葉紅兵

(合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，合肥 236000)

阿侖膦酸鈉片主要成分是阿侖膦酸鈉，為氨基二膦酸鹽骨代謝調(diào)節(jié)劑［1–2］。該調(diào)節(jié)劑與骨內(nèi)羥磷灰石有很強(qiáng)的親和力，能進(jìn)入骨基質(zhì)羥磷灰石晶體中。當(dāng)破骨細(xì)胞溶解晶體，藥物被釋放，能抑制破骨細(xì)胞活性，并通過成骨細(xì)胞間接起到抑制骨吸收效應(yīng)，防止骨質(zhì)的丟失［3–5］。準(zhǔn)確測定阿侖膦酸鈉片的含量可以有效控制藥品質(zhì)量，《中國藥典》2015 年版中阿侖膦酸鈉片含量的測定采用離子色譜法［6–7］。利用不確定度評定，可以定量評價(jià)測量結(jié)果的質(zhì)量和可信度。目前離子色譜法測定阿侖膦酸鈉片含量的不確定度評定未見報(bào)道［9–14］。為了提高阿侖膦酸鈉片含量檢測方法的準(zhǔn)確度，筆者對離子色譜法測定阿倫膦酸鈉含量不確定度進(jìn)行評定，依據(jù)《中國藥典》和JJF 1059.1–012 《測量不確定度評定與表示》［15］，分析影響不確定度的因素，并對各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評估，最終給出測量結(jié)果的置信區(qū)間和置信水平。建立適用于離子色譜法測定阿倫膦酸鈉含量不確定度的評定方法，有助于在藥品檢驗(yàn)過程中，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作，從而提高檢驗(yàn)水平，也為測定結(jié)果的科學(xué)評估提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：ICS–1600 型，美國賽默飛世爾科技公司。

超聲波清洗器：S120H 型，德國ELMA 公司。

電子天平：Mettler–Toledo XP205 型，十萬分之一，瑞士梅特勒公司。

超純水儀：Cascada I 型，頗爾（中國）有限公司。

離心機(jī)：Centrifuge5430R 型，德國艾本德公司。

草酸：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

阿侖膦酸鈉對照品：含量為83.0%，編號為100901–201302，中國食品藥品檢定研究院。

阿侖膦酸鈉片：批號為20190401，萬特制藥(海南)有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 對照品溶液的配制

精密稱取2 份阿侖膦酸鈉對照品適量，分別置于2 只25 mL 容量瓶中，加水溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻，過濾，分別為對照品溶液1、對照品溶液2。

1.3 供試品溶液的制備

取20 片阿侖膦酸鈉樣品，精密稱定，研細(xì)，過孔徑為1.8 mm 的篩，精密稱取10 份阿侖膦酸鈉細(xì)粉各20 mg 于10 只50 mL 容量瓶中，加水適量，超聲溶解，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，以3 000 r／min 轉(zhuǎn)速離心3 min，取上清液，過濾，作為供試品溶液。

1.4 色譜條件

保護(hù)柱：Dionex Ion-PacTMAG23 陰離子交換色譜柱(250 mm×4 mm，美國賽默飛世爾科技公司)；檢測器：電導(dǎo)檢測器；檢測方式：非抑制電導(dǎo)檢測；柱溫：30 ℃；流動相：6 mmol／L 的草酸溶液，流量為1.0 mL／min。

1.5 測量值與輸入量的數(shù)學(xué)模型

樣品中阿侖膦酸鈉含量按式(1)、式(2)計(jì)算：

式中：X——樣品中阿侖膦酸鈉的標(biāo)示值，%；

ft——供試品溶液制備時(shí)的稀釋倍數(shù)；

249.08——阿侖膦酸的相對分子質(zhì)量；

271.06——阿侖膦酸鈉的相對分子質(zhì)量；

mt——樣品質(zhì)量，g；

B——標(biāo)示量，mg；

F——對照品溶液響應(yīng)因子；

As——對照品色譜峰面積；

fs——對照品溶液制備時(shí)的稀釋倍數(shù)；

ms——對照品質(zhì)量，g；

P——對照品純度，%。

2 不確定度來源

參考《中國藥典》［1–2］和JJF 1059.1–012 《測量不確定度評定與表示》［3］，根據(jù)1.5 數(shù)學(xué)模型，確定阿侖膦酸鈉含量的不確定度來源：

（1）A 類不確定度。重復(fù)性測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

（2）B 類不確定度。a.天平稱量，包括樣品的稱量和對照品的稱量；b.稀釋定容，包括樣品的稀釋定容和對照品的稀釋定容；c.離子色譜儀引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3 不確定度評定

3.1 重復(fù)性測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

對10 份供試品進(jìn)行測定，數(shù)據(jù)結(jié)果見表1。

表1 10 份供試品測定結(jié)果 %

重復(fù)性測定引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

重復(fù)性測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2 天平稱量引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

天平稱量引入的不確定度主要包括重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差引入的不確定度u1和示值最大誤差引入的不確定度u2。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境相對獨(dú)立，稱量迅速且及時(shí)，環(huán)境溫度、濕度在短時(shí)間內(nèi)變化甚微，對稱量結(jié)果的影響可忽略不計(jì)。

3.2.1 供試品稱樣量（mt）引入的不確定度分量

20 片阿侖膦酸鈉的質(zhì)量為4.379 2 g。計(jì)算得每片平均質(zhì)量為0.219 0 g，標(biāo)示量為70 mg／片，平行稱取10 份樣品，稱量結(jié)果見表2。

表2 平行10 份樣品稱量結(jié)果 mg

天平稱量允許的最大誤差為±0.03 mg，樣品需稱取10 次，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量示值最大誤差引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定：

稱取64.35 mg 供試品的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

64.35 mg 供試品稱樣量引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(mt) = u(mt)／64.35=9.408×10–4。

3.2.2 對照品稱樣量（ms）引入的不確定度分量

平行稱取對照品2 份，測得量分別為10.97、11.52 mg，平均值為11.24 mg。由天平檢定證書提供，天平稱量重復(fù)性的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01 mg ，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量的重復(fù)性引入的不確定度：u1(ms) = 0.005 77 mg。

天平稱量允許的最大誤差為±0.03 mg，對照品稱取2 次，按均勻分布考慮，K= 3，天平稱量的準(zhǔn)確性引入的不確定度：u2(ms)=0.072 08 mg。稱取11.24 mg 對照品的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

稱取11.24 mg 對照品引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(ms) = u(ms)／11.24 = 6.433×10–4。

3.3 定容體積引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

定容至50 mL 容量瓶引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel(Vs50) = 8.166×10–4。

3.4 離子色譜儀測量引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

取對照品溶液1 連續(xù)進(jìn)樣6 次，測得色譜峰面積分別為8.789、8.803、8.823、8.823、8.862、8.862，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.025 7，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.92×10–3，則離子色譜儀測量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u(X2) = 0.025 7／ 6 =10.49×10–3。離子色譜儀測量引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.5 合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

各分量的不確定度來源彼此獨(dú)立不相關(guān)，合成各相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量，采用離子色譜法測定阿侖膦酸鈉片含量的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.6 擴(kuò)展不確定度

在95%置信概率下，k=2，相對擴(kuò)展不確定度：

4 結(jié)語

阿侖膦酸鈉片含量測定的不確定度主要來源于樣品制備的定容體積和天平稱量引入的不確定度。因此，分析人員要熟練掌握測定的各個(gè)操作技術(shù)，嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行測定。