn)為是完全無菌的，經(jīng)陰道穿刺所獲卵泡液及手淫法所獲精液可能攜帶微生物，胚胎在體外培養(yǎng)的各個環(huán)節(jié)也易受到微生物的污染，種種原因均會導(dǎo)致IVF-ET周期中胚胎污染事件的發(fā)生，并且難以杜絕［1-2］。由于胚胎污染最終導(dǎo)致的無可移植胚胎，不僅給患者帶來時間和金錢的損失，也帶來一定的精神損害［3］。最大程度地避免胚胎污染事件發(fā)生，制定有效的胚胎污染處理措施尤為重要。目前對于IVF-ET周期中胚胎污染的研究報道較少，國內(nèi)外分別報道過最多38例［4］和97例［5］胚胎污染的發(fā)生，但其納入的總樣本量、研究年限等均帶有局限性，此外，對于污染周期在體外培養(yǎng)不同天數(shù)下卵泡液、精液、培養(yǎng)液相關(guān)標(biāo)本的污染發(fā)現(xiàn)率，三種標(biāo)本的細(xì)菌類型差異比較，以及胚胎在新鮮周期和解凍周期移植后的臨床結(jié)局比較尚未見報道。本研究納入了10 年的胚胎污染資料，樣本量接近3 萬周期，全面系統(tǒng)的分析了IVF 實驗室胚胎污染周期的各項數(shù)據(jù)，比較了胚胎污染發(fā)生的頻率、污染原因、污染微生物種類、以及污染周期的實驗室培養(yǎng)及臨床結(jié)局?jǐn)?shù)據(jù)，旨在探討IVF 實驗室胚胎污染的發(fā)生情況，明確胚胎污染周期的實驗室及臨床結(jié)局，以期為建立更完善的IVF 實驗室胚胎培養(yǎng)體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究統(tǒng)計了2010 年1 月1 日至2020 年12 月31 日在中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院生殖中心的29 583 個IVF-ET 周期資料，納入的周期受精方式包括體外受精（IVF）、卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）、半體外受精半卵胞漿內(nèi)單精子注射（IVF-ICSI split insemination，h-ICSI）、補救性卵胞漿內(nèi)單精子注射（rescue intracytoplasmic sperm injection，R-ICSI）四種類型。未獲卵周期及凍卵周期未納入。本研究已通過中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有污染周期胚胎去向決定均經(jīng)過患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 污染的判斷 在胚胎體外培養(yǎng)的第1～3 天，若在高倍鏡下觀察到培養(yǎng)液滴出現(xiàn)不明雜質(zhì)，部分表現(xiàn)為高密集性或高活動性，同時部分患者的胚胎培養(yǎng)液滴肉眼觀察伴有輕度或重度渾濁，或部分患者胚胎出現(xiàn)不明原因的大量退化或死亡，隨后對患者取卵日留存的卵泡液和精液取樣，高倍鏡下鏡檢發(fā)現(xiàn)類似的高密集性或高活動性的不明雜質(zhì)，或精子大量死亡，則初步判斷為疑似微生物污染。

1.2.2 污染胚胎的處理 發(fā)現(xiàn)污染后，立即用提前平衡好的新的培養(yǎng)液對污染胚胎進行反復(fù)洗滌，做到一個胚胎一根移卵針，每個胚胎洗滌所用培養(yǎng)液不混用。污染嚴(yán)重時采用在洗滌液中添加抗生素、胚胎透明帶削薄或去透明帶等特殊方法處理。處理好的胚胎移入新的培養(yǎng)皿和獨立的傳統(tǒng)培養(yǎng)箱或Time-lapse 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，并持續(xù)觀察。后續(xù)培養(yǎng)中如發(fā)現(xiàn)污染再次出現(xiàn)，采用同樣的處理方法。被污染的胚胎在處理后一般均選擇囊胚培養(yǎng)，以鑒別后續(xù)是否繼續(xù)存在污染，最終選擇處理成功不繼續(xù)帶菌的胚胎進行移植或冷凍。

