◎ 招原春，曾莉雅

（1.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511442）

測(cè)量不確定度是根據(jù)所用到的信息，表征賦予被測(cè)量值分散性的非負(fù)參數(shù)，是與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[1]。簡(jiǎn)單而言，不確定度是指由于測(cè)量過(guò)程中誤差的存在，對(duì)被測(cè)量值不能肯定的程度，代表測(cè)定值的可信區(qū)間，是衡量實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的重要指標(biāo)。通過(guò)對(duì)檢測(cè)不確定度的主要影響因素進(jìn)行評(píng)價(jià)，為測(cè)量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性提供科學(xué)依據(jù)，確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性[2-4]。根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF 1059.1—2012）和《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008）[5]，對(duì)氣相色譜法測(cè)定蔬菜上海青中毒死蜱含量的不確定度進(jìn)行分析和評(píng)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B氣相色譜儀（檢測(cè)器：FPD磷濾光片，安捷倫科技公司）、電子天平（梅特勒-托利多公司）、氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）及勻漿機(jī)（IKA公司）。

BePure毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品（純度：1 000.1 μg·mL-1，北京曼哈格生物科技有限公司）。乙腈和丙酮（色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份公司）、氯化鈉（分析純，廣州微譜化工分析技術(shù)有限公司）、0.4 μm濾膜 （上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品提取與凈化

依據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008） 采用Agilent 7980B氣相色譜儀測(cè)定上海青中毒死蜱的殘留量。稱取25.0 g樣品，加入50.0 mL乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min后，過(guò)濾到裝有7 g氯化鈉的比色管中，劇烈振蕩1 min，室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。從比色管中吸取10.00 mL，80 ℃水浴氮吹至近干，定容5.0 mL，過(guò)0.45μm濾膜，再分取出樣液1.000 mL，用丙酮稀釋定容至2 mL容量瓶，供氣相色譜儀測(cè)定。

1.2.2 氣相色譜儀條件

色譜柱：DB-1701P（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣量：1.0 μL；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；色譜柱流量：1.5 mL·min-1；載氣：氮?dú)猓贿M(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

升溫程序：80 ℃保持1 min，20 ℃·min-1升至 130 ℃，再5 ℃·min-1升至200 ℃，再10 ℃·min-1升至250 ℃保持10 min。

2 數(shù)學(xué)模型

樣品中毒死蜱含量按式（1）計(jì)算。

式（1）中，X-樣品中毒死蜱含量，單位為mg·kg-1；C-樣品中毒死蜱的濃度，單位為μg·mL-1；V1-試樣提取溶劑體積，單位為mL；V2-分取的提取液體積，單位為mL；V3-試樣定容體積，單位為mL；V4-樣液再稀釋所取樣液的體積，單位為mL；V5-最終稀釋樣液定容的總體積，單位為mL；m樣-待測(cè)樣品的取樣量，單位為g。

3 不確定度來(lái)源分析

根據(jù)測(cè)定方法的主要步驟，蔬菜上海青中毒死蜱含量分析的不確定度主要來(lái)源于：①標(biāo)準(zhǔn)品溶液。②樣品的稱樣量。③實(shí)驗(yàn)前處理等過(guò)程。④標(biāo)準(zhǔn)品曲線求樣品濃度過(guò)程。⑤在實(shí)驗(yàn)重復(fù)條件下，重復(fù)測(cè)量過(guò)程（儀器、人員等因素）。具體相關(guān)不確定度主要來(lái)源詳情見(jiàn)圖1。

圖1 不確定度主要來(lái)源分析圖

4 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度

4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

標(biāo)準(zhǔn)品毒死蜱純度=1 000.1μg·mL-1，其擴(kuò)展不確定度u=30.0 μg·mL-1，屬正態(tài)分布，包含因子k=2，則不確定度計(jì)算為：

4.1.2 配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

用移液槍移取1 000.1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100 μL， 丙酮定容至10.00 mL，濃度為10.0 μg·mL-1。根據(jù) 《移液器檢定規(guī)程》（JJG 646—2006）標(biāo)準(zhǔn)，100 μL移液槍的100 μL檢定點(diǎn)的容量允許誤差為±2.0%，均勻分布時(shí)，則引入相對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

根據(jù)《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006） 標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)使用到的A級(jí)單標(biāo)線容量瓶容量允許差為（10±0.020）mL，按照均勻分布，則不確定度計(jì)算為：

玻璃儀器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。由于液體體積膨脹明顯大于玻璃儀器體積膨脹，故溫度的變化引入不確定度只考慮液體體積膨脹。丙酮的體積膨脹系數(shù)為1.49×10-3/℃，由溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.49×10-3/℃，按照均勻分布，由溫度變化引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制過(guò)程中引入合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.1.3 合成標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

