虞 為 ，楊育凱 ，林黑著 ，黃小林 ，黃 忠 ，李 濤 ，周傳朋，馬振華 ，荀鵬偉，楊長平

（1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300； 2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地，廣東 深圳 518121；3. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018）

牛磺酸又名牛膽堿，化學(xué)名為β-氨基乙磺酸，是一種廣泛分布于動(dòng)物機(jī)體各組織和器官中的小分子β-含硫氨基酸[1]。研究發(fā)現(xiàn)，?；撬峋哂刑岣邉?dòng)物生長和繁殖能力、調(diào)節(jié)機(jī)體滲透壓、增強(qiáng)維持生物膜穩(wěn)定性、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)代謝、提升免疫能力和抗氧化能力等生物學(xué)功能[2-3]。近年來，牛磺酸對水產(chǎn)動(dòng)物的營養(yǎng)生理功能及其在飼料中的應(yīng)用得到廣泛關(guān)注。研究表明，飼料中添加?；撬峥梢燥@著提升異育銀鯽 (Carassius auratus gibelio)[4]、黃河鯉 (Cyprinus carpio)[5]、黃鰭鯛 (Acanthopagrus latus)[6]和斜帶石斑魚 (Epinephelus coioides)[7]的生長性能，提高虹鱒 (Oncorhynchus mykiss)[8]、暗紋東方鲀 (Takifugu obscurus)[9]和鯰 (Clarias gariepinus)[10]的免疫力和抗氧化能力，增強(qiáng)花鰻鱺(Anguilla marmorata)[11]、草魚 (Ctenopharyngodon idella)[12]和軍曹魚 (Rachycentron canadum)[13]的消化酶活性，改善麥穗魚 (Pseudorasbora parva)[14]和鯽[15]的耐缺氧能力。此外，?；撬徇€是一種重要的誘食劑，可以提高虹鱒[16]、鯽[4]和大菱鲆 (Scophthalmus maximus)[17]的攝食率。

花鱸 (Lateolabrax maculatus) 又名七星鱸，屬廣鹽性魚類，具有肉質(zhì)鮮美、生長快速和價(jià)格適中等優(yōu)點(diǎn)，是中國沿海地區(qū)的重要養(yǎng)殖魚類之一[18]。2019 年，全國花鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量約18 萬噸，養(yǎng)殖區(qū)域主要集中在廣東和福建兩省[19]。目前，國內(nèi)外尚未見有關(guān)飼料?；撬崴脚c花鱸生長性能、飼料利用和免疫關(guān)系的研究報(bào)道。為此，本試驗(yàn)研究了飼料?；撬崴綄|生長性能、體成分、消化酶、免疫指標(biāo)和抗氧化能力的影響，旨在確定花鱸對飼料中?；撬岬淖钸m需求量，為其配合飼料配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

基礎(chǔ)飼料以魚粉和大豆?jié)饪s蛋白為主要蛋白源，以魚油為主要脂肪源。對照組不添加?；撬?N0)，試驗(yàn)飼料中分別添加0.4% (N1)、0.8%(N2)、1.2% (N3)、1.6% (N4) 的?；撬?(純度為99%，購自西安裕華生物科技有限公司)。試驗(yàn)飼料配方及營養(yǎng)組成見表1。原料粉碎后，過60 目篩，按照飼料配方稱量、混合后，制成直徑為2.5 和3.0 mm的顆粒飼料，60 ℃ 烘干，冷卻后裝入密封袋，于 ?20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平 (干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet (Dray mass basis) %

