楊崇儀 吳凡 程賓 王莉 張紅宇

【摘 要】 由于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在復(fù)雜待測組分的定量和定性檢測上相較于單一的色譜法和質(zhì)譜法具有較好的分辨率，更高的靈敏度和準(zhǔn)確性，近年來被廣泛的應(yīng)用于中藥的研究。文章對液相色譜和質(zhì)譜法的原理和在中藥體內(nèi)過程研究中所具備的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行介紹，并通過檢索近15年來在國內(nèi)外發(fā)布的運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究中藥體內(nèi)過程的文獻(xiàn)，對目前不同種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在各種中藥材、中藥方劑和中藥制劑的體內(nèi)過程研究應(yīng)用進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;傳統(tǒng)中藥;藥動學(xué)

【中圖分類號】R917?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）05-0043-06

The application of LC-MS/MS in Study of Pharmacokinetics of Traditional Chinese Medicine

YANG Chongyi WU Fan CHENG Bin WANG Li ZHANG Hongyu

Yunnan institute for food and drug control，Kunming 650011，China

Abstract：Compare with the individual liquid chromatography and mass spectrometry， Liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）has excellent resolution， higher sensitivity and better accuracy when deal with the quantitation and qualitation of the complex components， it was widely used in the research of Traditional Chinese Medicine. In this article， the advantages and disadvantages of liquid chromatography and mass spectrometry? in the research of traditional Chinese medicine have already been pointed out， and we retrieve the published literatures that use the LC-MS methods to study the pharmacokinetics process of traditional Chinese medicine in recent 15 years at home and abroad， and reviewed the research and application of different LC-MS methods in the study of the pharmacokinetics process of Chinese crude drug， Chinese medicinal formula， Chinese medicine preparation.

Keywords：Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry; Traditional Chinese Medicine; Pharmacokinetics

中藥制劑是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以中藥為原料，按規(guī)定的處方和方法加工成的一定劑型，是中醫(yī)傳統(tǒng)理論與西醫(yī)的結(jié)合的產(chǎn)物。在加速中藥現(xiàn)代化以后，中藥注射劑被大量運(yùn)用于臨床治療，由于中藥制劑成分復(fù)雜、多變，加之近年來中藥制劑在臨床使用中的不良反應(yīng)頻發(fā)，中藥制劑的有效成分分析尤其是體內(nèi)過程分析成為了急需解決的問題，也成為了研究的熱點(diǎn)。隨著中藥的藥代動力學(xué)、中藥代謝組學(xué)、中藥配伍機(jī)制等研究的不斷深入，中藥制劑的體內(nèi)過程分析成為不可或缺的手段。中藥制劑本身就是一個非常復(fù)雜的體系，而進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)代謝或發(fā)生復(fù)雜的相互作用后，其組成會更加復(fù)雜，而且這些成分在體內(nèi)含量一般很低。如何在這樣復(fù)雜的體系中對中藥制劑體內(nèi)成分進(jìn)行準(zhǔn)確的分析，成為中藥能否深入研究的關(guān)鍵。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法選擇性強(qiáng)、靈敏度高、分離能力好，不僅能對化合物準(zhǔn)確定量，還能提供化合物大量的結(jié)構(gòu)信息，尤其適合于復(fù)雜體系的成分分析[1]，近年在中藥制劑分析領(lǐng)域迅速廣泛應(yīng)用[2]。

1 液相色譜

色譜的原理是利用待測組分在固定相和流動相的分配系數(shù)不同從而達(dá)到將不同的待測組分分離開來的效果。最常用的液相色譜法是用液體作為流動相的柱色譜法。高效液相色譜法便是基于傳統(tǒng)的液相色譜法而優(yōu)化后得到的方法。

液相色譜的應(yīng)用主要分為兩大類。一類是對某個具體待測物進(jìn)行定性和定量檢測，定性檢測主要根據(jù)待測物與對照品的保留時間來進(jìn)行對照定性。定量測定是通過利用不同濃度的對照品溶液繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的公式來對待測樣品進(jìn)行定量[3]。第二類是指紋圖譜，指紋圖譜是指某些復(fù)雜物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖，指紋圖譜在中藥的分析中占有重要的位置[4-5]。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。