標(biāo)準(zhǔn)品的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度由標(biāo)準(zhǔn)品純度和標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制引入，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成為

4.2 樣品稱樣量引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

依據(jù)檢測(cè)方法要求，使用千分之一的電子天平，稱取均勻上海青樣品25.0 g，該天平由檢定證書(shū)給出的0～320 g稱量范圍的允許誤差MPE=±5 mg，用20 g砝碼校正天平，該砝碼由檢定證書(shū)給出的擴(kuò)展不確度為us=0.024 mg（k2=2），用該天平稱量一份樣品6次，得到25.029 g、25.029 g、25.027 g、25.029 g、 25.028 g和25.028 g，算得均值為25.028 g，方差S2=0.000 000 667。則不確定度計(jì)算為：

4.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中提取、提取液稀釋、定容和樣液稀釋的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

4.3.1 樣品提取溶液體積引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

實(shí)驗(yàn)中加入提取溶液乙腈，總體積V1為50.00 mL，使用2.5～25 mL規(guī)格的瓶口分液器，量程為25.00 mL，加2次，該瓶口分液器由校準(zhǔn)證書(shū)給出的擴(kuò)展不確定度為±0.029 mL，為正態(tài)分布，包含因子k=2，則不確定度計(jì)算為：

瓶口分液器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。乙腈的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3/℃，由于溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.37×10-3/℃， 按照均勻分布，則溫度變化而引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

故合成加入提取溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.3.2 分取的提取液體積引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

經(jīng)過(guò)提取后，分取的提取溶液為10.00 mL，使用10 mL的分度吸量管移液，根據(jù)《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）標(biāo)準(zhǔn)，A級(jí)10 mL的分度吸量管容量允差為±0.05 mL，按照均勻分布，則不確定度計(jì)算為：

玻璃儀器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。由于液體體積膨脹明顯大于玻璃儀器體積膨脹，因此溫度的變化引入不確定度只考慮液體體積膨脹。乙腈的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3/℃，由于溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.37×10-3/℃，，按照均勻分布，則溫度變化而引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

故合成分取的提取溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.3.3 樣品定容體積引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

實(shí)驗(yàn)中使用5 mL的分度吸量管移取5.00 mL丙酮進(jìn)行定容，根據(jù)《常用玻璃量器檢定規(guī)程》 （JJG 196—2006）標(biāo)準(zhǔn)，A級(jí)5 mL分度吸量管容量允差為±0.025 mL，按照均勻分布，則不確定度計(jì)算為：

玻璃儀器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。由于液體體積膨脹明顯大于玻璃儀器體積膨脹，因此溫度的變化引入不確定度只考慮液體體積膨脹。丙酮的體積膨脹系數(shù)為1.49×10-3/℃，由溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.49×10-3/℃，按照均勻分布由溫度變化引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

合成定容體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.3.4 樣液再稀釋所取樣液體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

樣品定容后，由于樣液濃度過(guò)高，需要移取1.000 mL 稀釋再進(jìn)樣。移取1.000 mL時(shí)使用1 mL移液槍，根據(jù)《移液器檢定規(guī)程》（JJG 646—2006）標(biāo)準(zhǔn)， 1 000 μL移液槍的1 000 μL檢定點(diǎn)的容量允許誤差為±1.0%，按照均勻分布，則引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

移液器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。丙酮的體積膨脹系數(shù)為1.49×10-3/℃，由溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.49×10-3/℃，按照均勻分布，由溫度變化引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制過(guò)程中引入的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.3.5 最后稀釋樣液定容體積引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

樣液再稀釋用2 mL容量瓶用丙酮定容。根據(jù)《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）標(biāo)準(zhǔn)，使用到的容量瓶為A級(jí)單標(biāo)線容量瓶，容量允許差為2±0.015 mL，按照均勻分布，則不確定度計(jì)算為：

玻璃儀器在（20±5）℃校準(zhǔn)，可通過(guò)計(jì)算實(shí)驗(yàn)室溫度范圍和體積膨脹系數(shù)來(lái)評(píng)定引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。丙酮的體積膨脹系數(shù)為1.49×10-3/℃，由溫度變化引起的體積偏差為V×10 ℃×1.49×10-3/℃，按照均勻分布，由溫度變化引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

最后稀釋樣液定容體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.3.6 合成實(shí)驗(yàn)過(guò)程中提取、稀釋及定容體積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中提取溶液體積、稀釋過(guò)程及定容體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成為：

4.4 最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)品溶液曲線求樣品濃度時(shí)產(chǎn)生的不確定度

