徐艷梅，高燕霞，王茉莉，閆凱，苗會(huì)娟

（河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，石家莊 050000）

依度沙班是一種新型Xa 因子抑制劑［1–2］，具有起效快、抗凝效果好、可逆性強(qiáng)等特點(diǎn)。該藥物不僅可以用于預(yù)防非瓣膜性房顫患者發(fā)生腦卒中和系統(tǒng)性栓塞，還能預(yù)防和治療急性靜脈栓塞患者深靜脈血栓和肺栓塞［3］。隨著依度沙班使用范圍日趨廣泛，其安全性越來(lái)越引人關(guān)注，重金屬含量是體現(xiàn)原料藥安全性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。當(dāng)過(guò)量的重金屬在人體內(nèi)富集，會(huì)對(duì)人體健康造成威脅，因此測(cè)定重金屬的含量對(duì)用藥安全具有重大意義［4–11］。

目前依度沙班原料藥中的重金屬按照《中國(guó)藥典》（2020 年版）重金屬檢查法測(cè)定，通過(guò)與一定濃度的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液比色，以控制重金屬的限度，該法無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定重金屬種類和含量。重金屬的測(cè)定主要有原子吸收光譜（AAS）、原子熒光光譜（AFS）、電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICP–AES）、電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP–MS）、高效液相色譜–電感耦合等離子體質(zhì)譜（HPLC–MS）［12–16］等法。AAS 法和AFS 法選擇性強(qiáng)，光譜干擾小，但均不能進(jìn)行多元素的同時(shí)分析；ICP–AES 法、ICP–MS 法、HPLC–MS法均具有分析速度快、測(cè)定范圍廣、檢出限低、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、可同時(shí)分析多元素等特點(diǎn)。筆者采用ICP–MS 法測(cè)定依度沙班原料藥中36 種金屬元素的含量，以HNO3和H2O2作為消解體系，操作簡(jiǎn)單，加熱快，消解能力強(qiáng)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀：NexION 350X 型，美國(guó)珀金埃爾默公司。

微波消解儀：ETHOS ONE 型，意大利萊伯泰科公司。

電子天平：AE240 型，十萬(wàn)分之一，瑞士梅特勒-托利多公司。

超純水儀：美國(guó)Millipore 公司。

硝酸：色譜純，美國(guó)默克公司。

過(guò)氧化氫：分析純，體積分?jǐn)?shù)為30%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

依度沙班原料藥：批號(hào)分別為161111、161112、161113，石家莊醫(yī)藥科技有限公司。

銠、錸單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：1 000 μg／L，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)分別為GSB 04–1746–2004，GSB 04–1745–2004，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

36 種金屬元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：1 000 μg／L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)見(jiàn)表1，釷元素標(biāo)準(zhǔn)溶液生產(chǎn)公司為核工業(yè)北京化工冶金研究院，其它元素生產(chǎn)公司為國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

表1 36 種金屬元素標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)

1.2 儀器工作條件

射頻功率：1.6 kW；等離子體流量：18 L／min；霧化器流量：0.94 L／min；輔助氣流量：1.2 L／min；模擬電壓：–1 635 V；脈中電壓：800 V。選取同位素分別為7Li、9Be、45Sc、51V、52Cr、55Mn、59Co、60Ni、63Cu、75As、85Rb、88Sr、89Y、107Ag、111Cd、115In、133Cs、138Ba、139La、205Ti、208Pb、209Bi、140Ce、141Pr、142Nd、152Sm、153Eu、158Gd、159Tb、164Dy、165Ho、166Er、169Tm、174Yb、175Lu、232Th，其中質(zhì)量數(shù)不大于140 的元素以103Rh 為內(nèi)標(biāo)，質(zhì)量數(shù)大于140 的元素以187Re 為內(nèi)標(biāo)。

1.3 溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別移取適量36 種金屬元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸制得36 種元素質(zhì)量濃度均為1 000 μg／L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃冰箱中儲(chǔ)藏。