1.2 試驗(yàn)用魚與飼養(yǎng)管理

花鱸購自深圳市深海農(nóng)場海洋發(fā)展有限公司，購回后暫養(yǎng)于中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地車間水泥池，每天用基礎(chǔ)飼料飽食投喂2次，馴化14 d。試驗(yàn)開始前，停止投料24 h，隨機(jī)挑選規(guī)格相近、體格健壯、平均體質(zhì)量(7.2±0.07) g的花鱸450尾，隨機(jī)分配至15 個(gè)水族箱中 (1 m×1 m×1.5 m)，分別投喂相應(yīng)的試驗(yàn)飼料。每天7:00和17:00飽食投喂2次，投喂0.5 h后收集剩余飼料，將飼料烘干、稱質(zhì)量，并記錄飼料投喂量、死魚的數(shù)量和質(zhì)量。養(yǎng)殖期間水溫26～30 ℃，鹽度 20～25，pH 7.5～8.0，溶解氧質(zhì)量濃度大于 5.0 mg·L?1，氨氮質(zhì)量濃度低于 0.1 mg·L?1，整個(gè)試驗(yàn)在自然光照條件下進(jìn)行。試驗(yàn)周期為56 d。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，稱每個(gè)水族箱中魚的總質(zhì)量并記錄存活數(shù)量。從每箱中隨機(jī)取3尾魚用于全魚營養(yǎng)成分分析，?20 ℃ 保存待測；每箱隨機(jī)取3尾魚測其體長、體質(zhì)量以及肝臟質(zhì)量，用于計(jì)算形體指標(biāo)；然后每箱隨機(jī)取4 尾魚用2.5 mL的注射器 (經(jīng)1%的肝素鈉潤洗) 尾靜脈取血，離心(3 000 r·min?1, 4 ℃) 10 min 后，收集上清液并分裝于0.5 mL的離心管中，?80 ℃保存?zhèn)溆?。采血后，采集肝臟裝于2 mL離心管中，?80 ℃保存?zhèn)溆?；?.86% 冷凍生理鹽水沖洗腸道內(nèi)容物，用濾紙吸干水分后于?80 ℃保存，用于消化酶活性測定。

1.4 測定方法

1.4.1 生長指標(biāo)測定 根據(jù)以下公式計(jì)算增重率(WGR, %)、特定生長率 (SGR, %·d?1)、成活率(SR, %)、飼料系數(shù) (FCR)、攝食率 (FR, %)、肝體比 (HIS, %) 和肥滿度 (CF, g·cm?3)。

式中Wt為魚終末總質(zhì)量，W0為魚初始總質(zhì)量，WFB為魚終末均質(zhì)量，WIB為魚初始均質(zhì)量，t為試驗(yàn)時(shí)間，Nt為終末魚數(shù)，N0為初始魚數(shù)，C為攝食量，Wg為肝臟質(zhì)量，Wf為魚體質(zhì)量，Lf為魚體長。

1.4.2 飼料?；撬釡y定 用常規(guī)酸水解法獲得飼料中的牛磺酸后，采用氨基酸自動(dòng)分析儀 (德國賽卡姆Sykam公司) 進(jìn)行測定。

1.4.3 飼料和全魚基本成分測定 分別采用105 ℃烘箱干燥法 (GB/T 6435—2006)、索氏抽提法(GB/T 6433—2006)、凱氏定氮法 (GB/T 6432—2006) 和550 ℃馬弗爐灼燒法 (GB/T 6438—2007)測定飼料和全魚中的水分、粗脂肪、粗蛋白和粗灰分的含量。

1.4.4 腸道相關(guān)酶活指標(biāo)測定 取0.5 g腸道組織，在預(yù)冷的0.86% 生理鹽水中剪碎，在勻漿機(jī)中冰浴勻漿 (7 000 r·min?1，10 s·次?1，連續(xù) 3 次)，然后冷凍離心，取上清液用于酶活測定。采用南京建成試劑盒測定蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性，測定方法步驟詳見說明書。

1.4.5 血液生理指標(biāo)和免疫指標(biāo)測定 采用邁瑞B(yǎng)C-5300Vet 全自動(dòng)五分類動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀測定血液的白細(xì)胞數(shù) (WBC)、紅細(xì)胞數(shù) (RBC)、血紅蛋白濃度 (Hb) 和紅細(xì)胞積壓 (Ht)。血清中溶菌酶(LZM) 活性及補(bǔ)體4 (C4)、免疫球蛋白M (IgM) 濃度均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測定。

1.4.6 抗氧化酶活性測定 肝臟中總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH-Px) 活性及丙二醛 (MDA) 濃度測定的試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，具體方法詳見試劑盒說明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2016進(jìn)行處理，通過SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所得數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差 (X±SD)”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長性能