2 串聯(lián)質(zhì)譜

串聯(lián)質(zhì)譜法是指將兩個及兩個以上的質(zhì)譜結(jié)合在一起進(jìn)行分析工作。目前應(yīng)用較多的串聯(lián)質(zhì)譜是指三重四級桿質(zhì)譜（QQQ-MS），第一級和第三級四極桿分析器分別為MS1和MS2， 第二級四極桿分析器的作用是將從MS1得到的各個峰進(jìn)行轟擊，將母離子打碎，碎片離子進(jìn)入MS2再進(jìn)行分析。其他類型的串聯(lián)質(zhì)譜還有四級桿-飛行時間質(zhì)譜（Q-TOF-MS）、四級桿-離子阱質(zhì)譜（Q-IT-MS）以及其他不同串聯(lián)方式的串聯(lián)質(zhì)譜。

雖然串聯(lián)質(zhì)譜可以對化合物進(jìn)行精確的定量和提供有效的結(jié)構(gòu)信息，但是對于樣品的純凈度有較高的要求，尤其對于組份多而復(fù)雜的中藥，在進(jìn)入質(zhì)譜前必須對待測組份進(jìn)行分離純化，所以液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是中藥體內(nèi)過程分析的有力手段。

3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

液相色譜-質(zhì)譜法將應(yīng)用范圍極廣的分離方法與靈敏、專屬、能提供相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來， 因此已成為一種重要的現(xiàn)代分離分析技術(shù)。雖然與液相色譜系統(tǒng)相連的單極質(zhì)譜儀也能夠提供相對分子質(zhì)量的信息， 但不足之處在于基質(zhì)對待測組分的干擾難以排除及待測組分的結(jié)構(gòu)信息不能充分利用，容易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用可在一級質(zhì)譜MS條件下獲得很強(qiáng)的待測組分的準(zhǔn)分子離子峰， 幾乎不產(chǎn)生碎片離子， 并將需要的準(zhǔn)分子離子進(jìn)入下一級質(zhì)譜進(jìn)行多級裂解， 進(jìn)而獲得豐富的離子對信息， 可用來推斷化合物結(jié)構(gòu)， 確認(rèn)目標(biāo)化合物， 辨認(rèn)重疊色譜峰以及在高背景或干擾物存在的情況下對目標(biāo)化合物定量， 因而成為藥物體內(nèi)過程研究中更為常用、更為準(zhǔn)確的工具。根據(jù)不同的質(zhì)量分析器的串聯(lián)方式，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法可分為以下常見的幾種：

3.1 液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（LC-QQQ-MS） 三重四級桿顧名思義是由三個四級桿分析器按照一定的空間順序串聯(lián)而成，每一個四級桿都有其自己獨(dú)立的功能。由于中藥成分復(fù)雜，結(jié)構(gòu)相似，有的成分結(jié)構(gòu)甚至是同分異構(gòu)體。但有了三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜提供的離子對信息，可以跟準(zhǔn)確的對被分析組份進(jìn)行定性，避免了假陽性的產(chǎn)生。檢索近10年來運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對中藥體內(nèi)過程進(jìn)行研究的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)研究的中藥涵蓋了植物源中藥、動物源中藥、中藥注射液、中成藥膠囊和傳統(tǒng)中藥湯劑等。所進(jìn)行的體內(nèi)過程研究的生物載體，主要為人類志愿者、比格犬、大鼠和羊，被測組分所在的生物介質(zhì)多數(shù)為血漿、尿液和器官組織。