使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算毒死蜱的濃度。配制6個(gè)不同濃度的校準(zhǔn)溶液點(diǎn)，每個(gè)校準(zhǔn)溶液點(diǎn)分別進(jìn)樣測(cè)定3次，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)系列溶液3次測(cè)定的結(jié)果表

以含量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)方程得：y=bx+a=8 128.554 82x+28.534 99，線性最小二乘法擬合曲線的相關(guān)系數(shù)r為0.999 94，殘留標(biāo)準(zhǔn)偏差S計(jì)算為：

測(cè)量提取溶液兩次得濃度為0.2123 μg·mL-1、 0.2177 μg·mL-1，即平均值c=0.215 μg·mL-1，最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品濃度時(shí)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品濃度時(shí)產(chǎn)生的相對(duì)不確定度計(jì)算為：

4.5 測(cè)量重復(fù)性引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

4.5.1 儀器重復(fù)性分析引入的不確定度

同一瓶的樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得毒死蜱含量分別為0.442 mg·kg-1、0.443 mg·kg-1、0.442 mg·kg-1、 0.443 mg·kg-1、0.441 mg·kg-1和0.444 mg·kg-1，平均濃度為0.442mg·kg-1，儀器測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

4.5.2 其他因素重復(fù)性分析引入的不確定度

除了儀器因素，還有人員操作和讀數(shù)差異及樣品不均勻等因素影響檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性。統(tǒng)計(jì)分析中，在同一測(cè)量條件下，重復(fù)測(cè)量一系列結(jié)果，即可得人員操作和讀數(shù)差異及樣品不均勻等因素合并引起的重復(fù)性不確定度。

在實(shí)驗(yàn)同一條件下，同一人員使用同一臺(tái)檢測(cè)儀器，對(duì)同一批次的上海青樣品進(jìn)行10次重復(fù)試驗(yàn)，每次樣品，測(cè)得毒死蜱含量分別為0.45 mg·kg-1、 0.47 mg·kg-1、0.42 mg·kg-1、0.46 mg·kg-1、0.43 mg·kg-1、 0.43 mg·kg-1、0.44 mg·kg-1、0.42 mg·kg-1、0.45 mg·kg-1和0.45 mg·kg-1。

測(cè)量的重復(fù)性以標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，按貝塞爾公式計(jì)算為：

本次測(cè)量2個(gè)樣品，平均值為0.43 mg·kg-1，當(dāng)報(bào)告平均值時(shí)，應(yīng)用早先預(yù)評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)偏差，則本次測(cè)量平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算為：

本次測(cè)量的平均值的相對(duì)不確定度計(jì)算為：

最后測(cè)量重復(fù)性引入合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì) 算為：

4.6 合成相對(duì)不確定度和相對(duì)擴(kuò)展不確定度

4.6.1 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

結(jié)合以上引入的不確定度，得到合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

4.6.2 相對(duì)擴(kuò)展不確定度和擴(kuò)展不確定度

當(dāng)置信區(qū)間為95%，包含因子k=2，相對(duì)擴(kuò)展不確定度為urel=k×ucrel(W)=2×0.043 6=8.7%，擴(kuò)展不確定度u=0.43 mg·kg-1×8.7%=0.037 mg·kg-1。

5 結(jié)論

毒死蜱是一種有機(jī)磷類殺蟲(chóng)劑，對(duì)咀嚼式和刺吸式口器害蟲(chóng)有很好的針對(duì)性防蟲(chóng)作用；而且可與多種殺蟲(chóng)劑混用以達(dá)到增效作用，同時(shí)相對(duì)而言毒性低。正是因?yàn)槠浔旧淼倪@種特性而被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，如水稻、蔬菜等農(nóng)作物。筆者在做日常果蔬的檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，毒死蜱易檢出，且易超出《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）[6]。 當(dāng)毒死蜱檢出值位于限量值附近時(shí)，如何對(duì)受檢樣品進(jìn)行準(zhǔn)確判定，便成了檢測(cè)人員面對(duì)的難題。本研究依據(jù)《蔬菜水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008）[5]， 結(jié)合實(shí)驗(yàn)室測(cè)定可得樣品中毒死蜱為0.43 mg·kg-1，其擴(kuò)展不確定度u=0.43 mg·kg-1×8.7%=0.037 mg·kg-1。

在本研究所有不確定度引入的分量中，測(cè)量重復(fù)性的不確定度分量最大，可見(jiàn)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制中，測(cè)量?jī)x器的變動(dòng)性、人員操作和讀數(shù)差異、樣品不均勻等因素應(yīng)充分重視，日常檢測(cè)中應(yīng)提高人員操作的熟練度，注意取樣樣品的均勻性，多次測(cè)量取平均值，適當(dāng)降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定度。