1.2.3 污染標(biāo)本的送檢與微生物鑒定 發(fā)現(xiàn)胚胎污染后，及時讓患者知情，在做出送檢建議后征求患者意見是否需要送檢污染標(biāo)本。本研究有12 例污染周期的患者拒絕送檢。需送檢的周期在污染發(fā)現(xiàn)當(dāng)天分別收集患者取卵日留存的卵泡液標(biāo)本、精液標(biāo)本、以及污染胚胎所在培養(yǎng)液滴的培養(yǎng)液標(biāo)本，注意嚴(yán)格的無菌操作。收集的標(biāo)本送至本院檢驗科進行微生物培養(yǎng)與鑒定，3～5 d 后獲得鑒定結(jié)果。

1.2.4 移植前胚胎和患者的準(zhǔn)備 本研究污染周期所有移植的胚胎在移植前均已確認(rèn)不存在微生物污染，并已告知患者詳情征得患者同意。解凍周期首選囊胚培養(yǎng)后移植以再次鑒別胚胎是否存在污染。發(fā)生污染的患者在移植胚胎前，臨床醫(yī)生會根據(jù)患者檢查結(jié)果決定是否采用抗生素治療。如發(fā)現(xiàn)女方存在感染或炎癥等不適宜胚胎移植的情況，將會選擇凍胚，治療結(jié)束后再解凍移植。

1.2.5 污染周期分組及結(jié)局評價 全污染組指患者本周期的所有胚胎均出現(xiàn)污染；部分污染組指在培養(yǎng)結(jié)束前只有部分胚胎污染，部分胚胎未污染；無可用胚胎周期指患者本周期沒有可以移植或冷凍的胚胎，所有胚胎均丟棄；養(yǎng)成囊胚周期指形成三級及以上的可用囊胚；臨床妊娠指患者移植后超聲檢查見孕囊及胎心；活產(chǎn)指患者移植后獲得活胎分娩；本研究的不良妊娠包括晚期自然流產(chǎn)和生化妊娠兩種，其中晚期自然流產(chǎn)指孕12～28 周內(nèi)的自然流產(chǎn)，生化妊娠指移植2 周后測外周血人絨毛膜促性腺激素（β-hCG）≥50 U/L，此后自然流產(chǎn)，且移植后3～4周B超未檢測到宮內(nèi)或?qū)m外妊娠孕囊者。

1.3 統(tǒng)計方法

本研究不同受精方式、培養(yǎng)不同天數(shù)、卵泡液、精液及培養(yǎng)液的胚胎污染情況，微生物的鑒定結(jié)果，無可用胚胎周期及養(yǎng)成囊胚周期情況均用率或構(gòu)成比表示。胚胎移植后的臨床妊娠、活產(chǎn)、不良妊娠結(jié)果用構(gòu)成比表示。采用卡方檢驗或Fisher′s精確檢驗進行比較。使用SPSS 19.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 不同受精方式的胚胎污染率

在29 583 個IVF-ET 周期中，共有70 例胚胎污染，污染率為0.24%（70/29 583）。在4 905 個ICSI周期中未出現(xiàn)1 例污染，而IVF、h-ICSI、R-ICSI 污染率分別為0.28%、0.24%、0.49%。同時，在h-ICSI、R-ICSI 中出現(xiàn)污染的胚胎均是IVF 部分受精來源的胚胎，ICSI部分受精來源的胚胎均未污染。在IVF 周期中，每年都會出現(xiàn)胚胎污染，在2010 年污染發(fā)生率高達(dá)0.83%（表1）。

表1 不同受精方式胚胎污染情況比較Table 1 The incidence of microbial contamination during in vitro culture and the distribution number of different fer?tilization treatment cycles［n（%）］

2.2 不同培養(yǎng)天數(shù)下三種類型標(biāo)本的污染率

70 例胚胎污染周期中（表2），送檢周期58 例，送檢標(biāo)本總數(shù)159 例。在不同培養(yǎng)天數(shù)下，胚胎污染發(fā)現(xiàn)率最高的在D2（54.3%），其次為D1（32.9%），污染率最低的為D3（12.9%）。同時，D1及D2送檢標(biāo)本的污染率分別達(dá)到75.5%和75.6%，略高于D3 的70.8%。精液在D1、D2 的污染率顯著高于卵泡液（D1：83.3%vs.37.5%，D2：84.6%vs.50.0%），D3 的污染率也高于卵泡液（62.5%vs.50.0%），但無統(tǒng)計學(xué)差異。