Qian等[6]用LC-QQQ-MS對《傷寒論》中的傳統(tǒng)方劑“四逆湯”進(jìn)行了主要成分的定性分析并且對其在SD大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，鑒定出了“四逆湯”的83中化學(xué)組分，涵蓋了生物堿、黃酮、皂苷、膽酸、三萜類化合物，研究顯示這些化合物在大鼠體內(nèi)共有39種代謝途徑，有多達(dá)50種代謝產(chǎn)物。Zhao等[7]給大鼠灌胃清肝散結(jié)湯后，利用LC-QQQ-MS建立測定大鼠血漿中齊墩果酸熊果酸的含量，并且進(jìn)行藥代動力學(xué)研究。唐悅年等[8]研究灌胃射干合劑后大鼠體內(nèi)的鹽酸麻黃堿藥動學(xué)，發(fā)現(xiàn)鹽酸麻黃堿在吸收后24 h內(nèi)基本從尿液里回收，而在糞便中不能測得，說明鹽酸偽麻黃堿在大鼠體內(nèi)不經(jīng)過肝膽循環(huán)。楊榮等[9]運(yùn)用LC-QQQ-MS對中藥名方活血化瘀方中的丹參素在大鼠體內(nèi)組織分布進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：除了主要排泄器官腎臟以外，丹參素含量最高的器官組織為腎臟，其次為腦和肝臟，說明丹參素能較好通過血腦屏障，肝臟濃度較高也證實(shí)丹參歸心、肝經(jīng)的中醫(yī)理論。Jin等[10]運(yùn)用LC-QQQ-MS對中藥經(jīng)典方劑大黃硝石湯種的13種活性成分進(jìn)行定性分析，闡述大黃硝石湯中的活性成分與其治療黃疸的藥效關(guān)系。Ma等[11]運(yùn)用LC-QQQ-MS對“海藻玉壺湯”和海藻甘草合劑中的甘草黃苷、柚皮苷、橙皮素、甘草素、甘草酸、佛手柑內(nèi)酯、蜜桔黃素、蛇床子素及甘草次酸在甲狀腺減退小鼠模型的藥代動力學(xué)研究，顯示海藻玉壺湯和甘草合劑中的主要成分如蜜桔黃素和蛇床子素的藥代動力學(xué)參數(shù)要優(yōu)于甘草或者海藻單獨(dú)組分使用的藥代動力學(xué)參數(shù)，提示海藻玉壺湯和甘草合劑的配方組成具有很好的相容性。姜麗等[12]對《傷寒論》中的經(jīng)典藥方大承氣湯中的3類共10種有效成分進(jìn)行研究，建立應(yīng)用LC-QQQ-MS對該10種成分進(jìn)行快速準(zhǔn)確分析的方法并成功應(yīng)用于藥代動力學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)其中的橙皮苷，新橙皮苷和柚皮苷藥時曲線呈雙峰，提示該三種物質(zhì)在大鼠體內(nèi)存在肝腸循環(huán)的可能。

Wu等[13]應(yīng)用正負(fù)離子同時檢測的方法對比格犬口服血塞通軟膠囊后，血漿中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和原人參三醇進(jìn)行測定。Li等[14]在對黃芩素咀嚼片的一期臨床試驗(yàn)研究中，也運(yùn)用LC-QQQ-MS對黃芩素在志愿者體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行分析。潘艷娜等[15]首次利用LC-QQQ-MS建立對大鼠血漿中阿魏酸的濃度的測定方法，并且應(yīng)用于研究谷維素與黃連素及其配伍在大鼠中藥動學(xué)的比較分析，試驗(yàn)結(jié)果表明谷維素與黃連素合用后，谷維素有效代謝產(chǎn)物阿魏酸的達(dá)峰時間明顯延長且AUC0-∞變大，同時黃連素的消除半衰期變短但是AUC0-∞變大，說明谷維素對黃連素的吸收有促進(jìn)作用。李武超等[16]運(yùn)用LC-QQQ-MS，對大鼠靜脈注射斑蝥素后，測定斑蝥素在大鼠體內(nèi)各器官的分布，顯示斑蝥素在肝腎組織中濃度較其他器官組織高，并且呈計(jì)量依賴性，提示斑蝥素的腎毒性可能與其在腎臟分布較高有關(guān)，為臨床安全用藥提供參考依據(jù)。

