秦強國,張國平,李瑞麗

(焦作市中心血站 體采科,河南 焦作454000)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是常見的攜帶性傳染性疾病，主要傳播途徑是輸血傳播[1]。美國有220萬人患有慢性乙型肝炎，我國是HBV高發(fā)地，對獻(xiàn)血人群進(jìn)行HBV檢測尤為重要，目前輸血安全已經(jīng)成為全球關(guān)注的焦點[2]。近年來我國醫(yī)療檢測技術(shù)進(jìn)步飛速，在對HBV檢測的準(zhǔn)確率也不斷提高，有效減少了輸血傳播的概率[3]。傳統(tǒng)的HBV檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)(簡稱酶免法)，利用HBV表面抗原進(jìn)行檢測，但是由于HBV存在窗口期、隱匿性HBV、病毒載量低等問題，使HBV酶免法檢測存在一定缺陷，出現(xiàn)窗口期的HBV感染患者漏診風(fēng)險較大[4-5]。有研究表明[6]，2001年美國因獻(xiàn)血者HBV窗口期導(dǎo)致HBV傳播的流行率達(dá)0.0097%，且至2008年，HBV流行率并未下降。為進(jìn)一步降低輸血傳播HBV病毒的風(fēng)險，縮短通過輸血傳播HBV檢測的窗口期，國家衛(wèi)生行政主管部門要求2015年全國血站對獻(xiàn)血者血液篩查實行核酸檢測，全面推廣核酸檢測篩查。核酸檢測，具有靈敏度高的特點，對血液混合檢驗，通量大，效率高，后續(xù)需要對有反應(yīng)性的樣本進(jìn)行拆分檢測，以確定反應(yīng)性樣本。在獻(xiàn)血者血液篩查中，酶免法聯(lián)合核酸檢測可以降低血液HBV殘余的風(fēng)險[7]。本研究討論酶免法及混樣核酸檢測法篩查獻(xiàn)血者HBV感染，旨在了解獻(xiàn)血者混樣核酸檢測聯(lián)合酶免法篩查獻(xiàn)血者HBV感染的殘余風(fēng)險。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

1.1.1選取2016年1月-2019年12月焦作市中心血站無償獻(xiàn)血者182 525人，所有獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前均已同意獻(xiàn)血且獻(xiàn)血者末梢血體檢合格，獻(xiàn)血者均符合國家《獻(xiàn)血者健康檢查要求》。

1.1.2182 525人獻(xiàn)血者同步每人留取血液標(biāo)本5 ml各3管：第1管肝素鈉用于ELISA(初檢)，第2管EDTA-K2 ELISA(復(fù)檢)和第3管帶分離膠EDTA-K2用于NAT檢測。標(biāo)本的采集、離心、運送、檢測均嚴(yán)格按照《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015)、(2019)版》執(zhí)行。

1.2 儀器與試劑

1.2.1儀器

Uranus AE 200全自動酶免分析儀(深圳愛康公司)；Chitas BSS1200全自動核酸純化儀(上海浩源生物科技有限公司)；ABI7500實時熒光定量PCR系統(tǒng)(美國ABI公司)；TDL5B臺式大容量低溫離心機(長沙英泰公司)。

1.2.2試劑

ALT試劑盒(上海榮盛)；HBsAg ELISA檢測試劑(法國Bio-Rad公司和北京萬泰)；抗-HCV ELISA檢測試劑(北京萬泰、珠海麗珠)；抗-HIV ELISA檢測試劑(珠海麗珠、法國Bio-Rad)；抗-TP檢測試劑(北京萬泰和珠海麗珠)；HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA NAT試劑盒(PCR熒光法，上海浩源)。

1.3 方法

采用酶免法對HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP分別進(jìn)行2遍測試，由不同檢驗人員使用不同試劑進(jìn)行檢測(不同廠家試劑)。同時用上海浩源核酸檢測系統(tǒng)對酶免法檢測陰性的血液樣本進(jìn)行核酸8人混檢，若pool為無反應(yīng)，核酸混檢結(jié)果為NAT陰性；若pool為有反應(yīng)，則需要進(jìn)行拆分單檢，拆分有反應(yīng)性的標(biāo)本判為NAT陽性。

1.4 酶免法檢測結(jié)果判定

S/CO≥1(S表示樣品OD值，CO表示cutoff值)，判定為陽性，S/CO≤0.7,判定為陰性即合格。0.7

1.5 NAT檢測陽性獻(xiàn)血者調(diào)查追蹤

每隔1個月對HBV檢測陽性獻(xiàn)血者追蹤檢測1次，獻(xiàn)血者每次到就近采血點留血液樣本。每次采集3管，1支用酶免法檢測，2支用于核酸檢測，連續(xù)3次檢測陰性為合格，任何1次或1項檢測陽性為不合格。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

唐山現(xiàn)代9.0軟件中的統(tǒng)計模塊進(jìn)行資料整理，SPSS 20.0軟件分析研究數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 182 525份標(biāo)本酶免法及混樣核酸聯(lián)合檢測結(jié)果不合格占比分析

2016年1月-2019年12月不合格1 493份，不合格率0.82%。2016年、2017年、2018年、2019年獻(xiàn)血后標(biāo)本各項檢測不合格結(jié)果比例分別為1.03%、0.82%、0.75%、0.69%。見表1。

表1 2016-2019年獻(xiàn)血后篩查不合格情況(n/%)

