王 甜，葉足約，楊惠云，王 樂(lè)，王福生

（大理大學(xué)藥學(xué)院，云南大理 671000）

龍膽屬（Gentiana）植物系龍膽科（Gentianaceae）的一個(gè)大屬，全球約400種，我國(guó)有247種、41變種，其中，云南有125種，含6個(gè)變種〔1〕。龍膽屬植物在我國(guó)民間有悠久的藥用歷史，具有抗高血壓、抗菌、抗炎、抗腫瘤和保肝及神經(jīng)保護(hù)等多種藥理活性〔2〕。據(jù)文獻(xiàn)〔3〕報(bào)道，龍膽屬植物的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜類、黃酮類和三萜類等。云南龍膽（Gentiana yunnanensis Franch.）主要分布于云南昭通、巧家、東川、大理、洱源、麗江、香格里拉、賓川等地，作為民族藥，具有清熱解毒、止咳和潤(rùn)喉等功效〔4〕。

課題組前期對(duì)龍膽屬植物微籽龍膽中的化學(xué)成分及其活性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)部分黃酮類成分具有明顯的抗氧化活性〔5〕。課題組前期對(duì)云南龍膽的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)云南龍膽中含有木脂素苷類化合物〔6〕。除本課題組外，未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外其他學(xué)者對(duì)云南龍膽的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行研究，為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用該藥用植物資源，本實(shí)驗(yàn)對(duì)云南龍膽的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離鑒定了7個(gè)黃酮類化合物，分別為異葒草素（1）、牡荊素（2）、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、柚皮素（5）、山柰酚（6）和葛根素（7）?；衔?~7均為首次從該植物中分離得到，化合物4為首次從該屬植物中分離得到，為該藥用植物資源的開(kāi)發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物1~7的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 AvanceⅢ-400核磁共振波譜儀（德國(guó)布魯克公司）；干燥箱（深圳市澳德瑪電子科技有限公司）；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；分析天平（Sartourius）；AB-8型大孔樹(shù)脂（蚌埠市遼源新材料有限公司）；Sephadex LH-20（美國(guó)GE公司）；中壓色譜分離凝膠（MCI）和十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）（日本YMC公司）；硅膠（青島海洋化工廠分廠）；薄層色譜硅膠板GF254（青島海洋化工有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 乙醇、甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇均購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠；氘代甲醇、二甲基亞砜（DMSO）均購(gòu)自阿拉丁。本實(shí)驗(yàn)所用植物云南龍膽藥材采自于云南省大理市花甸壩，經(jīng)大理大學(xué)段寶忠教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物云南龍膽（Gentiana yunnanensis Franch.）全草，植物標(biāo)本號(hào)為WFS-2017823，保存于大理大學(xué)王福生教授課題組。

2 提取與分離

干燥云南龍膽全株5.0 kg，粉碎后依次用95%乙醇冷浸提取3次（3×30 L×24 h），提取液濃縮成浸膏（1.2 kg），將浸膏水溶后經(jīng)AB-8型大孔樹(shù)脂柱層析由甲醇-水（體積比0：1→1：0）洗脫，得到Fr.1~Fr.4 4個(gè)組分。其中Fr.3（287 g）經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇，體積比100：1→1：1）得到4個(gè)組分（Fr.3.1~Fr.3.4）。Fr.3.2組分反復(fù)經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱層析（氯仿-甲醇，體積比1：1）、硅膠柱層析（氯仿-甲醇，體積比30：1→5：1），得到化合物2（20 mg）、3（5 mg）、5（20 mg）和7（10 mg）。Fr.4（529 g）經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇，體積比100：1→1：1）得到4個(gè)組分（Fr.4.1~Fr.4.4）。Fr.4.3和Fr.4.4反復(fù)經(jīng)ODS（甲醇）、MCI（甲醇）、硅膠柱層析（氯仿-甲醇，體積比15：1→5：1）和凝膠Sephadex LH-20（甲醇）柱層析，得到化合物1（63 mg）、4（19 mg）和6（15 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化 合 物1：黃 色 粉 末。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：6.70（1H，s，H-3），6.53（1H，s，H-8），7.47（1H，d，J=2.3 Hz，H-2'），6.79（1H，d，J=8.2 Hz，H-5'），7.39（1H，dd，J=8.2，2.3 Hz，H-6'），4.64（1H，d，J=9.9 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：163.68（C-2），102.83（C-3），181.91（C-4），103.41（C-4a），160.73（C-5），108.90（C-6），163.28（C-7），93.53（C-8），156.23（C-8a），121.75（C-1'），112.98（C-2'），143.28（C-3'），149.99（C-4'），114.47（C-5'），119.01（C-6'），73.09（C-1″），71.19（C-2″），78.51（C-3″），71.28（C-4″），80.34（C-5″），62.34（C-6″）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔7〕報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物1為異葒草素（isoorientin）。

