王 樂，楊宗斌，王 甜，郭?；?，王福生

（大理大學(xué)藥學(xué)院，云南大理 671000）

Secologanol是裂環(huán)烯醚萜苷類成分，最早于1989年由法國學(xué)者從龍膽科龍膽屬植物春龍膽（Gentiana verna）中發(fā)現(xiàn)〔1〕。在后續(xù)的研究中，有學(xué)者從龍膽科雙蝴蝶屬植物雙蝴蝶（Tripterospermum chinense）〔2〕和刺蓮花科巖蕁麻屬植物巖蕁麻（Euc?nidebartonioides）〔3〕中也分離得到該化合物，但含量極低。本課題組前期對(duì)龍膽屬植物微籽龍膽（Genti?ana delavayi）的研究中發(fā)現(xiàn)Secologanol為量豐化合物，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)它能顯著抑制人APP∕PS1 CHO細(xì)胞產(chǎn)生Aβ40寡聚體，具有潛在的研究開發(fā)價(jià)值〔4〕。由于環(huán)烯醚萜苷類成分的極性大，脂溶性和穩(wěn)定性較差，而糖基修飾能提高糖苷類成分的化學(xué)穩(wěn)定性〔5〕，加之，本課題組發(fā)現(xiàn)，環(huán)烯醚萜苷糖基不同位置?；奶烊划a(chǎn)物具有不同的抗阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）活性〔6〕，為此，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)Secologanol進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成其相應(yīng)?；a(chǎn)物，以期增強(qiáng)其衍生物的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性及抗AD活性，為進(jìn)一步對(duì)它進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化打下基礎(chǔ)。

有學(xué)者對(duì)裂環(huán)馬錢子苷（secoxyloganin）進(jìn)行轉(zhuǎn)化過程中，曾得到Secologanol的糖基四乙?；a(chǎn)物2〔7〕，其方法是：先將裂環(huán)馬錢子苷進(jìn)行糖基乙?；?，再將7-位羧基還原得到化合物2，反應(yīng)中7-位羧基還原為伯醇羥基較難，需要用氯甲酸乙酯活化才能反應(yīng)。為此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)Secologanol的乙?；捅郊柞；a(chǎn)物的合成條件進(jìn)行了探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過控制反應(yīng)條件，可以快速、高效得到化合物2及4個(gè)新的Secologanol酰化產(chǎn)物1、3、4和5。其合成路線、反應(yīng)條件及結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 Secologanol?；a(chǎn)物的合成路線、反應(yīng)條件及其結(jié)構(gòu)

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑 儀器：磁力攪拌器（北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器股份公司）；AvanceⅢ-400型核磁共振波譜儀（德國布魯克公司）；循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

試劑：Secologanol由本課題組自己制備；吡啶、乙酸酐、碳酸氫鈉（NaHCO3）、苯甲酸、氯化亞砜（SOCl2）、二甲基甲酰胺（DMF）、四氫呋喃、三乙胺、乙酸乙酯、無水硫酸鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氘代氯仿（CDCl3）購自北京百靈威科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 化合物1和2的合成 稱取化合物Secologanol 500 mg（1.28 mmol），裝入25 mL圓底燒瓶中，加入4 mL吡啶充分溶解，再加入乙酸酐181μL（1.92 mmol），在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)約12 h。薄層色譜法（TLC）檢測，待反應(yīng)原料消失，發(fā)現(xiàn)有1個(gè)主要產(chǎn)物生成，加入飽和NaHCO3溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取5次，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚：乙酸乙酯=2：1）純化得到化合物2（白色固體610.5 mg）和化合物1（白色固體65 mg）。收率按以下公式計(jì)算：收率=實(shí)際產(chǎn)量∕理論產(chǎn)量×100%?；衔?和2的收率分別為8.5%和85.3%。

同上，稱取化合物Secologanol 50 mg（0.13 mmol），裝入10 mL圓底燒瓶中，加入1 mL吡啶充分溶解，再加入乙酸酐31μL（0.33 mmol）。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)約24 h。TLC檢測，反應(yīng)至僅有1個(gè)主要產(chǎn)物，經(jīng)處理及柱層析后得到化合物1（白色固體67.8 mg，收率90.6%）。

為了驗(yàn)證化合物2是否能完全轉(zhuǎn)化為化合物1，稱取化合物2 50 mg（0.09 mmol）置于10 mL圓底燒瓶中，加入1 mL吡啶充分溶解，再滴加乙酸酐22μL（0.23 mmol），在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)約24 h，TLC檢測，待原料消失，發(fā)現(xiàn)僅有1個(gè)主要產(chǎn)物。同上方法處理，經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚：乙酸乙酯=2：1）純化得到化合物1（白色固體45.2 mg，收率83.7%），證明化合物2也可以完全轉(zhuǎn)化為化合物1。