表2 不同培養(yǎng)天數(shù)下三種類型標(biāo)本的污染情況比較Table 2 The number of samples examined and microbial contaminated on different culture days

卵泡液、精液、以及早期胚胎生長的各階段，都有可能被微生物污染。圖1A、B分別展示了污染發(fā)現(xiàn)當(dāng)天，高倍鏡下檢查取卵日為患者留存的卵泡液和精液標(biāo)本，可見卵泡液中大量退化的紅細(xì)胞和精液中大量死亡的精子，并且兩種標(biāo)本中均可見密集分布的微生物，經(jīng)鑒定卵泡液中微生物為克雷伯桿菌，精液中微生物為大腸桿菌；圖1C、D分別展示了受精后第1 天的受精卵和第2 天的四細(xì)胞胚胎，受精卵周圍可見大量長絲狀細(xì)菌，四細(xì)胞胚胎周圍可見大量密集均勻分布的微生物，經(jīng)鑒定受精卵污染微生物為無乳鏈球菌，四細(xì)胞胚胎污染微生物為大腸桿菌+糞腸球菌。

圖1 普通倒置顯微鏡下卵泡液、精液、受精卵、胚胎的污染情形Fig.1 Contamination of follicular fluid，semen，fertilized egg and embryo under general inverted microscope

2.3 送檢標(biāo)本的微生物鑒定結(jié)果

通過對送檢的159 例標(biāo)本進行微生物培養(yǎng)與鑒定（表3），結(jié)果顯示共存在11 種類型的微生物，除1 例培養(yǎng)液為真菌（霉菌）污染外，其余均為細(xì)菌污染。卵泡液污染率最高的微生物為糞腸球菌（18.0%），精液和培養(yǎng)液污染率最高的均為大腸桿菌（59.6%，66.7%）。此外出現(xiàn)了5種類型的共同污染，污染例數(shù)最高的是大腸桿菌與糞腸球菌。

表3 三種類型標(biāo)本的微生物鑒定結(jié)果分析Table 3 Incidence of identification of microbes in different contaminated samples［n（%）］

此外，在送檢的58 例污染周期中，卵泡液、精液、培養(yǎng)液3 種標(biāo)本均進行送檢的周期為47 例，我們比較了這完整送檢的47 例污染周期培養(yǎng)液微生物類型與卵泡液、精液微生物類型的一致性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有5 例污染周期的培養(yǎng)液微生物類型與卵泡液或精液中微生物類型均不一致，病例1、病例2卵泡液和精液均污染了相同類型細(xì)菌，但培養(yǎng)液分別被奇異變形桿菌、葡萄球菌污染，病例4、病例5 卵泡液和精液均無菌生長，但培養(yǎng)液分別被無乳鏈球菌及霉菌污染（表4）。

表4 5例污染周期胚胎培養(yǎng)液與卵泡液、精液的微生物類型鑒定結(jié)果差異Table 4 Results of difference of microbe types between culture medium and follicular fluid and semen in 5 contamination cycles

2.4 胚胎污染周期的實驗室及臨床結(jié)局

將70 例胚胎污染周期按污染情況分組，全污染組42 例，部分污染組28 例。全污染組有34 例最終無可用胚胎，其比率顯著高于部分污染組的6 例（81.0%vs.21.4%）。全污染組7 例養(yǎng)囊胚周期僅2例形成囊胚（28.6%），而部分污染組12 例養(yǎng)囊胚周期有5 例養(yǎng)成（41.2%），但無顯著性差異。比較新鮮移植周期與解凍移植周期的臨床妊娠率、活產(chǎn)率及不良妊娠情況，全污染組分別有6 例新鮮移植和2例解凍移植，最終僅1例新鮮周期活產(chǎn)，部分污染組分別有16 例新鮮移植和13 例解凍移植，最終均有5 例臨床妊娠和4 例活產(chǎn)。同時本研究共有4 例不良妊娠出現(xiàn)，且均來自部分污染組，新鮮周期與解凍周期均發(fā)生2 例不良妊娠，兩組皆是1 例晚期自然流產(chǎn)，1例生化妊娠（表5）。

表5 全污染周期與部分污染周期的實驗室及臨床結(jié)局比較Table 5 The development and clinical outcomes of embryos in total contaminated cycles and partial contaminated cycles

