王昌建，方 鈴,2，林 源,2，唐小明，王衛(wèi)國，魯杏華，彭 志，李海珍，賀銀輝，何世成，劉道新*

(1.湖南省動物疫病預(yù)防控制中心，湖南長沙 410014；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙 410128；3.湖南天心種業(yè)有限公司，湖南長沙 410000)

偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Seudorabies virus,PRV)引起的一種危害較大的病毒性疾病，臨床上以發(fā)熱、奇癢和腦脊髓炎為主要特征[1]。新生仔豬感染該病毒會導(dǎo)致高死亡率和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，成年豬感染后易發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病，懷孕母豬感染后易發(fā)生生殖系統(tǒng)疾病，導(dǎo)致繁殖障礙，從而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。偽狂犬病呈全球分布，歐美地區(qū)的部分發(fā)達(dá)國家(美國、荷蘭等)已經(jīng)徹底凈化了該病[4]。該病在我國仍廣泛存在，并被列為二類動物疫病。20世紀(jì)50年代，我國首次暴發(fā)該病，使用了PRV基因缺失疫苗后，該病得到了有效地控制[5]。然而，2011年底，我國許多地區(qū)免疫豬場又開始暴發(fā)此病[6]。對流行毒株進(jìn)行分離鑒定，發(fā)現(xiàn)它與傳統(tǒng)毒株相比，發(fā)生了突變，形成了獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)，其致病性和抗原特性也發(fā)生了相應(yīng)的變化，從而導(dǎo)致傳統(tǒng)疫苗株的保護(hù)力下降[7]。為了解湖南地區(qū)的豬偽狂犬病免疫情況及野毒感染狀況，本研究采集了湖南省14個市州的4 288份血清，對PRV gE和 PRV gB抗體進(jìn)行檢測與分析，以期為該病的防控與凈化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 2018年采自湖南省14個市州208個規(guī)模豬場的4 288份豬血清樣品，其中157個PR免疫豬場，共2 858份免疫血清；未免疫場51個，共1 430份未免疫血清。根據(jù)隨機(jī)采樣原則，每個豬場采集血清樣品20～30份，無菌采集血液樣本2 mL～3 mL，靜置2 h～4 h，3 000 r/min 離心3 min，取上清液至無菌離心管中，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑 PRV gB抗體檢測ELISA試劑盒和PRV gpI(gE)抗體檢測ELISA試劑盒，美國IDEXX公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 各種量程移液器，德國Eppendorf公司產(chǎn)品；微量震蕩儀(SK96-3型)，江蘇新康醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；恒溫箱(SPM-250型)，寧波江南有限公司產(chǎn)品；多功能臺式離心機(jī)(5804R型)，德國Eppendorf公司產(chǎn)品。

1.2 方法

采用IDEXX公司生產(chǎn)的PRV gB抗體檢測ELISA試劑盒和PRV gpI(gE)抗體檢測ELISA試劑盒，按說明書進(jìn)行檢測。本研究檢測的血清樣品來自免疫了PRV gE基因缺失疫苗的豬場，如果PRV gE抗體檢測結(jié)果呈陽性，則判定為野毒感染。對豬場結(jié)果進(jìn)行判定和統(tǒng)計時，如果有一個樣品呈陽性，則判定該豬場為野毒感染陽性場。

2 結(jié)果

2.1 2018年全省規(guī)模豬場PRV抗體檢測結(jié)果

2018年度，共檢測來自湖南省14個市州208個規(guī)模豬場血清樣品4 288份。經(jīng)PRV gE抗體檢測，陽性場有81個，場陽性率為38.9%，陽性血清樣品有901份，陽性率為21.0%；對其中免疫了PRV疫苗的157個豬場，2 858份血清樣品進(jìn)行PRV gB抗體檢測，陽性場有143個，場陽性率為91.1%，陽性血清樣品有2 233份，陽性率為78.1%(表1)。

表1 2018年全省規(guī)模豬場PRV抗體檢測結(jié)果

2.2 不同地區(qū)規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

對不同地區(qū)規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示，14個市州PRV野毒感染率不盡相同，其中湘潭地區(qū)的場陽性率和個體陽性率均為最高，分別為70.0%和51.2%；邵陽地區(qū)場陽性率和個體陽性率均較低，分別為13.3%和3.3%；湘西州和張家界雖然場陽性率和個體陽性率均為0，但由于樣品采集原因，并不能確定這兩個地區(qū)沒有PRV野毒感染情況(表2)。

表2 不同地區(qū)規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2.3 不同季節(jié)規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

季節(jié)劃分：春季(3月～5月)，夏季(6月～8月)，秋季(9月～11月)，冬季(12月～2月)。

對不同季節(jié)規(guī)模豬場的PRV gE抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示，夏季PRV gE抗體陽性率最高(25.1%)，冬季PRV gE抗體陽性率最低，(13.2%)，春季和秋季PRV gE抗體陽性率分別為19.2%和24.1%(表3)。