?；撬崽砑咏M花鱸的增重率和特定生長率均大于對照組，其中N2、N3和N4組均顯著高于對照組 (P＜0.05)，N2、N3和N4組間差異不顯著(P＞0.05)，當(dāng)?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸的增重率和特定生長率均呈下降趨勢 (表2)。N2、N3和N4組飼料系數(shù)均顯著小于對照組 (P＜0.05)，牛磺酸添加組攝食率顯著大于對照組 (P＜0.05)。各組花鱸成活率、肝體比和肥滿度的差異均不顯著 (P＞0.05)。以?；撬釣樽宰兞?(x)、花鱸增重率為因變量 (y)，對二者進(jìn)行線性回歸分析，得出花鱸飼料中?；撬岬淖钸m添加量為0.85% (圖1)。

圖1 花鱸增重率與飼料中牛磺酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的關(guān)系Figure 1 Relationship between weight gain rate of L. maculatus and mass fraction of dietary taurine

表2 飼料中添加?；撬釋|生長性能的影響Table 2 Effects of dietary taurine on growth performance of L. maculatus

2.2 全魚體成分

?；撬崽砑咏M全魚的粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于對照組 (P＜0.05)，其中N2組最大；?；撬崽砑咏M全魚的粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于對照組 (P＜0.05)，其中N2組最小。各組全魚的水分和粗灰分差異不顯著 (P＞0.05，表3)。

表3 飼料中添加牛磺酸對花鱸全魚營養(yǎng)成分的影響Table 3 Effects of dietary taurine on whole body proximate composition of L. maculatus %

2.3 腸道消化酶活性

花鱸腸道蛋白酶和脂肪酶活性隨著?；撬崽砑铀降脑黾佣龃?，牛磺酸添加組蛋白酶和脂肪酶活性顯著高于對照組 (P＜0.05)。各組腸道淀粉酶活性差異不顯著 (P＞0.05，表4)。

表4 飼料中添加?；撬釋|腸道消化酶活性的影響Table 4 Effects of dietary taurine on intestinal digestive enzyme activity of L. maculatus

2.4 肝臟抗氧化能力

牛磺酸添加組花鱸肝臟的T-AOC、SOD、GSHPx和CAT活性顯著高于對照組 (P＜0.05)，當(dāng)?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸肝臟的T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT活性均呈下降趨勢。?；撬崽砑咏M花鱸肝臟的MDA濃度顯著低于對照組 (P＜0.05)，當(dāng)?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸肝臟的MDA濃度呈上升趨勢 (表5)。

表5 飼料中添加?；撬釋|肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary taurine on hepatic T-AOC, SOD, CAT, GSH-Px activities and MDA contents of L. maculatus

2.5 血液生理指標(biāo)

牛磺酸添加組花鱸的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白質(zhì)量濃度顯著高于對照組 (P＜0.05)。對照組和?；撬崽砑咏M的紅細(xì)胞積壓水平差異不顯著 (P＞0.05，表 6)。

表6 飼料中添加?；撬釋|血液生理指標(biāo)的影響Table 6 Effects of dietary taurine on blood physiological parameters of L. maculatus

2.6 血清免疫指標(biāo)

?；撬崽砑咏M花鱸的LZM活性、IgM和C4質(zhì)量濃度顯著高于對照組 (P＜0.05)，各添加組間LZM活性、IgM和C4質(zhì)量濃度差異不顯著 (P＞0.05，表 7)。

表7 飼料中添加?；撬釋|血清免疫指標(biāo)的影響Table 7 Effects of dietary taurine on serum immune indexes of L. maculatus