Li等[17]利用LC-QQQ-MS測定中藥獨(dú)活中的沒藥當(dāng)歸烯酮在大鼠體內(nèi)的生物利用度及組織器官分布，并發(fā)現(xiàn)沒藥當(dāng)歸烯酮可以通過血腦屏障，佐證獨(dú)活具有抗阿爾茨海默病的功效。Zhang等[18]應(yīng)用LC-QQQ-MS建立測定傳統(tǒng)中藥野馬追中的野馬追內(nèi)酯A、野馬追內(nèi)酯B和金絲桃苷在大鼠血漿中的濃度測定方法，并且對大鼠灌胃野馬追提取物后的藥代動力學(xué)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)三種成分在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)呈劑量相關(guān)性，并且提示三種成分在大鼠體內(nèi)存在被動擴(kuò)散吸收的可能。Liu等[19]建立應(yīng)用LC-QQQ-MS對傳統(tǒng)中藥兩指劍中的兩個有效成分野漆樹苷和女貞苷進(jìn)行測定的方法、并首次對其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行測定。Yang等[20]利用LC-QQQ-MS對傳統(tǒng)中藥苦參中的兩個有效成分槐黃烷酮G和苦參酮在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行測定，計(jì)算得出給大鼠灌胃一定劑量的苦參提取物后，黃烷酮G的絕對生物利用度為36%，苦參酮的絕對生物利用度為17%，并且槐黃烷酮G的藥-時曲線呈雙峰狀，提示槐黃烷酮G在大鼠體內(nèi)可能存在胃腸循環(huán)。黃勇等[21]利用LC-QQQ-MS研究葒草提取物中4個黃酮類成分的大鼠組織分布，結(jié)果顯示：大鼠靜脈注射葒草提取物后葒草素、牡荊素、木犀草苷和槲皮苷這4個成分在腦中含量最低，說明其較難通過血腦屏障。葒草素、牡荊素和槲皮苷主要分布在腎臟，肺和肝臟也有較高的分布; 而木犀草苷對肺和肝表現(xiàn)出較強(qiáng)的親和力，在腎臟中分布很低。Cheng等[22]建立利用LC-QQQ-MS快速測定大鼠體內(nèi)淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的含量的方法，并發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在不同的給藥途徑下，具體截然不同的藥代動力學(xué)特性，灌胃給藥后約91.2%淫羊藿苷轉(zhuǎn)化為淫羊藿次苷Ⅱ而筋脈注射后僅有0.4%淫羊藿苷轉(zhuǎn)化為淫羊藿次苷Ⅱ。Luo等[23]首次建立利用LC-QQQ-MS快速測定六角英中的爵床脂素和6-羥基爵床脂素的方法并應(yīng)用于大鼠灌胃六角英提取物后的藥代動力學(xué)研究。

3.2 液相色譜-四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（LC-Q-TOF-MS） 飛行時間分析器（TOF）：具有相同動能， 不同質(zhì)量的離子， 因其飛行速度不同而分離。如果固定離子飛行距離， 則不同質(zhì)量離子的飛行時間不同， 質(zhì)量小的離子飛行時間短而首先到達(dá)檢測器。各種離子的飛行時間與質(zhì)荷比的平方根成正比。離子以離散包的形式引入質(zhì)譜儀， 這樣可以統(tǒng)一飛行的起點(diǎn)， 依次測量飛行時間。TOF具有較大的質(zhì)量分析范圍和較高的質(zhì)量分辨率， 尤其適合蛋白等生物大分子分析， 常用MALDI為離子源，其分辨率隨著質(zhì)荷比的增大而降低。

