熊雯 周新娥 李南

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是糖尿病的一種獨(dú)立類型，是指在孕婦妊娠期間發(fā)生或首次發(fā)現(xiàn)的糖耐量異常，屬于妊娠期常見并發(fā)癥[1]。GDM孕婦血糖調(diào)節(jié)能力、血脂代謝功能、心肺功能、免疫功能等發(fā)生異常，嚴(yán)重危害母嬰健康，易導(dǎo)致妊娠結(jié)局不良[2]。目前，GDM發(fā)病機(jī)制研究已取得了較大進(jìn)展，由胰島素抵抗引起的體內(nèi)血糖、血脂異常是GDM的重要病理機(jī)制，但具體過程尚未完全明確[3]。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一種長度為19～24 nt的非編碼單鏈RNA分子，在多種疾病發(fā)生發(fā)展中均發(fā)揮作用。近年來，已有研究發(fā)現(xiàn)多種mRNA參與GDM的生理過程，并影響妊娠結(jié)局[4]。miR-137、miR-351分別與GDM患者血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常及小鼠卵泡發(fā)育有關(guān)[5，6]，但兩者是否對GDM患者妊娠結(jié)局有影響筆者尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究通過檢測GDM患者血清miR-137、miR-351水平，探討兩者對妊娠結(jié)局的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月至2019年8月在本院產(chǎn)檢并分娩的GDM孕婦138例(觀察組)為研究對象，根據(jù)妊娠結(jié)局分為良好組(70例)和不良組(68例)；選取同期健康孕婦140例(對照組)為對照。詢問受試者妊娠生育史、糖尿病家族史，記錄年齡、孕周、孕前體重、身高，計(jì)算孕前體重指數(shù)(body mass index，BMI)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)產(chǎn)科學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會(huì)圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)分會(huì)妊娠合并糖尿病協(xié)作組制訂的《妊娠合并糖尿病診治指南(2014)》[7]，當(dāng)75 g口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oral glucose tolerance test，OGTI)服糖后1 h血糖(plasma glucose，PG)≥10.0 mmol/L或服糖后2 h PG≥8.5 mmol/L或空腹血糖(fasting plasma glucose，F(xiàn)PG)≥5.1 mmol/L時(shí)診斷為GDM；②經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，符合倫理學(xué)相關(guān)規(guī)定；③研究對象及家屬知情，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有嚴(yán)重器官性疾病、精神疾病、感染性疾病、代謝性疾病、免疫系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病或血液系統(tǒng)疾病者；②妊娠前存在糖尿病、脂代謝紊亂者；③患有妊娠期其他并發(fā)癥者；④多胎妊娠者；⑤不服從檢測安排者；⑥臨床資料不全者。

1.3 試劑與儀器 化學(xué)發(fā)光試劑盒(貨號：ZY-11256)購自上海澤葉生物科技有限公司；TRIzol試劑(貨號：GMS12279)購自深圳子科生物科技有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號：AB-4366596)購自上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司；熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR)檢測試劑盒(貨號：KL190)購自上?？道噬锟萍加邢薰?；全自動(dòng)生化分析儀(型號：AU5800)購自美國貝克曼庫爾特有限公司；qRT-PCR儀(型號：ABI 7500)購自美國Applied Biosystems公司；引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.4 血糖、胰島素、血脂水平檢測 清晨抽取受試者空腹外周靜脈血5 ml于采血管中，4℃ 3 500 r/min離心10 min，取上層血清。采用化學(xué)發(fā)光法檢測FPG、空腹血清胰島素(fasting serum insulin，F(xiàn)INS)水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment-insulin resistance，HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。使用全自動(dòng)生化分析儀檢測血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平。

1.5 qRT-PCR法檢測血清miR-137、miR-351水平 使用TRIzol試劑提取血清總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測RNA質(zhì)量，瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA完整性。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，檢驗(yàn)合成cDNA質(zhì)量。采用qRT-PCR法檢測血清miR-137、miR-351水平，U6作為內(nèi)參基因。反應(yīng)條件：94℃ 15 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，循環(huán)40次；72℃延伸8 min。采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-137、miR-351相對表達(dá)量。miR-137上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTTATGGCT-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’；miR-351上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTCCCTGAGGAGCCCTTGG-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAGGCTC-3’；內(nèi)參U6上游引物：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，下游引物：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對照組孕婦臨床資料比較 觀察組、對照組孕婦年齡、孕周、孕前BMI、血清HDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與對照組相比，觀察組孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 觀察組和對照組孕婦血清miR-137、miR-351水平比較 與對照組比較，觀察組孕婦血清miR-137、miR-351水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 觀察組和對照組孕婦臨床資料比較

