侯 佳，徐光嵐，張軍風(fēng)，劉文旺，雷穎虎，高更更

(秦嶺大熊貓研究中心(陜西省珍稀野生動(dòng)物救護(hù)基地)，西安 710402)

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，具有很高的發(fā)病率和病死率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病[1]。新城疫是我國(guó)規(guī)定的一類(lèi)動(dòng)物疫病，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定必須報(bào)告的傳染病[1-2]。新城疫(ND)可感染50個(gè)鳥(niǎo)目中27個(gè)目250種不同禽類(lèi)，人也可感染新城疫，表現(xiàn)為結(jié)膜炎或類(lèi)似流感臨診癥狀[3,4]。近年來(lái)，宿主范圍有擴(kuò)大的趨勢(shì)，鵝、鴨等水禽也可感染發(fā)病[5]。

朱鹮(Nipponianippon)是中等體形的涉禽,隸屬于鵜形目(Pelecaniformes)鹮科(Threskiornithidae),屬國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物；國(guó)際自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)物種紅色名錄瀕危(EN)物種；瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約(CITES)附錄Ⅰ物種[6-7]。朱鹮感染新城疫偶有報(bào)道，但尚無(wú)治愈的案例報(bào)道。

2018年，陜西省珍稀野生動(dòng)物救護(hù)基地(以下簡(jiǎn)稱基地)，人工育雛過(guò)程中有10只朱鹮雛鳥(niǎo)相繼死亡，經(jīng)病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)為新城疫。剩余18只朱鹮雛鳥(niǎo)經(jīng)檢測(cè)12只新城疫陽(yáng)性，后經(jīng)抗NDV異源高免血清治療和新城疫疫苗緊急免疫后，16只雛鳥(niǎo)成活。本次朱鹮雛鳥(niǎo)新城疫的診治，為今后珍稀瀕危鳥(niǎo)類(lèi)新城疫治療提供了參考方案。

1 臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1.1 臨床癥狀

此次新城疫發(fā)病過(guò)程，首先雛鳥(niǎo)出現(xiàn)食欲不良或廢絕，或嘔吐、精神沉郁，除2例便秘外，其余均有水樣稀便及黃色糞便。從出現(xiàn)食欲不良到死亡，時(shí)間從數(shù)小時(shí)至2 d不等，大部分病程很短。死亡個(gè)體中僅有1例28日齡個(gè)體，死亡前出現(xiàn)角弓反張癥狀，8 h后死亡。

1.2 剖檢變化

對(duì)其中3例朱鹮雛鳥(niǎo)尸體進(jìn)行剖檢，只有出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的1例個(gè)體病理變化最明顯典型，其余2例非典型，具體剖檢結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 朱鹮雛鳥(niǎo)感染NDV后的臨床癥狀及解剖結(jié)果

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

對(duì)16只雛鳥(niǎo)的口腔拭子、尸體1內(nèi)臟組織、尸體3的內(nèi)臟組織、腦組織分別進(jìn)行了NDV、AIV(禽流感病毒通用)、H5(禽流感病毒H5亞型)和H9(禽流感病毒H9亞型)病原檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。AIV、H5、H9全部為陰性，除4只雛鳥(niǎo)NDV陰性外，其余樣品NDV病原陽(yáng)性。

表2 實(shí)驗(yàn)室NDV及AIV病原檢測(cè)結(jié)果

1.4 尸體1病料細(xì)菌分離試驗(yàn)

無(wú)菌接種尸體1腸道、肝臟病料到細(xì)菌培養(yǎng)基中，進(jìn)行細(xì)菌分離。結(jié)果分離到大量的大腸埃希氏菌及少量葡萄球菌和鏈球菌。對(duì)分離到的細(xì)菌采用藥敏紙片法進(jìn)行細(xì)菌藥敏試驗(yàn)。

結(jié)果顯示，對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)呈現(xiàn)敏感抑制的抗生素為左氟沙星(抑菌環(huán)23.22 mm)、諾氟沙星(抑菌環(huán)21.06 mm)、環(huán)丙沙星(抑菌環(huán)23.42 mm)、頭孢噻肟(抑菌環(huán)24.56 mm)。

2 防控及治療

2.1 防控

根據(jù)傳染病實(shí)驗(yàn)室NDV病原檢測(cè)結(jié)果立即對(duì)朱鹮種群籠舍、飼養(yǎng)區(qū)、飼養(yǎng)人員的工服、膠鞋及周?chē)h(huán)境進(jìn)行持續(xù)1月的嚴(yán)密消毒，并對(duì)朱鹮種群進(jìn)行緊急免疫。立即將所有人工育雛的朱鹮雛鳥(niǎo)全部轉(zhuǎn)移，并安排固定飼養(yǎng)人員隔離飼養(yǎng)。采取嚴(yán)格措施，杜絕人員活動(dòng)、器具、車(chē)輛將疾病傳播給健康種群和園內(nèi)其它禽類(lèi)的可能性。對(duì)育雛室墻面、地面消毒后進(jìn)行重新粉刷處理；對(duì)育雛室內(nèi)的辦公家具進(jìn)行仔細(xì)消毒。對(duì)死亡朱鹮尸體進(jìn)行無(wú)害化處理。