將四級桿和飛行時間分析器結(jié)合后（LC-Q-TOF-MS），會極高的提高準(zhǔn)確率和分辨率，具有很高的靈敏度，在樣品組份結(jié)構(gòu)分析，代謝組學(xué)研究上具有較高的優(yōu)勢。董世奇等[24]運(yùn)用LC-Q-TOF-MS對甘草苷在大鼠體內(nèi)的代謝途徑進(jìn)行研究，對大鼠血漿、尿液、糞便和膽汁中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)鑒定與確證，研究表明甘草苷口服后在 血漿中的主要存在形式為甘草素的硫酸結(jié)合物;糞便中的主要代謝產(chǎn)物為甘草素和甘草素的硫酸結(jié)合物;尿中的主要代謝產(chǎn)物包括甘草素和甘草素的葡萄糖醛酸結(jié)合物;膽汁中的主要代謝產(chǎn)物包括甘草素的葡萄糖醛酸和硫酸結(jié)合物。單進(jìn)軍等[25]運(yùn)用LC-Q-TOF-MS研究瑞香素在大鼠腸壁產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，采用大鼠在體腸道灌流模型， 分別收集瑞香素0～2h內(nèi)的十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸灌流液，分析腸道灌流液中瑞香素的代謝產(chǎn)物。在大鼠十二指腸、空腸、回腸灌流液中共發(fā)現(xiàn)瑞香素原形藥物和4個代謝產(chǎn)物， 而在結(jié)腸灌流液中未發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物。并且首次發(fā)現(xiàn)了瑞香素-7-硫酸酯和瑞香素-8-硫酸酯為瑞香素在大鼠體內(nèi)的Ⅱ相代謝產(chǎn)物， 揭示其在大鼠體內(nèi)代謝的新途徑。Sun等[26]給大鼠灌胃百部根混懸液后，運(yùn)用LC-Q-TOF-MS建立測定大鼠血漿中的活性產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物，共28個成分。該方法不僅可以用于快速鑒定百部根中的藥用成分，也為傳統(tǒng)中藥的體內(nèi)過程研究提供了新的思路。Wu等[27]運(yùn)用LC-Q-TOF-MS及LC-MS/MS，對中藥傳統(tǒng)方劑梔子大黃湯在灌胃大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，測定61種異生物質(zhì)和代謝產(chǎn)物。Wang等[28]利用LC-Q-TOF-MS對烏頭的毒性成分在體內(nèi)的方式進(jìn)行定性分析。Fang等[29]首先應(yīng)用LC-Q-TOF-MS對藿蘇養(yǎng)胃口服液中的主要成分做出分析，并且應(yīng)用LC-MS/MS對火樹養(yǎng)胃口服液與抗癌藥阿帕替尼的體內(nèi)藥動學(xué)相互作用做出研究，結(jié)果顯示火樹養(yǎng)胃口服液對人體肝組織液內(nèi)所有的CYPs都起到抑制作用，并能將阿帕替尼在大鼠血漿中半衰期延長7.5倍，AUC0–∞增加了43%。

3.3 液相色譜-四級桿串聯(lián)離子阱質(zhì)譜（LC-Q-IT-MS） 離子阱質(zhì)譜可以通過調(diào)整環(huán)狀電級產(chǎn)生的不同范圍的射頻電壓來捕獲不同質(zhì)量的離子。離子阱質(zhì)譜具有很高的靈敏度，可以實(shí)現(xiàn)多級質(zhì)譜的功能。離子阱質(zhì)譜可以實(shí)現(xiàn)在不同時間序列下的多級掃描，可以提供待測組份的離子碎片信息，能夠提供鑒定未知成分所需的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息，因此擅長于定性檢測。將四級桿分析器與離子阱串聯(lián)后，定性和定量檢測都能夠整合進(jìn)行。Cao G等[30]運(yùn)用離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法對山茱萸在小鼠微透析液中的代謝物進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)7種新的母體化合及三個全新的代謝產(chǎn)物。

3.4 液相色譜-離子阱串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜（LC-IT-TOF-MS） 離子阱飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜由于具備多級質(zhì)譜功能、高分辨率和高質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度， 因此特別適合同時對多種成分進(jìn)行整合的分析，對多重裂解的代謝反應(yīng)有較強(qiáng)的定性功能。Liang等[31]應(yīng)用LC-IT-TOF-MS對赤芍藥在大鼠體內(nèi)的吸收成分和代謝成分進(jìn)行定性研究，共測定出13種新的吸收成分和90種新的代謝成分。Yang等[32]應(yīng)用LC-IT-TOF-MS對紫杉醇在小鼠體內(nèi)的代謝物進(jìn)行測定，191種代謝產(chǎn)物（包括153個黃酮類化合物和38個酚類化合物）被定性檢出，其中154種為新檢測到的紫杉醇代謝產(chǎn)物。Xu等[33]應(yīng)用LC-IT-TOF-MS測定羅漢果苷Ⅴ在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，已及這些代謝產(chǎn)物在各個組織的分布情況。Wang等[34]應(yīng)用LC-IT-TOF-MS對冬蟲夏草中的抗凝血活性成分進(jìn)行定性，并且對這些抗凝血成分在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究。