表2 觀察組和對照組孕婦血清miR-137、miR-351水平比較

2.3 良好組和不良組GDM孕婦胰島素、血糖、血脂水平 良好組、不良組GDM孕婦血清HDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與良好組比較，不良組GDM孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 良好組和不良組GDM孕婦胰島素、血糖水平比較

2.4 良好組、不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351表達(dá)水平 與良好組比較，不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

2.5 GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清miR-137水平與FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(guān)(P<0.05)；血清miR-351水平與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(guān)(P<0.05)，與FPG、HOMA-IR均無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。見表5。

表4 2組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平比較

表5 GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.6 影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的多因素分析 將妊娠結(jié)局作為因變量，以FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C、miR-137、miR-351水平為自變量進(jìn)行COX回歸分析，結(jié)果顯示，F(xiàn)PG、血清TG、miR-137水平為影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表6。

表6 影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的多因素分析

3 討論

研究認(rèn)為，GDM發(fā)病與2型糖尿病發(fā)病基礎(chǔ)類似，可能與患者妊娠期間存在的胰島素抵抗和胰島素分泌功能相對不足有關(guān)，但也有研究認(rèn)為GDM病理特征與肥胖類似，認(rèn)為脂肪代謝異常、糖耐量異常等病理變化與由脂肪細(xì)胞分泌的特定細(xì)胞因子量變化異常有關(guān)[8]。妊娠過程中，因孕期進(jìn)補(bǔ)超過母嬰正常營養(yǎng)需求等原因，體內(nèi)糖脂水平異常，但大部分孕婦可增加胰島素分泌或調(diào)控脂肪細(xì)胞分泌以維持正常糖脂代謝[9，10]。存在胰島素抵抗的孕婦在血糖升高時(shí)，由于胰島素靶器官、靶組織對胰島素敏感性下降，無法增加胰島素分泌或增加胰島素分泌亦無法調(diào)控體內(nèi)糖脂代謝，從而導(dǎo)致GDM發(fā)生[11]。本研究中，觀察組孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平較對照組均顯著升高，不良組GDM孕婦FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平較良好組均顯著升高，表明GDM孕婦體內(nèi)糖脂代謝紊亂，胰島素分泌無障礙，可能是胰島素調(diào)控糖脂代謝的靶器官、靶組織、靶受體缺少對胰島素的敏感性所致。

miRNA可由胎盤分泌，并在母體血液中穩(wěn)定存在，通過調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡、血管再生及糖脂代謝等過程，參與胰島素抵抗、分泌、糖代謝等妊娠期糖尿病發(fā)病機(jī)制及胎盤異常、胎兒血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等妊娠期病理學(xué)改變，并對胎兒生長發(fā)育及GDM患者母嬰健康近遠(yuǎn)期風(fēng)險(xiǎn)造成影響。Poirier等[12]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在GDM患者妊娠過程中發(fā)揮代謝和發(fā)育調(diào)節(jié)劑功能，可能參與其發(fā)病和妊娠結(jié)局等過程。明艷等[4]研究發(fā)現(xiàn)，miR-301a可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體抗炎-促炎失衡影響GDM發(fā)生發(fā)展，可能成為預(yù)測、治療GDM的重要靶點(diǎn)。張婧怡等[13]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-101水平在GDM患者胎盤中異常升高，可能通過EZH2-H3K27me3途徑降低胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、遷移能力，從而參與GDM發(fā)病的病理機(jī)制。彭海燕等[14]在GDM樣本miRNAs差異表達(dá)分析調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，miR-137在GDM患者16-19周外周血、37周胎盤中均呈差異性表達(dá)。張星星等[15]通過靶基因預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miR-351與基因轉(zhuǎn)錄及細(xì)胞代謝水平有關(guān)，且其變化水平較miR-143更明顯。本研究中，觀察組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平較對照組均顯著升高，不良組GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平較良好組均顯著升高，表明miR-137、miR-351可能參與GDM發(fā)生發(fā)展，并與患者預(yù)后有關(guān)，但具體途徑未知。本研究結(jié)果顯示，血清miR-137水平與FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(guān)，血清miR-351水平與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(guān)，表明miR-137與糖脂代謝過程聯(lián)系緊密，miR-351與胰島素分泌、血脂水平關(guān)系密切，兩者均可能參與對糖脂代謝過程的調(diào)控[16,17]。

本研究進(jìn)一步分析影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的因素，結(jié)果顯示，F(xiàn)PG、血清TG、miR-137水平為影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明FPG、血清TG、miR-137水平升高可初步預(yù)測GDM孕婦妊娠結(jié)局不良，需及時(shí)調(diào)整治療措施。

綜上所述，GDM孕婦血清miR-137、miR-351水平顯著升高，與FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均顯著正相關(guān)，其中，血清miR-137水平是影響GDM孕婦妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可為臨床GDM疾病治療提供一定實(shí)驗(yàn)參考。