3 討論

本研究回顧性分析了基于10 年大數(shù)據(jù)基礎(chǔ)的IVF-ET 胚胎污染情況，統(tǒng)計了各項實驗室和臨床指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)污染胚胎均發(fā)生在IVF 授精來源的胚胎，ICSI 胚胎并未污染，且胚胎污染最常在體外培養(yǎng)第2 天發(fā)現(xiàn)，精液帶菌似乎是造成IVF 胚胎污染的主要原因，大腸桿菌和糞腸球菌是不可忽視的污染菌種，同時，當(dāng)一個周期只有部分而非全部胚胎發(fā)生污染時，仍有相對較好的實驗室培養(yǎng)和臨床結(jié)局。

胚胎污染是IVF 胚胎培養(yǎng)過程中的小概率事件，目前報道較少。本研究統(tǒng)計的胚胎污染率0.24%，與國內(nèi)外幾項研究［4-7］所報道的胚胎污染率0.17%～0.86%較一致。IVF 周期中2010 年污染率高達(dá)0.83%，推測與胚胎實驗室建立初期培養(yǎng)體系與環(huán)境的管理及監(jiān)測經(jīng)驗有限有關(guān)。ICSI 周期胚胎未發(fā)生污染，h-ICSI 及R-ICSI 周期發(fā)生污染的胚胎均來源于IVF 受精部分，這與Kastrop 等［5］報道的一項較大樣本量95 例污染的結(jié)果相一致。推測原因可能分為兩方面：第一，ICSI 只需選擇一條精子與卵子受精，而IVF 需要幾百萬條精子參與卵子受精，IVF 更易受到來自男方精液中微生物的可能污染；第二，ICSI 注射前需使用透明質(zhì)酸酶去除卵子卵丘顆粒細(xì)胞，而已有文獻(xiàn)報道透明質(zhì)酸酶可有效去除體外培養(yǎng)的豬胚胎攜帶的微生物［8］，同時在緩沖液中的反復(fù)吹洗動作可能有助于避免來自女方卵母細(xì)胞攜帶的微生物污染。

IVF 胚胎體外培養(yǎng)時多種原因均可造成胚胎污染。報道稱女性或男性的泌尿生殖系統(tǒng)感染或疾病，手術(shù)穿刺取卵、手淫取精等不規(guī)范操作可能導(dǎo)致卵泡液或精液污染，IVF 培養(yǎng)體系和環(huán)境，如層流系統(tǒng)、儀器設(shè)備、器皿耗材、培養(yǎng)液及胚胎技術(shù)人員操作等也是潛在引入外源性微生物的來源［3，9］。我們發(fā)現(xiàn)在體外培養(yǎng)的第1～3 天，D2 污染發(fā)現(xiàn)率最高，其次是D1 和D3，推測可能與微生物的來源、生長模式及培養(yǎng)液中的抗生素半衰期有關(guān)。微生物在體外培養(yǎng)基中生長繁殖呈現(xiàn)遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期的生長模式［10］，D1 可能是細(xì)菌的遲緩期生長，無論內(nèi)源或外源性的細(xì)菌來源，在D1由于微生物繁殖量的限制，部分菌種形態(tài)無法在觀察胚胎生長時發(fā)覺；D2 可能是細(xì)菌從對數(shù)期到穩(wěn)定期的生長，細(xì)菌繁殖量逐漸達(dá)到峰值，同時培養(yǎng)液抗生素含量及濃度的降低均不足以再抑制大量細(xì)菌繁殖，此時極易肉眼觀察到培養(yǎng)液滴的渾濁，顯微鏡下也易觀察到大量細(xì)菌生長；D3 污染推測可能與少部分菌種生長速度緩慢有關(guān)，或更可能是IVF培養(yǎng)過程中引入細(xì)菌的逐漸生長。