4 前景與展望

由于LC-MS/MS具有較高準(zhǔn)確度和靈敏度，分析過程中選擇性強(qiáng)、分離能力好，不僅能對化合物準(zhǔn)確定量，還能提供化合物的結(jié)構(gòu)信息，可用于對未知化合物的定性和定量，適合于復(fù)雜體系的成分分析，由于中藥成分復(fù)雜，體內(nèi)過程所以更多能查詢到的是運(yùn)用LC-MS/MS對中藥體內(nèi)過程研究的文章。在運(yùn)用LC-MS/MS進(jìn)行中藥體內(nèi)研究的文獻(xiàn)中，又以LC-QQQ-MS占最多數(shù)，因?yàn)槠涠抗δ芨茫m然其也有定性功能，但是在定性研究方面，LC-Q-TOF-MS和LC-IT-TOF-MS更為突出。LC-Q-TOF-MS更多地被運(yùn)用于未知中藥成分的結(jié)構(gòu)鑒定，其靈敏度、質(zhì)量分析準(zhǔn)確度和分辨率都要高于LC-QQQ-MS，而LC-IT-TOF-MS更擅長于測定多組分代謝產(chǎn)物，目前將LC-Q-TOF-MS和LC-IT-TOF-MS運(yùn)用于中藥成分體內(nèi)過程研究的文獻(xiàn)還較少。值得一提的是，LC-MS/MS法運(yùn)用于中藥體內(nèi)成分的研究，儀器測量只是最終的定性和定量過程，由于生物樣品基質(zhì)成分復(fù)雜，會對儀器分析帶來較大干擾，所以樣品的前處理也尤為重要，目前主要的樣品前處理主要有三類，分別是液液萃取法，固相萃取法和蛋白沉淀法。液液萃取法是利用待測組份在不同溶劑中的溶解性不同，從而將待測組分從生物基質(zhì)中提純到化學(xué)溶劑中，從而減少生物基質(zhì)對測定帶來的干擾。固相萃取法是液相色譜的一個分支，原理也是利用待測組份和生物基質(zhì)在流動相和固定相中分配系數(shù)的不同從而將生物基質(zhì)和待測組分分離的方法，液液萃取法的回收率較好，但往往需要較多步驟，耗時較長且引入的誤差也較多。固相萃取法有一定的自動化程度和批量處理能力，優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度高、靈敏度好，缺點(diǎn)是成本較高。蛋白沉淀法是用有機(jī)溶劑將生物基質(zhì)變性沉淀，從而得到上層含有待測組份的較為干凈有機(jī)溶劑，蛋白沉淀法使用成本較低，步驟較為簡便，是目前運(yùn)用較為廣泛的前處理方法，缺點(diǎn)是蛋白沉淀法無法完全排除內(nèi)源性雜質(zhì)對測量的影響。

隨著LC-MS/MS技術(shù)的發(fā)展，未來的也許會出現(xiàn)更多元、更多級的串聯(lián)質(zhì)譜法，LC-MS/MS技術(shù)也會朝著更快、更靈敏、更準(zhǔn)確的方向發(fā)展， 在中藥體內(nèi)過程分析研究中的運(yùn)用也會越來越廣。

參考文獻(xiàn)

[1]WU H， GUO J， CHEN S， et al. Recent developments in qualitative and quantitative analysis of phytochemical constituents and their metabolites using liquid chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2013（72）：267-291.

[2]STEINMANN D， GANZERA M. Recent advances on HPLC-MS in medicinal plant analysis[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2011，55 （4）：744-757.

[3]崔翰明，張春光，林海，等. HPLC法測定三七不同藥用部位中有效成分含量[J]. 中藥材，2009（12）：1810-1813.