3 討論

3.1 ?；撬釋|生長性能的影響

本試驗(yàn)表明，在飼料中添加適量?；撬崮軌蝻@著促進(jìn)花鱸生長。隨著飼料中?；撬崽砑恿康脑黾?，試驗(yàn)魚增重率和特定生長率呈先升高后降低的趨勢，當(dāng)飼料中?；撬崽砑恿吭鲋?.8%時(shí)，花鱸增重率和特定生長率最大；之后當(dāng)飼料中?；撬崽砑恿坷^續(xù)增加，花鱸增重率和特定生長率下降。這與?；撬釋π睅唪~[7]、黃鰭鯛[6]、真鯛 (Pagrus major)[20]和尼羅羅非魚 (Oreochromis niloticus)[21]生長性能的研究結(jié)果相似。?；撬釋λa(chǎn)動(dòng)物生長性能的影響主要體現(xiàn)在提高消化酶活性和攝食率等方面[22-23]。本試驗(yàn)中，?；撬崽砑咏M魚的蛋白酶和脂肪酶活性及攝食率均顯著高于對照組，這與試驗(yàn)魚的生長性能變化趨勢一致，其原因可能是?；撬嵬ㄟ^提高花鱸的蛋白酶和脂肪酶活性及攝食率來促進(jìn)生長。與本研究結(jié)果相似，?；撬峥梢燥@著提高花鰻鱺[11]和黃河鯉[5]腸道蛋白酶和脂肪酶活性，但對腸道淀粉酶活性的影響不大。本試驗(yàn)中，當(dāng)?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸的攝食率和增重率均呈下降趨勢，表明過量添加?；撬嵩谝欢ǔ潭壬蠒?huì)抑制其攝食和生長，這與?；撬釋琪V[16]、羅非魚[21]和大菱鲆[17]的研究結(jié)果相吻合。當(dāng)飼料牛磺酸含量過高時(shí)，魚類為了維持體內(nèi)適宜的?；撬崴叫枧懦鲞^多的?；撬幔瑢?dǎo)致機(jī)體耗能增加，從而使生長性能下降[7]；由于?；撬岢饰⑺嵝?，過量添加牛磺酸可能導(dǎo)致飼料酸性偏高，影響了試驗(yàn)魚對飼料的適口性[24]。以增重率為目標(biāo)，經(jīng)線性回歸分析，花鱸飼料中牛磺酸的最適添加量為0.85%。這一結(jié)果高于羅非魚 (0.75%)[21]和草魚 (0.6%)[12]對?；撬岬男枨罅浚陀谛睅唪~ (1.04%)[7]、花鰻鱺 (1.31%)[11]和黃鰭鯛 (1.07%)[6]。說明不同魚類對?；撬嵝枰坎煌@可能是因?yàn)椴煌~類自身合成?；撬岬哪芰Σ煌?/p>

3.2 ?；撬釋|全魚體成分的影響

飼料中添加牛磺酸可影響?zhàn)B殖魚類的體成分[25]。本試驗(yàn)中，飼料中添加?；撬峥梢燥@著提高花鱸的粗蛋白質(zhì)含量，并顯著降低粗脂肪含量。本試驗(yàn)結(jié)果與有關(guān)大西洋鮭 (Salmo salar)[26]、異育銀鯽[4]和斜帶石斑魚[7]的研究結(jié)果一致。飼料中添加?；撬崽岣吡嘶|的粗蛋白質(zhì)含量，其原因可能是添加?；撬峥梢詼p少體內(nèi)?；撬岬暮铣桑沟玫鞍彼岷碗装彼岬群虬被峥梢愿嗟貐⑴c到蛋白質(zhì)合成代謝中，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)沉積[8]；?；撬崮軌蛲ㄟ^刺激機(jī)體分泌甲狀腺激素促進(jìn)魚體生長激素的合成，最終有利于魚體蛋白質(zhì)合成[27]。飼料中添加牛磺酸降低了花鱸的粗脂肪含量，其原因可能是?；撬岵粌H能夠參與膽汁酸的合成，而膽汁酸可促進(jìn)脂肪代謝，還能夠提高膽固醇7α-羧化酶的活性，從而產(chǎn)生降脂效應(yīng)[28-29]。