D1-D3精液的污染率均高于卵泡液，說明精液可能是導(dǎo)致胚胎污染的主要原因，這一結(jié)果與國內(nèi)外幾項統(tǒng)計結(jié)果均一致［5，11-12］。研究報道男性生殖道存在大量活躍的微生物，在對無生殖系統(tǒng)感染臨床癥狀的男性精液進行微生物培養(yǎng)觀察及PCR 鑒定后，其陽性率可達(dá)13%～97%［2，7，13］，最近的一項研究［14］也表明，革蘭氏陽性球菌在精液樣本中的患病率很高，如葡萄球菌陽性率達(dá)80%，病毒鏈球菌陽性率達(dá)50%。精液污染的來源可能來自男性患有炎癥或尿道細(xì)菌污染。精液由精子和精漿組成，精漿主要來源于前列腺、精囊腺、尿道球腺分泌的液體，任何一個腺體的感染都可能導(dǎo)致精液帶菌。此外，射精時精液經(jīng)過尿道，而男性尿道常有微生物寄居，如常見的生殖道支原體、需氧或厭氧菌，以及致病菌淋球菌、滴蟲等。Willén 等［15］報道男性末端尿中的冠狀溝菌株陽性率達(dá)71%，Cottell 等［16］報道男性精液以及前、中段尿液的細(xì)菌培養(yǎng)陽性率分別是51%、37%及27%，這些均提示尿道來源的精液污染。此外，取精時會陰皮膚中細(xì)菌也可能是誘發(fā)精液帶菌的主要因素。而在IVF 實驗室對帶有微生物的精液進行洗滌之后，精液中的微生物可能依舊存在［17］。因此精液來源的細(xì)菌會導(dǎo)致IVF 周期有極大的污染風(fēng)險。對ART 無癥狀感染的患者夫婦進行生殖道標(biāo)本或卵泡液及精液標(biāo)本微生物培養(yǎng)后，可得到上百種臨床菌株，多以細(xì)菌為主，也存在真菌和支原體。Ricci 等［18］報道在855 份精液及陰道、宮頸拭子標(biāo)本中共發(fā)現(xiàn)195 個菌株，糞腸球菌流行率最高，其次為鏈球菌和大腸桿菌。Kastrop［5］等報道在ART 周期中引起胚胎污染的主要微生物類型為大腸桿菌和念珠菌。本研究發(fā)現(xiàn)精液和卵泡液中的大腸桿菌及糞腸球菌是引起污染的主要因素，同時也有真菌的存在，細(xì)菌種類占比與樣本量大小有一定關(guān)系。

此外，5 例污染周期的胚胎培養(yǎng)液微生物類型與卵泡液、精液的微生物類型均不一致。病例1、病例2 的卵泡液及精液均帶菌，但未檢出奇異變形桿菌和葡萄球菌，推測培養(yǎng)液不同類型的細(xì)菌來源可能分為兩個方面。第一，患者的卵泡液或精液同時被兩種細(xì)菌污染，如病例1 可能同時被糞腸球菌和奇異變形桿菌污染，但卵泡液、精液、培養(yǎng)液三者成分不同、酸堿度及滲透壓不同、抗生素含量及類型不同、保存環(huán)境如溫濕度、氧氣及二氧化碳等氣體環(huán)境等不同，因此為不同類型細(xì)菌生長繁殖所提供的條件存在差異，兩種細(xì)菌同時存在同時繁殖，相互競爭營養(yǎng)，生長條件更適宜的細(xì)菌會迅速大量繁殖，而生長條件不利的另一菌種可能繁殖量極小或基本衰亡，普通的鑒定方法無法檢測成功；第二，卵泡液或精液被一種細(xì)菌污染，但來自于卵泡液或精液的細(xì)菌在胚胎被轉(zhuǎn)移進培養(yǎng)液前經(jīng)過洗滌等操作已成功大量去除，或培養(yǎng)液提供的生長條件以及抗生素的存在等不適宜此種細(xì)菌的生長繁殖，從而導(dǎo)致其衰亡，而培養(yǎng)液中另一種細(xì)菌的出現(xiàn)可能與操作人員的無菌操作不嚴(yán)格、或培養(yǎng)箱微環(huán)境及培養(yǎng)室大環(huán)境不潔凈、以及培養(yǎng)用的耗材、器皿等不潔凈或受到污染有關(guān)。病例4、5 的卵泡液及精液均無菌生長，推測其培養(yǎng)液的污染亦來自操作人員、培養(yǎng)環(huán)境及耗材的污染等。此外，病例5 霉菌的污染更大可能是培養(yǎng)箱內(nèi)不潔凈，滋生霉菌導(dǎo)致的污染。

