馮鵬飛, 葉曉婭△, 張 磊
(1.平頂山市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室; 2.平頂山學(xué)院藥學(xué)院,河南 平頂山 467000)
黃芩苷在抗菌、抗炎、清熱解毒等方面具有極其良好的生物活性。在國內(nèi)廣泛用于治療過敏、肝炎等疾病,具有非常重要的臨床意義[1-3]。黃芩苷粉末難溶于水,在體內(nèi)不容易被吸收,因此將黃芩苷原料藥制成分散片[4-5],其在體內(nèi)溶出快,吸收迅速,可達(dá)到較好的生物利用度及更好的臨床治療效果,所以受到廣大患者歡迎。本研究采用正交試驗(yàn)優(yōu)化黃芩苷分散片的重要輔料[6],比較各法的分散均勻性時(shí)間,選出制片方法;找出最佳處方比例,測定其體外溶出度,為臨床上黃芩苷分散片的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),同時(shí)也為優(yōu)化制備工藝提供有價(jià)值的參考,報(bào)道如下。
1.1 儀器 TDP-1.5單沖式壓片機(jī)(長沙市長宏制藥機(jī)械設(shè)備廠),ZRS型智能溶出度試驗(yàn)儀(上海黃海藥檢儀器有限公司),YPD-200C型片劑硬度儀(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司),MA110電子天平(上海鴻都電子科技有限公司),JJG705-2014高效液相色譜儀(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司),SYU-22-600DT超聲波清洗機(jī)(鄭州生元儀器有限公司),BJ-Ⅲ型崩解時(shí)限測定儀(天津市旭陽儀器設(shè)備有限公司)。
1.2 試劑 淀粉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司,批號:20190106),羧甲基淀粉鈉(湖州展望藥業(yè)有限公司,批號:180305),黃芩苷原料藥(湖北百科格萊制藥有限公司,批號:201902023),硬脂酸鎂(山東聊城阿華制藥有限公司,批號:180627),微晶纖維素(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:20181025),黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:110715-201720,含量以93.3%計(jì)),乙腈(常州市玉盟化工有限公司),純化水(實(shí)驗(yàn)室自制)。
2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 分散片處方設(shè)計(jì)出發(fā)點(diǎn)是使片劑遇水后在盡可能短的時(shí)間內(nèi)崩解成很小的顆粒,并形成均勻分散的混懸液。試驗(yàn)設(shè)計(jì)將羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、硬脂酸鎂和淀粉的用量作為變量,將崩解時(shí)限作為觀察指標(biāo)。采用正交試驗(yàn)[7]將該試驗(yàn)設(shè)計(jì)成三水平四因素的正交試驗(yàn)。見表1。
表1 正交試驗(yàn)水平因素分析(%)
2.2 崩解時(shí)限檢查[8]按試驗(yàn)號制備的分散片,分別置100 mL(20±1)℃的水中振搖,記錄時(shí)間。見表2。
表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表
以時(shí)間低者為最佳,由上述正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出,極差D=32.0,極差B=25.7,極差A(yù)=15.0,極差C=14.7,即羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、硬脂酸鎂和淀粉用量對崩解時(shí)限的影響,由大到小依次為淀粉>微晶纖維素>羧甲基淀粉鈉>硬脂酸鎂。淀粉用量對崩解時(shí)限的影響有顯著差異,而硬脂酸鎂潤滑劑對處方影響很小。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果分析得知,最佳的處方應(yīng)該是A1B3C1D1。即羧甲基淀粉鈉用量為5%,微晶纖維素用量為45%,硬脂酸鎂用量為5%,淀粉用量為10 %時(shí)效果最好。
2.3 處方驗(yàn)證試驗(yàn) 取本試驗(yàn)優(yōu)選處方黃芩苷分散片6片,測得其崩解時(shí)間。見表3。
表3 崩解時(shí)間分析
結(jié)果顯示,處方條件按A1B3C1D1崩解速度快,且6片崩解時(shí)間差異小,表明本方案合理且穩(wěn)定可行,故處方最終以A1B3C1D1方案制備。即將主藥與和各輔料研細(xì),過6號篩,按處方稱取主藥和輔料,混合均勻后直接壓片,得黃芩苷分散片,每片含黃芩苷20 mg。
3.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱:Pgrandsil-STC-C18(250.0 mm×4.6 mm, 5 μm);流動(dòng)相:乙腈-水=60∶40;檢測波長:290 nm;流速:1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫:30 ℃。