2.2 治療

2.2.1 NDV高免血清的制備 選NDV免疫過(guò)的且在免疫期的SPF公雞2只，無(wú)菌心臟采血法取血，10 000 r/min離心分離血清。按1 mL血清加入各1 000單位的青霉素和鏈霉素，置-20℃冷凍保存，備用。

2.2.2 治療及緊急免疫 第一時(shí)間對(duì)出現(xiàn)癥狀(食欲不好)的雛鳥(niǎo)肌注NDV高免血清進(jìn)行治療，雛鳥(niǎo)日齡、體重、NDV高免血清使用劑量詳見(jiàn)表3。對(duì)無(wú)癥狀(食欲正常)的雛鳥(niǎo)隨機(jī)選取2只接種雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株+F株)。在所有雛鳥(niǎo)的飼料中按0.1 g/(只*天)添加諾氟沙星，連用3 d。在NDV高免血清0.5 mL劑量組5 d后出現(xiàn)1例死亡個(gè)體后，該組剩余3只雛鳥(niǎo)再次肌注NDV高免血清1.0 mL。

表3 高免血清治療感染NDV的朱鹮雛鳥(niǎo)情況

肌注NDV高免血清6日后分批次對(duì)無(wú)癥狀朱鹮雛鳥(niǎo)免疫接種雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗，雛鳥(niǎo)日齡、體重、接種劑量詳見(jiàn)表4。

表4 朱鹮雛鳥(niǎo)接種雞NDV、AI二聯(lián)苗情況

在治療過(guò)程中，后續(xù)孵化出2只朱鹮雛鳥(niǎo)在7日齡時(shí)進(jìn)行了免疫接種。

2.3 治療結(jié)果

2.3.1 朱鹮新城疫治療結(jié)果 12只NDV檢測(cè)陽(yáng)性的朱鹮雛鳥(niǎo)，在經(jīng)高免血清治療和緊急免疫接種雞NDV、AI二聯(lián)苗治療過(guò)程中死亡2只，其中1只雛鳥(niǎo)在高免血清治療5 d后死亡，另1只是在免疫后次日死亡，剩余(感染NDV的)10只全部成活，治愈率83.3%。

2.3.2 復(fù)檢 在最后1例朱鹮雛鳥(niǎo)死亡37 d(最后3只雛鳥(niǎo)接種免疫21 d)后，對(duì)人工育雛的16只朱鹮雛鳥(niǎo)，以及在大群中隨機(jī)挑選的5只成鳥(niǎo)，采集了口腔、肛門(mén)拭子，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行NDV病原檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果1只朱鹮雛鳥(niǎo)陽(yáng)性，其余均為陰性。隨后對(duì)該雛鳥(niǎo)再次進(jìn)行NDV免疫。

3個(gè)月后，再次對(duì)16只雛鳥(niǎo)及大群中隨機(jī)挑選的24只朱鹮成鳥(niǎo)，采集口、肛拭子及血液，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行NDV病原檢測(cè)及抗體水平檢測(cè)。除有1只雛鳥(niǎo)NDV病原檢測(cè)為陽(yáng)性外，其余均為陰性。所有雛鳥(niǎo)及在大群中選的24只朱鹮成鳥(niǎo)NDV抗體水平全部合格，合格率均為100%，雛鳥(niǎo)組NDV抗體平均值(log2)6.4，抽檢組NDV抗體平均值(log2)5.2，詳見(jiàn)表5。

表5 NDV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)16只雛鳥(niǎo)再次免疫2個(gè)月后，靜脈采血進(jìn)行NDV病原檢測(cè)全部陰性。

3 討論

此次朱鹮雛鳥(niǎo)感染NDV后，發(fā)病快，死亡率高，典型癥狀個(gè)體少，病死率達(dá)54.54%，因此實(shí)驗(yàn)室診斷盡早確定病原對(duì)控制病情極為關(guān)鍵。2001年范光麗等[8]對(duì)2例幼齡朱鹮感染新城疫死亡病例進(jìn)行了系統(tǒng)的病理學(xué)觀察，結(jié)果表明，朱鹮與禽類(lèi)感染新城疫的病例變化基本一致。2003年，屈紅麗等[9]報(bào)道了幼齡朱鹮感染新城疫后的防治情況；2007年，賈文孝等[10]、張軍風(fēng)等[11]同時(shí)報(bào)道了成年朱鹮新城疫與大腸埃希氏菌混合感染的診治。在未使用高免血清及緊急免疫的情況下，抗病毒及抗菌藥物治療未獲成功。

這次朱鹮雛鳥(niǎo)感染ND成功治愈尚屬首次，治愈率83.3%，可為以后朱鹮等珍稀瀕危鳥(niǎo)類(lèi)防治ND提供參考借鑒經(jīng)驗(yàn)。治療過(guò)程中，由于朱鹮雛鳥(niǎo)生長(zhǎng)發(fā)育十分迅速，不同日齡個(gè)體體重差異較大，因此在用高免血清治療和緊急免疫接種雞NDV、AI二聯(lián)苗治療過(guò)程中，應(yīng)注意根據(jù)體重調(diào)整注射劑量。

在免疫接種后的復(fù)檢過(guò)程中，2次出現(xiàn)個(gè)別陽(yáng)性結(jié)果，且非同一只個(gè)體，提示NDV在感染群體內(nèi)存活時(shí)間可達(dá)數(shù)月之久。因此，治愈群體在合群前一定要做好復(fù)檢工作，防止帶毒個(gè)體將病毒傳播給健康種群。

由于陜西省處于候鳥(niǎo)遷徙的路線之上，因此應(yīng)進(jìn)一步對(duì)朱鹮NDV毒株分析監(jiān)測(cè)，為珍稀鳥(niǎo)類(lèi)防疫工作提供科學(xué)指導(dǎo)。