歐陽(yáng)賢鳳，羅萍（通信作者），鄔珊，胡飛，于繼海，李金鳳，徐旭升，郭瑛，黃雄，朱文鳳

江西省九江市第一人民醫(yī)院 （江西九江 332000）

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是臨床常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，好發(fā)于老年人群，主要臨床表現(xiàn)為血鈣增高、貧血、骨痛及腎功能損傷，即“CRAB 癥狀”[1]。近年來(lái)，隨著我國(guó)人口老齡化速度的加快，MM 發(fā)病率不斷上升。臨床治療MM 患者的傳統(tǒng)方法包括化療、靶向治療、造血干細(xì)胞移植等，但療效均不理想，患者的中位生存期僅為3年[2]。隨著惡性腫瘤自體免疫細(xì)胞治療研究的廣泛開(kāi)展，樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine-induced killer，CIK，）、自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）分別在MM 患者的治療中取得了一定療效[3]。本研究在傳統(tǒng)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合DC-CIK-NK 自體免疫多細(xì)胞治療MM 患者，預(yù)期目的是提高患者的無(wú)進(jìn)展生存期（progression free survival，PFS）及總生存期（overall survival，OS），改善患者的生命質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月至2018年6月我院血液科收治的MM初診患者42例，按隨機(jī)原則分為兩組，每組21例。試驗(yàn)組男11例，女 10例；平均年齡（68.84±9.72）歲；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型12例，Ⅲ型9例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型10例，Ⅲ型11例；平均血紅蛋白（hemoglobin，Hb）水平為（76.96±5.21）g/L。對(duì)照組男10例，女 11例；平均年齡（68.50±9.45）歲；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型13例，Ⅲ型8例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型7例，Ⅲ型14例；平均Hb 水平為（77.04±5.47）g/L。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：完成基本檢查；骨髓單克隆漿細(xì)胞比值≥10%或活檢提示漿細(xì)胞瘤；血清或尿液中出現(xiàn)單克隆球蛋白；表現(xiàn)有“CRAB 癥狀”[4]。納入標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)血液檢查、尿液檢查、骨髓檢查、影像學(xué)檢查等確診為MM；具有完整行為能力并同意簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)： 對(duì)本研究化療藥物不耐受的患者；合并嚴(yán)重心腦血管或神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者；曾接受過(guò)骨髓移植或二次治療的患者；依從性差或中途退出的患者。

1.2 方法

對(duì)照組采用TMP 方案（沙利度胺+美法侖+地塞米松）化療：沙利度胺片（常州制藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32026130，規(guī)格50 mg）口服，首周50 mg/d，每周增量50 mg，最大劑量為200 mg/d；美法侖（愛(ài)克蘭， Heumann Pharma GmbH，注冊(cè)證號(hào) H20040125，規(guī)格 2 mg）口服，0.15 mg/kg，d1-4；地塞米松硫酸鈉注射液（辰欣藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H37021969，規(guī)格1 ml∶5 mg）靜脈滴注，40 mg/d，d1-2、d4-5、d8-11，6周為1個(gè)療程。

試驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合DC-CIK-NK 自體免疫多細(xì)胞療法。（1）細(xì)胞株腫瘤抗原提取液制備流程：復(fù)蘇凍存多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)（傳代不超過(guò)25代）；24 h 后吸出培養(yǎng)基，再用細(xì)胞勺刮取腫瘤細(xì)胞，離心去上清后，用無(wú)菌0.9%氯化鈉注射液重懸；然后將腫瘤細(xì)胞置于-86 ℃冰箱，反復(fù)凍融10次，12 000 r/min 離心5 min，去上清，過(guò)濾除菌；測(cè)定細(xì)菌、真菌、內(nèi)毒素、支原體及蛋白濃度，按蛋白濃度以培養(yǎng)液配成5 mg /ml 作為抗原提取液，-20 ℃保存，質(zhì)檢合格后待用。（2）DC 的培養(yǎng)：將外周血單個(gè)核細(xì)胞鋪入6孔板，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h 后，輕輕晃動(dòng)，取懸浮細(xì)胞待用；用培養(yǎng)基洗板2次后，加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；第3天加入DC 培養(yǎng)基，第5天加入腫瘤抗原提取液，誘導(dǎo)10～15 h 加入細(xì)胞因子（如抗CD3單克隆抗體、白細(xì)胞介素-2和干擾素-γ 等）；第8天開(kāi)始連續(xù)2 d 回輸，共4次。（3）CIK 的培養(yǎng)：將DC 培養(yǎng)得到的部分懸浮細(xì)胞密度調(diào)整為1×106個(gè)/ml，加入干擾素，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后加入細(xì)胞因子（如抗CD3單克隆抗體、白細(xì)胞介素-2 和干擾素-γ等），繼續(xù)培養(yǎng)，每3 天半量換液，并補(bǔ)加相應(yīng)細(xì)胞因子和自體血漿；12 d 后開(kāi)始回輸，連續(xù)2 d，共回輸4 次。（4） NK 的培養(yǎng)：將DC 培養(yǎng)得到的部分懸浮細(xì)胞密度調(diào)整為1 ×106個(gè)/ml，加入抗CD3單抗，培養(yǎng)3 d 后，更換含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3天半量換液，并補(bǔ)加相應(yīng)細(xì)胞因子及自體血漿；14 d 后開(kāi)始回輸，連續(xù)2 d，共回輸4次。（5）回輸：質(zhì)量檢控合格的細(xì)胞，用5%患者自體血漿重懸，將重懸液注入100～250 ml 0.9%氯化鈉注射液中，混勻，用于第1次回輸，同時(shí)取1 ml 回輸液置于滅菌1.5 ml 離心管中，封口做標(biāo)識(shí)，4 ℃存放3個(gè)月備查；剩余細(xì)胞在10～17 d 內(nèi)回輸完。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）治療4個(gè)療程后，比較兩組治療總有效率：參考國(guó) 際 骨 髓 瘤 工 作 組（International Myeloma Working Group，IMWG）標(biāo)準(zhǔn)，治療效果分為完全緩解、非常好的部分緩解、部分緩解、疾病穩(wěn)定、疾病進(jìn)展，總有效率=（完全緩解例數(shù)+非常好的部分緩解例數(shù)）/總例數(shù)×100%。（2）隨訪2年，記錄兩組PFS 與OS：PFS 為患者接受治療至最后一次隨訪結(jié)束時(shí)，發(fā)現(xiàn)疾病進(jìn)展或死亡的時(shí)間；OS 為分組至最后一次隨訪結(jié)束或死亡的時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療總有效率比較

試驗(yàn)組治療總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組治療總有效率比較

2.2 兩組PFS 與OS 比較

隨訪2年，試驗(yàn)組PFS 與OS 均長(zhǎng)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組PFS 與OS 比較（個(gè)月，±s）

表2 兩組PFS 與OS 比較（個(gè)月，±s）

注：PFS 為無(wú)進(jìn)展生存期，OS 為總生存期

組別 例數(shù) PFS OS試驗(yàn)組 21 23.44±0.95 24.02±0.99對(duì)照組 21 20.87±2.42 21.09±2.18 t 4.524 5.591 P＜0.05 ＜0.05

3 討論

目前，臨床已將自體細(xì)胞免疫療法列入MM 的治療原則，該療法可調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中T 細(xì)胞的組成及比例，從而識(shí)別并殺死癌細(xì)胞。

DC 是機(jī)體功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工、處理和遞呈抗原給殺傷腫瘤的效應(yīng)細(xì)胞，利用腫瘤抗原沖擊DC 的過(guò)繼細(xì)胞免疫治療具有強(qiáng)大的抗腫瘤效應(yīng)，已被用于多種實(shí)體腫瘤的治療；CIK 具有增殖能力強(qiáng)、殺瘤活性高、殺瘤譜廣及非主要組織相容性復(fù)合體限制性殺瘤等特點(diǎn)，具有廣泛殺傷自體、異體及耐藥癌細(xì)胞的作用[5]； NK 可通過(guò)識(shí)別癌細(xì)胞表達(dá)的NK 表面分子配體，而對(duì)癌細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用[6]。DC-CIK-NK 自體免疫多細(xì)胞療法可發(fā)揮DC 的傳輸抗原信息能力、CIK 的特異性殺傷和非MHC 限制性殺傷能力、NK 的識(shí)別惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞能力。DC-CIK-NK 自體免疫多細(xì)胞療法的治療機(jī)制如下：首先，經(jīng)輔助細(xì)胞（如DC、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）活化的NK 細(xì)胞進(jìn)入患者體內(nèi)，到達(dá)效應(yīng)部位，在其他活化信號(hào)的作用下成為效應(yīng)細(xì)胞，發(fā)揮快速殺傷癌細(xì)胞的特點(diǎn)；其次，適度聯(lián)合放、化療可以使癌細(xì)胞上的NK 細(xì)胞活化受體的配體表達(dá)開(kāi)啟，增加癌細(xì)胞對(duì)NK 細(xì)胞殺傷的敏感性；另外，NK 和CIK 的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用也有助于提高臨床療效。本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組治療總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨訪2年，試驗(yàn)組PFS 及OS 均長(zhǎng)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，自體免疫多細(xì)胞聯(lián)合化療有助于提高M(jìn)M患者的治療效果，延長(zhǎng)其生存期。