[4]王黎明，梁建寧，黃曉燕，等. 燈盞花素分散片及燈盞花素原料的HPLC指紋圖譜研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012（10）：77-80.

[5]江冬英， 胡巧云. 不同產(chǎn)地?zé)舯K花成分指紋圖譜研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013（8）：54-56.

[6]CHEN Q， XIAO S， LI Z， et al. Chemical and Metabolic Profiling of Si-Ni Decoction Analogous Formulae by High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry[J]. Sci Rep，2015（5）：11638

[7]ZHAO LI， LI W， LI Y， et al . Simultaneous Determination of Oleanolic and Ursolic Acids in Rat Plasma by HPLC-MS： Application to a Pharmacokinetic Study After Oral Administration of Different Combinations of QingGanSanJie Decoction Extracts[J]. Journal of Chromatographic Science，2015：1-8.

[8]唐躍年，陳霽暉，林志燕，等. 灌胃射干合劑后大鼠體內(nèi)鹽酸麻黃堿藥動學(xué)研究[J]. 中國藥師，2014（4）：553-555.

[9]楊榮，衛(wèi)引茂，李霞，等. LC-MS/MS法研究活血化瘀方中丹參素在兔體內(nèi)的組織分布[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報，2008，39（2）：155-158.

[10]JIN J， XUE H， SUN X， et al. Simultaneous determination of multiple compounds of Da-Huang-Xiao-Shi decoction in rat plasma by LC-MS/MS and its application in a pharmacokinetic study[J]. J Pharm Biomed Anal，2019，10（174）：8-18.

[11]MA Y， ZHANG Y， ZHAI Y， et al. Development of a UPLC-TQ/MS Approach for the Determination of Eleven Bioactive Components in Haizao Yuhu Decoction Plus-Minus Haizao and Gancao Drug Combination after Oral Administration in a Rat Model of Hypothyroidism[J]. Molecules， 2017，22（1）：7.

[12]姜麗，余蘭彬，張啟云，等. 基于UPLC-MS/MS大承氣湯多種活性成分大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究[J]. 中草藥，2015（19）：2908-2915.

[13]WU H， LIU H， BAI J， et al. Simultaneous determination of notoginsenoside R1， ginsenoside Rg1， ginsenoside Re and 20（S） protopanaxatriol in beagle dog plasma by ultra-high performance liquid mass spectrometry after oral administration of a Panax notoginseng saponin preparation[J]. Journal of Chromatography B，2015（974）：42-47.

[14]LI M， SHI A， PANG H， et al. Safety， tolerability， and pharmacokinetics of a single ascending dose of baicalein chewable tablets in healthy subjects[J]. Journal of Ethnopharmacology，2014 （156）：210–215.

[15]潘艷娜，賀帥，張忠義. 谷維素與黃連素及其配伍在大鼠中藥動學(xué)的比較分析[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2013（10）：793-796.

[16]李武超，劉敏臣，馬小瓊，等. LC-MS/MS法測定去甲斑蝥素在大鼠體內(nèi)的組織分布[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014（4）：263-268.

[17]GE Y， LI Z， ZHANG L， et al. Pharmacokinetics and tissue distribution study of bisabolangelone from Angelicae? Pubescentis? Radix in rat using LC-MS/MS[J]. Biomed Chromatogr， 2019，33（3）：e4433.

[18]ZHANG J， ZHAO F， YU X， et al. Pharmacokinetics of eupalinolide A， eupalinolide B and hyperoside from Eupatorium lindleyanum in rats by LC/MS/MS[J]. Journal of Chromatography B， 2015 （995-996）：1-7.

[19]LIU H， XU C， WANG W， et al. Development and Validation of an LC-ESI-MS/MS Method for Simultaneous Determination of Ligustroflavone and Rhoifolin in Rat Plasma and Its Application to a Pharmacokinetic Study[J]. J Chromatogr Sci， 2016：1-8.

[20]YANG Z， ZHANG W， LI X， et al.Determination of sophoraflavanone G and kurarinone in rat plasma by UHPLC–MS/MS and its application to a pharmacokinetic study[J]. J. Sep. Sci， 2016，39（2）：4344-4353.