表3 不同季節(jié)規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2.4 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

對不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場的PRV gE抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示，存欄量大于1 000頭的大型規(guī)模豬場PRV gE抗體陽性率最高(22.9%)，200頭～1000頭的中型規(guī)模豬場PRV gE抗體陽性率最低(13.0%)，存欄量小于200頭的小型規(guī)模豬場PRV gE抗體陽性率為19.8%(表4)。

表4 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2.5 不同年齡階段規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

對不同年齡階段規(guī)模豬場的PRV gE抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示：種母豬PRV gE抗體陽性率高于其他年齡階段的豬群，為36.2%，種公豬PRV gE抗體陽性率最低，為13.1%(表5)。

表5 不同年齡階段規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

3 討論

預(yù)防和控制豬偽狂犬病最有效的手段之一是接種疫苗。目前，我國多使用PRV gE基因缺失疫苗來防控豬偽狂犬病，因此血清樣品中檢測出gE抗體即可確診為野毒感染[8]。通過定期監(jiān)測PRV gE抗體情況，淘汰陽性豬，可逐漸凈化該病。同時，通過定期監(jiān)測PRV gB抗體情況，可及時了解豬群的免疫情況，使疫苗發(fā)揮最大的保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，2018年湖南省PRV gB抗體場陽性率和個體陽性率分別為91.1%和78.1%，均高于群體免疫合格水平(70%)。PRV gE抗體場陽性率和個體陽性率分別為38.9%和21.0%，這說明雖然湖南省規(guī)模豬場免疫情況基本合格，但是野毒感染情況依舊廣泛存在。根據(jù)年份統(tǒng)計[9-10]，2013年-2015年湖南省PRV gE抗體陽性率分別為：45.5%、21.71%、25.17%，總體呈下降趨勢，野毒感染情況有所好轉(zhuǎn)，說明湖南地區(qū)規(guī)模豬場豬偽狂犬病進(jìn)化工作取得了一定成效。

按照不同地區(qū)對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，全省14個市州的野毒感染情況有所不同，其中PRV野毒感染率最高的地區(qū)為湘潭，場陽性率和個體陽性率分別為70.0%和51.2%。結(jié)合采樣信息，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)存欄量大于1 000頭的規(guī)模豬場較多，養(yǎng)殖密度大，現(xiàn)該地區(qū)存欄量大于1 000頭的規(guī)模豬場較多，養(yǎng)殖密度大。同時該地區(qū)豬只調(diào)運(yùn)較頻繁，PRV可能通過車輛運(yùn)輸和人員進(jìn)出而大范圍傳播，導(dǎo)致該地區(qū)PRV野毒感染率升高。當(dāng)然，也有該地區(qū)豬場對豬偽狂犬病免疫程序混亂，導(dǎo)致疫苗免疫失敗的原因[11]。張家界和湘西州兩個地區(qū)的場陽性率和個體陽性率都為0，地區(qū)養(yǎng)殖密度小，能采集的樣品數(shù)量少，所以不能完全排除這兩個地區(qū)PRV野毒感染情況。

按照不同養(yǎng)殖規(guī)模對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，存欄量大于1 000頭的規(guī)模豬場野毒感染率最高(22.9%)，500頭～1 000頭的規(guī)模豬場野毒感染率最低，為13.0%。結(jié)果顯示，中型養(yǎng)殖規(guī)模更有利于PRV地防控，這與王昌建[9]等報道中型養(yǎng)殖規(guī)模豬場野毒感染率最低相一致。

按照不同季節(jié)對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，夏季和秋季PRV野毒感染率較高，為25.1%和24.1%，冬季PRV野毒感染率最低，為13.2%。結(jié)果顯示一年四季都有PRV野毒感染情況。

按照不同年齡階段對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，種母豬PRV gE抗體陽性率最高，為36.2%，可能是因?yàn)榉N母豬的飼養(yǎng)周期較長，被PRV感染的風(fēng)險比其他豬群高，也可能是人工授精時，被帶PRV的公豬精液所感染。其次是哺乳仔豬，為31.5%，這可能是因?yàn)槟冈纯贵w的存在[12]。種公豬PRV gE抗體陽性率最低，為13.1%，結(jié)果說明種豬場存在PRV野毒感染，可能是通過引種傳播[13]。

綜上所述，湖南省免疫的規(guī)模豬場PRV gB抗體合格率達(dá)過了群體免疫合格水平，但PRV野毒感染情況普遍存在。因此，應(yīng)加強(qiáng)豬場飼養(yǎng)管理、生物安全管理和疫苗免疫接種，提高豬群免疫力，并定期開展血清學(xué)調(diào)查，淘汰感染豬，從而凈化該病。