3.3 牛磺酸對花鱸肝臟抗氧化能力的影響

魚類總抗氧化能力反映了抗氧化酶和非酶抗氧化物的水平，其強(qiáng)弱直接影響魚體的抗應(yīng)激能力，關(guān)系著魚體的正常生長與健康水平[30]。活性氧的過度生成會(huì)對機(jī)體蛋白質(zhì)、核酸和生物膜等重要生物大分子造成損傷，使其生理功能的發(fā)揮受阻[31]。正常狀態(tài)下，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)具有清除活性氧的能力，SOD、GSH-Px和CAT在活性氧清除過程中起關(guān)鍵作用[32]。其中SOD能夠催化超氧陰離子自由基生成過氧化氫 (H2O2)，從而清除超氧陰離子自由基，而CAT和GSH-Px可以催化H2O2生成水和氧氣[33]。MDA是自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，會(huì)造成細(xì)胞和組織的損傷，其濃度可以反映機(jī)體活性氧自由基的水平[34]。本研究飼料中添加?；撬崮茱@著提高花鱸肝臟的T-AOC，其肝臟SOD、GSH-Px和CAT活性也顯著提高，MDA濃度顯著降低。Dehghani等[6]的研究結(jié)果顯示，添加1.25%?；撬岬娘暳峡梢燥@著提高黃鰭鯛肝臟T-AOC和抗氧化酶活性，同時(shí)顯著降低其肝臟的MDA濃度；徐璐茜等[35]報(bào)道，飼料中添加適量的?；撬峥梢燥@著提高草魚肝臟SOD、GSH-Px和CAT活性，顯著降低MDA濃度，本研究結(jié)果與上述研究結(jié)論相似。?；撬峥汕宄龣C(jī)體自由基，或通過增強(qiáng)抗氧化酶活性發(fā)揮其抗氧化功能[36]。此外，牛磺酸不僅是GSH-Px的前體，還可以促進(jìn)谷胱甘肽二硫化物生成GSH-Px[37-38]。本研究中?；撬崽砑恿砍^0.8% 時(shí)，花鱸肝臟T-AOC和抗氧化酶活性呈下降趨勢，MDA濃度呈上升趨勢，與?；撬釋t鰭東方鲀[39]和虎紋蛙[40]的影響結(jié)果一致。這可能是由于添加過量的?；撬釋?dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)抗氧化抑制作用。

3.4 ?；撬釋|血液生理指標(biāo)的影響

魚體血液生理指標(biāo)是評價(jià)其健康水平和營養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)[33]。研究表明，飼料中缺乏?；撬釙?huì)導(dǎo)致花鱸的血液學(xué)指標(biāo)異常[35]。本研究中添加?；撬峤M魚的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白水平均顯著高于對照組。與本研究結(jié)果相似，Li等[41]研究發(fā)現(xiàn)用未添加牛磺酸的飼料投喂黃顙魚 (Pelteobagrus fulvidraco) 后，黃顙魚的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白水平顯著降低；Takagi等[42]研究證明缺乏?；撬釙?huì)導(dǎo)致五條(Seriola quinqueradiata) 的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白水平顯著降低。本研究中添加?；撬峤M魚的紅細(xì)胞水平升高，是因?yàn)榕；撬峥梢云胶饧t細(xì)胞滲透壓和維持紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性[43]；對照組的白細(xì)胞水平降低，可能是由于?；撬崛狈?dǎo)致白細(xì)胞沉降特性發(fā)生變化，進(jìn)而導(dǎo)致白細(xì)胞數(shù)量減少[2]；對照組血紅蛋白水平顯著降低，其原因可能是牛磺酸缺乏引起魚體紅細(xì)胞滲透脆性增加，導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂，逸出血紅蛋白[44]。

3.5 ?；撬釋|血清免疫指標(biāo)的影響

研究表明，牛磺酸可以增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫力[8-9]。LZM具有溶菌效應(yīng)，是魚體防御細(xì)菌性病原體的重要酶，其活性是衡量魚體免疫力的重要指標(biāo)[45]。C4是魚類體內(nèi)具有酶原活性的球蛋白，具有破壞或清除病原微生物的功能[46]。IgM在魚體免疫應(yīng)激中發(fā)揮重要作用，是魚類免疫應(yīng)答的生物標(biāo)記物[47]。本研究中，與對照組相比，?；撬崽砑咏M魚的LZM活性、C4和IgM水平均顯著提高，表明牛磺酸可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。Zhang等[48]和石勇等[49]的研究均獲得了類似結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)?；撬峥梢栽鰪?qiáng)氨氮脅迫后黃顙魚和高密度脅迫后青魚 (Mylopharyngodon piceus) 的LZM活性和IgM水平。本研究中牛磺酸添加組花鱸的IgM水平顯著提高，其原因可能是?；撬崮軌虼龠M(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和抗體分泌[50]。而有關(guān)?；撬釋︳~體LZM活性和補(bǔ)體水平的影響機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

飼料中添加?；撬崮茱@著提升花鱸的生長性能，增強(qiáng)其腸道蛋白酶和脂肪酶活性，并且可以提高其抗氧化能力和免疫能力。線性回歸分析結(jié)果表明，以增重率為目標(biāo)，花鱸對牛磺酸的最適需求量為0.85%。