[21]黃勇，張治蓉，鄭林，等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究葒草提取物中4個黃酮類成分的大鼠組織分布[J]. 藥物分析雜志，2012（12）：2126-2131.

[22]CHENG T， ZHANG Y， ZHANG T， et al. Comparative Pharmacokinetics Study of Icariin and Icariside II in Rats[J]. Molecules，2015（20）：21274–21286.

[23]LUO J， HU Y， QIN J， et al. UHPLC–ESI-MS/MS and pharmacokinetic analysis of justicidin B and 6-hydroxy justicidin C in rats[J]. Journal of Separation Science，2017，40（3）：604-611.

[24]董世奇，樊慧蓉，李全勝，等. 甘草苷在大鼠體內(nèi)的代謝途徑研究[J]. 中草藥，2014（17）：2499-2505.

[25]單進(jìn)軍， 鄧海山，文紅梅， 等. 高效液相色譜-四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜法分析瑞香素在大鼠腸壁的代謝產(chǎn)物[J]. 藥學(xué)學(xué)報，2011（11）：1366-1369.

[26]SUN H， DONG W， ZHANG A， et al. Pharmacokinetics study of multiple components absorbed in rat plasma after oral administration of Stemonae radix using ultra-performance liquid-chromatography/mass spectrometry with automated MetaboLynx software analysis[J]. J. Sep. Sci， 2012（35）：3477-3485.

[27]WU H， LI X， YAN X， et al. An untargeted metabolomics-driven approach based on LC–TOF/MS and LC–MS/MS for the screening of xenobiotics and metabolites of Zhi-Zi-Da-Huang decoction in rat plasma[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2015 （115） ：315-322.

[28]WU H， LI X， YAN X， et al.? Metabolomics Study on the Toxicity of Aconite Root and Its Processed Products Using Ultra performance Liquid-Chromatography/Electro spray-Ionization Synapt High-Definition Mass Spectrometry Coupled with Pattern Recognition Approach and Ingenuity Pathways Analysis[J]. J. Proteome Res，2012（11）：1284–1301.

[29]FANG S Q， HUANG J， ZHANG F， et al. Pharmacokinetic interaction between a Chinese herbal formula Huosu Yangwei oral liquid and apatinib in vitro and in vivo[J]. J Pharm Pharmacol， 2020，72 （7） ： 979-989.

[30]CAO G， CAI H， ZHANG Y， et al. Identification of metabolites of crude and processed Fructus Corni in rats by microdialysis sampling coupled with electrospray ionization linear quadrupole ion trap mass spectrometry[J]. Pharm Biomed Anal，2011，56（1）：118-125.

[31]LIANG J， XU F， ZHANG Y Z， et al. The profiling and identification of the absorbed constituents and metabolites of Paeoniae Radix Rubra decoction in rat plasma and urine by the HPLC–DAD–ESI-IT-TOF-MSn technique： A novel strategy for the systematic screening and identification of absorbed constituents and metabolites from traditional Chinese medicines Jing[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2013 （83）： 108-121.

[32]YANG P， XU F， LI H F， et al. Detection of 191 Taxifolin Metabolites and Their Distribution in Rats Using HPLC-ESI-IT-TOF-MSn[J].Molecules，2016（21）：1209.

[33]XU F， LI D P， HUANG Z C， et al. Exploring in vitro， in vivo metabolism of mogroside V and distribution of its metabolites in rats by HPLC-ESI-IT-TOF-MSn[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2015 （115）： 418–430.

[34]WANG L， HUANG S， CHEN B， et al. Characterization of the Anticoagulative Constituents of? Angelicae Sinensis Radix and Their Metabolites in Rats by HPLC-DAD-ESI-IT-TOF-MSn[J].Planta Med，2016，82（4）：362-370.

（收稿日期：2020-09-10 編輯：劉斌）

基金項(xiàng)目：

作者簡介：楊崇儀（1986-），男，白族，碩士，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锇踩栽u價及藥物體內(nèi)動力學(xué)研究。E-mail：chongyi2002@sina.com