系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用2%硝酸制得36 種元素質(zhì)量濃度均分別為0、20、30、40、50 μg／L 系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

混合內(nèi)標(biāo)溶液：分別移取適量Rh、Re 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸制得Rh、Re 質(zhì)量濃度均為20 μg／L 混合內(nèi)標(biāo)溶液，采用在線內(nèi)標(biāo)加入。

供試品溶液：稱取約0.2 g 依度沙班原料藥于消解罐中，加3 mL 硝酸，放置過(guò)夜，加2 mL 30%過(guò)氧化氫溶液，置于微波消解儀中消解完全，取出，轉(zhuǎn)移至25 mL 具塞比色管中，用水反復(fù)沖洗消解罐并將洗液并入容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，混勻，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

分別比較石墨消解和微波消解兩種前處理方式，石墨消解法采用硝酸–鹽酸消解，稱取樣品0.2 g，置于消解罐中，加6 mL 硝酸、2 mL 鹽酸，消解溫度為180 ℃；微波消解法采用硝酸–過(guò)氧化氫消解，稱取樣品0.2 g 于消解罐中，加硝酸3 mL，放置過(guò)夜，加2 mL 30%過(guò)氧化氫溶液，采用程序升溫，初始溫度為120 ℃，升溫5 min 至160 ℃，保持3 min；再升溫5 min 至180 ℃，保持3 min；再升溫5 min，保持20 min。結(jié)果表明，石墨消解法速度快，時(shí)間短，但易引入Cl–干擾測(cè)定。微波消解法操作簡(jiǎn)單，危險(xiǎn)性小，不易引入其它干擾離子。故選擇微波消解法進(jìn)行樣品前處理。

2.2 質(zhì)譜干擾的消除

為降低樣品和霧化效率等引起的基質(zhì)效應(yīng)和基線漂移，在微波消解同時(shí)做空白，采集時(shí)用扣除空白和在線加入內(nèi)標(biāo)的方法，其中質(zhì)量數(shù)不大于140的元素以103Rh 作為內(nèi)標(biāo)，質(zhì)量數(shù)大于140 的元素以187Re 作為內(nèi)標(biāo)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行校正。

2.3 儀器條件的優(yōu)化

采用1.0 μg／L 的Li、Co、In、U、Be、Ce 混合溶液作為質(zhì)譜調(diào)諧液，調(diào)整儀器各項(xiàng)指標(biāo)，使得信號(hào)值Li ≥50 000 cps，Co ≥100 000 cps，In ≥200 000 cps，U ≥300 000 cps，(138Be++／137Be+) ≤3.0%，(CeO／Ce)≤2.0%。優(yōu)化后儀器工作條件見(jiàn)1.2。

2.4 線性方程與檢出限

在1.2 儀器工作條件下對(duì)系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以各元素質(zhì)量濃度與對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)濃度比值（x）為橫坐標(biāo)，測(cè)量值與內(nèi)標(biāo)信號(hào)強(qiáng)度比值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。采用11 次樣品空白測(cè)定結(jié)果的3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差作為儀器檢出限，36 種元素的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見(jiàn)表2。

表2 線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.5 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn)

分別稱取6 份依度沙班（161111），每份約0.2 g，分別加入0.2、0.375、0.75 mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3方法處理，在1.2 儀器工作條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

續(xù)表3

由表3 可知，36 種金屬元素的樣品加標(biāo)回收率為94.7%～106.0%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07%～1.40%（n=6），說(shuō)明該方法的準(zhǔn)確度和精密度均較高。

3 結(jié)語(yǔ)

采用微波消解法，以HNO3和H2O2為消解液，Rh、Re 為在線內(nèi)標(biāo)，用ICP–MS 法同時(shí)測(cè)定依度沙班原料藥中36 種金屬元素，該方法準(zhǔn)確可靠，可用于依度沙班原料藥的金屬元素檢測(cè)，和后期化學(xué)藥品重金屬檢查法的參考方法。