化合物1：白色固體；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.32（s，1H），5.57（dt，J=17.1，9.8 Hz，1H），5.31（d，J=1.4 Hz，1H），5.28~5.23（m，3H），5.18（dd，J=9.5，0.8 Hz，1H），5.09（td，J=9.7，0.9 Hz，1H），4.99（ddd，J=9.5，8.1，1.0 Hz，1H），4.85（d，J=8.1 Hz，1H），4.27（dd，J=12.4，4.5 Hz，1H），3.68（s，3H），3.28（dd，J=4.1，0.9 Hz，1H），2.70（dt，J=40.8，4.6 Hz，2H），2.08（s，3H），2.03（s，3H），2.00（s，3H），1.98（s，3H），1.90（s，3H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：171.56，171.06，170.63，169.79，169.41，167.33，151.03，133.04，120.81，111.30，96.43，96.10，72.50，72.56，70.87，68.47，62.61，62.02，51.00，73.00，43.26，27.86，27.64，21.37，21.18，21.01，20.63。

化合物2：白色固體；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.51（d，J=2.4 Hz，1H），5.42（dt，J=17.0，9.8 Hz，1H），5.28（t，J=2.2 Hz，2H），5.18（d，J=9.5 Hz，1H），5.04（t，J=9.7 Hz，1H），4.95（t，J=8.8 Hz，1H），4.87（d，J=8.1 Hz，1H），4.40（dt，J=11.2，3.3 Hz，1H），4.09（dd，J=12.5，2.1 Hz，1H），3.72（s，3H），2.64（ddd，J=9.7，5.7，1.7 Hz，1H），2.05（s，3H），1.98（s，3H），1.96（s，3H），1.92（s，3H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：170.20，170.16，170.01，169.80，166.23，150.03，132.04，120.01，110.30，96.33，95.80，72.30，72.16，70.67，67.47，63.61，63.12，50.00，53.00，42.06，27.56，27.24，21.27，21.11，20.61，20.53。1.2.2 化合物3、4和5的合成 苯甲酰氯的制備〔8〕：稱取苯甲酸500 mg（4.10 mmol）裝入25 mL圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下滴加1滴干燥的DMF作為催化劑，隨后在冰浴條件下緩慢地滴加SOCl2893μL（12.29 mmol），使其充分混溶。升至室溫后反應(yīng)1.5 h，再加熱至80℃回流反應(yīng)4 h。反應(yīng)完成后，減壓除去過量的SOCl2，得黃色油狀物（558 mg，收率97.3%）。

化合物3、4和5的合成：稱取Secologanol 100 mg（0.26 mmol）裝入10 mL圓底燒瓶中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，用2 mL四氫呋喃溶解，然后滴加三乙胺358μL（2.60 mmol），在冰浴條件下緩慢滴加苯甲酰氯36 mg（0.26 mmol），室溫反應(yīng)約6 h后原料消失，TLC檢測發(fā)現(xiàn)主要產(chǎn)物為衍生物4和5。延長反應(yīng)時(shí)間至12 h，發(fā)現(xiàn)有新衍生物3生成，衍生物4和5的量減少。加入飽和NaHCO3溶液淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取5次，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析（石油醚：乙酸乙酯=2：1）純化得到化合物3（白色固體48.9 mg，收率21.0%）、化合物4（白色固體39.7 mg，收率26.1%）、化合物5（白色固體43.7 mg，收率29.0%）。

為了驗(yàn)證Secologanol是否能完全轉(zhuǎn)化為化合物3，稱取Secologanol 50 mg（0.13 mmol）裝入25 mL圓底燒瓶中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，用1 mL四氫呋喃溶解，滴加三乙胺179μL（1.30 mmol）。滴加完畢后，冰浴條件下緩慢滴加苯甲酰氯55 mg（0.39 mmol），室溫反應(yīng)約24 h。待原料消失，發(fā)現(xiàn)僅有1個(gè)主要產(chǎn)物生成，殘余物經(jīng)硅膠柱層析（石油醚：乙酸乙酯=2：1）純化得到化合物3（白色固體95.1 mg，收率81.9%）。證明Secologanol可以完全轉(zhuǎn)化為化合物3。