2.2 酶免法檢測結(jié)果

182 525例獻(xiàn)血者中，酶免法檢測出1 144例不合格，不合格率0.63%(1 144/182 525)，見表2。

表2 獻(xiàn)血者2016年1月-2019年12月酶免法檢測結(jié)果

2.3 酶免法檢測合格獻(xiàn)血者核酸檢測結(jié)果

在181 381例2遍酶免法檢測合格的獻(xiàn)血者中，核酸檢測總不合格為167份，不合格率0.092%。核酸檢測出HBV-DNA陽性155例，陽性率0.085%(155/181 381)，HCV-RNA陽性4例，陽性率0.002%(4/181 381)，HIV-RNA陽性8例，陽性率0.004%(8/181 381)，見表3。

表3 酶免法檢測合格獻(xiàn)血者核酸檢測結(jié)果

2.4 追蹤檢測結(jié)果判定

對155例HBV-DNA核酸檢測陽性的獻(xiàn)血者中42例進(jìn)行3次追蹤檢測發(fā)現(xiàn)，酶免法檢測追蹤顯示有0例陽性，核酸檢測追蹤顯示31例陽性，見表4。

表4 42例HBV-DNA核酸檢測陽性3次追蹤檢測結(jié)果判定

3 討論

HBV是一種通過血液傳播的病毒性傳染病，早期該病無明顯的臨床癥狀。我國是人口大國，HBV感染率呈增高趨勢，對獻(xiàn)血人群的血液篩查是減少HBV傳播的重要措施[8]。獻(xiàn)血者血液的質(zhì)量安全決定著輸血者的生命安全，一旦血液中攜帶HBV病毒未被檢測出來，將導(dǎo)致輸血者感染HBV，直接影響患者的生命及家庭安全[9]。但是HBV感染者，由于HBV存在窗口期及HBV的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致HBV有時難被檢測出來，因此需要效率高，準(zhǔn)確高的檢測方法。酶免法檢測HBV常用的傳統(tǒng)方法，常以乙肝表面抗原HBsAg作為檢測指標(biāo)，在血液篩查中具有重要地位[10]。但是由于HBV感染者在窗口期、感染期皆存在隱匿感染，酶免法無法檢測出來，獻(xiàn)血者血液篩查中存在嚴(yán)重的HBV漏檢現(xiàn)象，導(dǎo)致不少輸血者感染HBV。有研究顯示，酶免法檢測獻(xiàn)血者血清結(jié)果呈假陰性是導(dǎo)致輸血者感染HBV的主要途徑[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，2016年1月-2019年12月182 525例獻(xiàn)血者中酶免法檢測HBV檢測出432例不合格，不合格率0.24%，在181 381例2遍酶免法檢測合格的獻(xiàn)血者中,核酸檢測出HBV-DNA陽性155例，不合格率0.085%,提示酶免法篩查獻(xiàn)血者HBV風(fēng)險可能具有漏檢現(xiàn)象。朱麗敏研究發(fā)現(xiàn)[12]混樣核酸檢測法對HBV的診斷比酶免法具有更高的敏感度和特異度。

由于酶免法檢測的局限性，對HBV DNA低載量的、處于窗口期感染或隱匿期感染的獻(xiàn)血者血液樣本無法檢測出是否含HBV，這樣輸血者就暴露在感染HBV的極大風(fēng)險中[13-14]。核酸檢測技術(shù)可以縮短窗口期HBV檢測，同時對隱匿性HBV檢測具有較好的檢測結(jié)果[15]。核酸檢測技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用于美國、日本、英國等20多個國家，作為對獻(xiàn)血者血液篩查是否存在HBV的檢測[16]。周磊等[17]研究報告混樣核酸檢測篩查獻(xiàn)血者HBV感染發(fā)現(xiàn)有141份標(biāo)本存在HBV感染風(fēng)險，拆分后的核酸標(biāo)本再次檢測發(fā)現(xiàn)有4份存在HBV感染，說明混樣核酸檢測與拆分核酸篩檢對于降低輸血感染HBV殘余風(fēng)險具有重要作用，但仍需慎重對待需要重檢的血液樣本，防止漏檢，提高血液的安全性。余占娟等[7]研究發(fā)現(xiàn)混樣核酸檢測可有效的降低HBV輸血感染的殘余風(fēng)險，為輸血安全提供有效的保證。本研究發(fā)現(xiàn)在183 181例2遍酶免法檢測合格的獻(xiàn)血者中，核酸檢測總不合格為167份，不合率0.09%。提示混樣核酸檢測篩查獻(xiàn)血者HBV感染，可能會降低篩查獻(xiàn)血者感染HBV的殘余風(fēng)險。155例HBV-DNA核酸檢測陽性中42例3次追蹤檢測發(fā)現(xiàn)，酶免法檢測追蹤顯示有0例陽性，核酸檢測追蹤顯示有31例陽性，可能是HBV基因發(fā)生了突變，核酸檢測陽性獻(xiàn)血者HBV隱匿性感染比例增加，也增加了輸血傳播HBV的殘余風(fēng)險[18]。

綜上所述，混樣核酸檢測可以彌補酶免法的缺陷，應(yīng)用混樣核酸檢測聯(lián)合酶免法可以大幅度降低篩查獻(xiàn)血者HBV感染的殘余風(fēng)險，但本研究追蹤調(diào)查樣本數(shù)量較少和追蹤時間較短，需進(jìn)一步加大樣本追蹤量，延長追蹤檢測周期，以降低輸血傳播HBV的殘余風(fēng)險。