3.2 對照品溶液制備 精密稱取黃芩苷對照品加入流動(dòng)相超聲溶解,定容后得到濃度為200 mg·L-1的溶液,作為對照品溶液。
3.3 供試品溶液制備 精密稱取黃芩苷原料藥20 mg和適當(dāng)比例的輔料,置于100 mL容量瓶中,加流動(dòng)相適量,超聲使其溶解,放置至室溫,用流動(dòng)相定容至刻度、搖勻、濾過、即得。
3.4 專屬性試驗(yàn) 取“3.2”項(xiàng)中對照品溶液和“3.3”項(xiàng)中供試品溶液適量,按“3.1”項(xiàng)中色譜條件進(jìn)樣測定。見圖1。
圖1 黃芩苷對照品及供試品溶液高效液相色譜法(high perfomance liquid chromatography,HPLC)圖
3.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“3.2”項(xiàng)中對照品溶液0.25、 0.50、1.00、2.00、4.00、 8.00 mL于50.00 mL容量瓶中,用流動(dòng)相定容至刻度,即得濃度為1、 2、 4、 8、 16、 32 mg·L-1的對照組溶液。按“3.1”項(xiàng)中色譜條件,測定峰面積,以峰面積為(y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算,得到黃芩苷的回歸方程:y =79 922x-110 000 (R2=0.997 3)。結(jié)果表明:黃芩苷濃度在1~32 mg·L-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
圖2 對照品線性關(guān)系圖
3.6 精密度試驗(yàn) 按“3.1”項(xiàng)中色譜條件,精密吸取濃度為8 mg·L-1的黃芩苷對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次20 μL,以黃芩苷峰面積計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation, RSD) (n=6)為2.41%,表明該方法精密度良好。
3.7 回收率試驗(yàn)結(jié)果 按照優(yōu)選處方,精密稱取一定量的黃芩苷制備成分散片,再分別精密加入黃芩苷對照品溶液,超聲溶解并定容至100 mL,按“3.1”項(xiàng)中色譜條件測定,計(jì)算回收率,其平均回收率為99.3%,RSD為3.3%。見表5。
表5 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果
打開溶出度測定儀,調(diào)試槳葉,使槳葉最低處距離溶出杯底部25 mm,在測定儀中加入蒸餾水,在溶出杯以及補(bǔ)液杯中加入0.1 mol·L-1鹽酸溶液,然后設(shè)定溫度為(37±1)℃,調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為75 r·min-1,等待機(jī)器加熱到設(shè)定溫度后,將黃芩苷分散片放入溶出杯中,設(shè)定時(shí)間為60 min,分別在5、 10、15、 20、 30、 45、 60 min時(shí)用注射器抽液5 mL,并用注射器及時(shí)向燒杯補(bǔ)同溫介質(zhì)5 mL。抽取液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,按“3.1”項(xiàng)中色譜條件,測定黃芩苷峰面積。見表6、圖3。結(jié)果顯示,最優(yōu)處方A1B3C1D1以0.1 mol·L-1的鹽酸溶液為溶出介質(zhì)進(jìn)行體外溶出度測定,采取HPLC測定黃芩苷含量,該方法分離程度較高、出峰時(shí)間較短、操作方便、靈敏度高,并且避免了此前采取紫外分光光度法測定黃芩苷成分時(shí)受到其他成分的干擾,使結(jié)果更加精確[5]。
表6 黃芩苷溶出度分析
圖3 黃芩苷分散片溶出度圖
在研究正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),先確定試驗(yàn)?zāi)康氖沁x擇黃芩苷分散片的優(yōu)化處方,以制成的黃芩苷分散片崩解時(shí)限為考核標(biāo)準(zhǔn),再定水平,選因素,確定各因素之間是否存在交互作用。在此過程中,本試驗(yàn)是設(shè)計(jì)一系列輔料的種類和比例,直接壓片測定崩解時(shí)限,選取合適的輔料及配比,制定因素水平表。這種方法不僅簡單、快捷,還可以減少主藥消耗,達(dá)到經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的目的。溶出度檢查方法主要包括轉(zhuǎn)籃法、槳法、小杯法等。中藥制劑在介質(zhì)中分散后易形成混懸細(xì)顆粒狀溶液,若采用轉(zhuǎn)籃法,混懸細(xì)顆粒會(huì)堵塞轉(zhuǎn)籃網(wǎng)的篩孔,影響試驗(yàn)結(jié)果。因此本研究采取槳法,使結(jié)果更為精準(zhǔn),避免不必要的誤差。
本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)和HPLC,測試不同比例的微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂等主要輔料制備分散片的崩解時(shí)限和體外溶出度,從而找出最優(yōu)處方,為優(yōu)化制備工藝提供有價(jià)值的參考。