化合物2：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.78（1H，s，H-3），6.36（1H，s，H-6），7.97（2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6'），6.90（2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5'），4.84（1H，d，J=9.7 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：165.87（C-2），103.76（C-3），183.88（C-4），103.45（C-4a），162.83（C-5），99.64（C-6），162.87（C-7），108.85（C-8），158.64（C-8a），123.25（H-1'），129.49（H-2'，6'），117.35（C-3'，5'），161.86（C-4'），75.78（C-1″），72.64（C-2″），78.75（C-3″），71.75（C-4″），80.14（C-5″），62.78（C-6″）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔8〕報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物2為牡荊素（vitexin）。

化合物3：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.77（1H，s，H-3），6.59（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），6.63（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），7.82（2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6'），6.91（2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5'），4.82（1H，d，J=7.9 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：164.18（C-2），104.19（C-3），185.12（C-4），103.91（C-4a），165.43（C-5），98.12（C-6），164.32（C-7），100.01（C-8），158.78（C-8a），123.18（C-1'），132.10（C-2'，6'），118.05（C-3'，5'），161.96（C-4'），100.24（C-1″），74.77（C-2″），77.64（C-3″），71.21（C-4″），78.27（C-5″），62.41（C-6″）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔9〕報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物3為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物4：黃綠色粉末。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：6.69（1H，s，H-3），6.57（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），6.85（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），7.39（1H，d，J=2.2 Hz，H-2'），6.90（1H，d，J=8.2 Hz，H-5'），7.48（1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6'），4.96（1H，d，J=7.9 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164.23（C-2），103.40（C-3），182.97（C-4），105.71（C-4a），157.13（C-5），100.90（C-6），162.88（C-7），96.25（C-8），161.49（C-8a），120.61（C-1'），113.46（C-2'），153.24（C-3'），147.18（C-4'），115.98（C-5'），122.31（C-6'），100.78（C-1″），72.10（C-2″），76.18（C-3″），71.54（C-4″），78.10（C-5″），62.34（C-6″）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔10〕報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物4為木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物5：淡黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.22（2H，m，H-2'，6'），6.73（2H，m，H-3'，5'），5.80（2H，q，J=2.2 Hz，H-6，8），5.22（1H，dd，J=13.0，2.7 Hz，H-2），3.01（1H，dd，J=17.1，12.8 Hz，H-3-trans），2.58（1H，dd，J=17.1，2.7 Hz，H-3-cis）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：80.45（C-2），44.01（C-3），197.76（C-4），103.29（C-4a），164.85（C-5），97.01（C-6），168.31（C-7），96.13（C-8），165.43（C-8a），129.05（C-1'），131.03（C-2'，6'），116.28（C-3'，5'），158.99（C-4'）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔11〕報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物5為柚皮素（naringenin）。

化合物6：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.95（2H，d，J=8.9 Hz，H-2'，6'），6.83（2H，d，J=8.9 Hz，H-3'，5'），6.34（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.09（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：146.85（C-2），135.75（C-3），175.97（C-4），103.12（C-4a），160.78（C-5），98.27（C-6），163.94（C-7），93.56（C-8），156.24（C-8a），121.75（C-1'），129.60（C-2'，6'），115.51（C-3'，5'），159.25（C-4'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔12〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為山柰酚（kaempferol）。

化 合 物7：白 色 粉 末。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.09（1H，s，H-2），7.96（1H，d，J=8.9 Hz，H-5），6.93（1H，d，J=8.9 Hz，H-6），7.28（2H，m，H-2'，6'），6.76（2H，m，H-3'，5'），5.02（1H，d，J=9.9 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：154.48（C-2），124.11（C-3），178.23（C-4），116.20（C-4a），125.43（C-5），116.20（C-6），162.99（C-7），113.08（C-8），158.64（C-8a），124.11（C-1'），131.34（C-2'，6'），113.08（C-3'，5'），154.48（C-4'），74.31（H-1″），71.62（H-2″），79.97（H-3″），70.34（H-4″），82.73（H-5″），62.38（H-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔13〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為葛根素（puerarin）。

4 討論

本文對(duì)云南龍膽95%乙醇提取物進(jìn)行分離純化，得到了7個(gè)黃酮類化合物，包括4個(gè)黃酮苷類化合物1~4、1個(gè)二氫黃酮類化合物5、1個(gè)黃酮醇類化合物6和1個(gè)異黃酮類化合物7?；衔?~7均首次從該藥用植物中分離得到，化合物4為首次從該屬植物中分離得到。

龍膽屬植物中含有豐富的黃酮類成分，課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)化合物2、3和7對(duì)1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基有明顯的清除能力〔5〕。黃酮類化合物還具有抗胃潰瘍、神經(jīng)保護(hù)、抗心肌缺血、降壓、改善學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知、保護(hù)生殖組織、抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤以及降血糖等藥理活性〔14〕。因此，該實(shí)驗(yàn)為龍膽屬植物的物質(zhì)基礎(chǔ)及藥用植物資源開(kāi)發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。龍膽屬植物中黃酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系及量豐黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)優(yōu)化有待進(jìn)一步研究。