化合物3：白色固體；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.07（d，J=1.2 Hz，2H），8.05（d，J=1.6 Hz，2H），8.03（d，J=1.2 Hz，1H），8.01（d，J=1.5 Hz，2H），7.90（ddd，J=8.4，4.1，1.4 Hz，7H），7.84（d，J=1.3 Hz，2H），7.82（d，J=1.5 Hz，2H），7.41（s，1H），7.13（d，J=1.5 Hz，2H），5.91（d，J=9.6 Hz，1H），5.71（t，J=9.7 Hz，2H），5.35（d，J=4.5 Hz，2H），5.32（d，J=1.4 Hz，1H），4.66（d，J=3.2 Hz，1H），4.63（d，J=3.1 Hz，1H），4.53（d，J=5.1 Hz，1H），4.50（d，J=5.0 Hz，1H），3.34（s，3H），2.93~2.82（m，1H），2.78~2.62（m，1H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：166.57，166.41，166.11，165.74，165.15，164.71，150.77，133.53，133.32，133.23，133.10，132.87，132.78，130.34，130.12，129.84，129.78，129.77，129.74，129.69，129.47，129.12，128.99，128.70，128.65，128.45，128.42，128.34，128.31，126.28，120.30，110.60，96.68，96.57，72.63，72.53，71.15，69.50，62.94，62.83，51.02，43.03，31.95，29.69。

化合物4：白色固體；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.03（dt，J=7.0，1.4 Hz，1H），8.00（d，J=1.2 Hz，1H），7.99~7.97（m，1H），7.95（d，J=1.5 Hz，1H），7.91（ddd，J=8.4，4.0，2.5 Hz，1H），7.49（dt，J=7.5，1.9 Hz，1H），7.47~7.44（m，1H），7.40~7.32（m，2H），5.64~5.59（m，1H），5.43（d，J=6.6 Hz，1H），5.01（d，J=7.8 Hz，1H），3.92（s，1H），3.65（s，3H），3.31~3.24（m，1H），3.15（s，1H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：167.82，165.85，165.79，150.12，133.69，133.04，133.01，130.14，130.11，129.89，129.87，129.86，129.81，128.57，128.55，128.52，128.46，120.46，111.26，109.04，79.58，74.38，73.45，71.24，68.86，44.87，33.52，30.65，29.01，28.34。

化合物5：白色固體；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.04（dd，J=8.3，1.4 Hz，1H），7.91（ddd，J=8.5，3.5，1.4 Hz，2H），7.86（dd，J=8.4，1.4 Hz，1H），7.51（s，1H），7.46~7.40（m，2H），7.39~7.27（m，2H），5.96（t，J=9.8 Hz，1H），5.74（t，J=9.7 Hz，1H），5.56（dd，J=10.0，8.1 Hz，1H），5.40（d，J=1.3 Hz，1H），5.29~5.19（m，2H），4.66（dd，J=12.3，3.0 Hz，1H），4.53（d，J=4.8 Hz，1H），4.26~4.18（m，1H），4.10（dd，J=12.9，7.0 Hz，1H），3.48（s，3H），2.67~2.58（m，1H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：167.19，165.85，165.85，150.12，133.69，133.04，133.04，130.14，130.14，129.89，129.89，129.86，129.86，128.57，128.55，128.52，128.52，120.46，111.30，108.70，80.20，73.36，72.19，69.20，61.10，52.29，44.90，33.52，30.68，28.60。

2 結(jié)果與討論

在對(duì)Secologanol進(jìn)行?；磻?yīng)過程中，發(fā)現(xiàn)?；瘎┑牧考胺磻?yīng)時(shí)間均對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物產(chǎn)生較大影響。在乙酰化反應(yīng)中，當(dāng)酰化劑為1.5當(dāng)量，反應(yīng)時(shí)間為12 h時(shí)，化合物2為主產(chǎn)物，收率為85.3%，而化合物1的收率僅為8.5%，說明Secologanol糖基上羥基相較7-位羥基更容易被?；划?dāng)?；瘎?.5當(dāng)量，反應(yīng)時(shí)間為24 h時(shí)，僅得到全乙?；a(chǎn)物1且收率為90.6%。該結(jié)果說明，通過控制反應(yīng)條件，可快速、高效得到化合物1和2。

在進(jìn)行苯甲?；^程中，當(dāng)?；瘎?.0當(dāng)量，反應(yīng)時(shí)間為6 h時(shí)，化合物4和5為主要產(chǎn)物；增加反應(yīng)時(shí)間至12 h，有新衍生物3生成，化合物3、4和5的收率分別為21.0%、26.1%和29.0%。當(dāng)苯甲酰氯的量為3.0當(dāng)量，反應(yīng)時(shí)間為24 h，反應(yīng)僅得到全苯甲?；a(chǎn)物3，收率為81.9%。該結(jié)果說明，通過控制反應(yīng)條件，也可快速、高效得到化合物3、4和5。

在進(jìn)行?；磻?yīng)時(shí)，需嚴(yán)格控制在無水條件下進(jìn)行。全乙?；a(chǎn)物1和四乙?；a(chǎn)物2的高收率制備，為Secologanol的進(jìn)一步結(jié)構(gòu)修飾打下良好基礎(chǔ)；其新苯甲酰化產(chǎn)物3、4和5的制備，為其活性研究提供了新的衍生物。Secologanol不同?；a(chǎn)物1~5的生物活性有待進(jìn)一步研究。