當(dāng)污染發(fā)生時，全污染組的無可利用胚胎周期率達(dá)81.0%，養(yǎng)成囊胚周期率僅28.6%，說明微生物對早期胚胎的生長發(fā)育產(chǎn)生明顯的抑制和損害作用。其機制可能是微生物會損害配子的超微結(jié)構(gòu)，致使減數(shù)分裂過程異常和非整倍體率增加，損害受精過程并降低正常受精率［19-21］，且微生物還會與胚胎競爭培養(yǎng)液供給的營養(yǎng)物質(zhì)，胚胎得不到必須的生長因子。此外，細(xì)菌分解死亡時產(chǎn)生的內(nèi)毒素會使受精率下降，胚胎碎片率及非整倍體率增加，胚胎退化及死亡率增加［22］。胚胎發(fā)生污染后臨床結(jié)局不理想，全污染組僅1 例妊娠，這與Selman 等［23］研究報道的污染周期的胚胎植入率和臨床妊娠率降低結(jié)果相一致。此外，本研究的部分污染組共有4 例不良妊娠出現(xiàn)，其中3 例移植的都是未污染過的胚胎，1 例移植胚胎D3 發(fā)現(xiàn)污染，經(jīng)洗滌換液處理后D5 并未再次污染，而后冷凍后解凍移植。因此4 例不良妊娠因為胚胎攜帶細(xì)菌進入子宮并感染子宮從而引發(fā)流產(chǎn)的可能性不大，可能與胚胎本身染色體異?；蛭⑸飳?dǎo)致胚胎染色體異常，以及患者本身的母體因素和環(huán)境因素有關(guān)。研究表明，不孕婦女本身的生殖道感染或炎癥會改變子宮局部的微生物體系，使氧化應(yīng)激反應(yīng)和活性氧釋放增加，對胚胎的生存及發(fā)育不利［24-25］，此外，子宮感染時其內(nèi)膜的容受性會降低，將不利于胚胎在子宮的附植存活［5，26］。當(dāng)胚胎污染發(fā)生時，及時有效的采取補救手段，能使一部分被污染的胚胎恢復(fù)正常，并獲得較好的臨床結(jié)局。本中心在胚胎污染發(fā)生時，立即對胚胎進行反復(fù)多次洗滌及更換培養(yǎng)液，添加一定量的抗生素抑制細(xì)菌生長，削薄或去除胚胎透明帶后繼續(xù)培養(yǎng)，女性在胚胎移植前進行抗生素治療等手段，在部分污染組獲得了相對較好的培養(yǎng)效果和臨床結(jié)局。

ART周期中的胚胎污染難以杜絕，盡量避免污染事件的發(fā)生尤為重要。我們認(rèn)為，針對精液的污染，重點要排查男性泌尿生殖系統(tǒng)感染，保證取精室的潔凈程度，取精前加強男性手淫取精的衛(wèi)生宣教，強調(diào)精液污染可能性，指導(dǎo)男性取精前必須嚴(yán)格洗手、清洗會陰、先排尿再手淫取精，強調(diào)精杯無菌使用的重要性，指導(dǎo)其勿接觸精杯內(nèi)壁，取精過程中如出現(xiàn)污染可能，在精液交接前需及時與醫(yī)務(wù)人員溝通；針對卵泡液的污染，重點要術(shù)前做好清潔工作，注意術(shù)中的無菌操作，排查女性泌尿生殖系統(tǒng)感染；針對醫(yī)務(wù)人員，重點要規(guī)范各項操作流程，加強無菌操作培訓(xùn)，做好人員質(zhì)控；針對培養(yǎng)體系及環(huán)境，重點要落實各項質(zhì)控制度，制定胚胎污染處理流程。胚胎污染發(fā)生時，要及時有效地做出補救措施，并追溯污染原因，做好當(dāng)時的實驗室及臨床自查質(zhì)控，以避免連續(xù)污染事件發(fā)生。

本研究具有一定局限性。首先，胚胎污染大多是微生物生長到一定量時才能夠被發(fā)現(xiàn)，對于一些生長緩慢、繁殖量較小的微生物，甚至體積非常小的支原體、病毒導(dǎo)致的污染，普通倒置顯微鏡難以發(fā)現(xiàn)。其次，本研究納入的污染樣本量仍不夠龐大，依然需要未來多年的數(shù)據(jù)積累。