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        槲皮素對痛風模型大鼠血清NETs和淋巴細胞水平的影響*

        2021-04-28 01:39:14白麗杰
        國際檢驗醫(yī)學雜志 2021年8期
        關(guān)鍵詞:槲皮素痛風淋巴細胞

        鐵 寧,李 剛,白麗杰,王 靜,趙 靜,王 勇△

        1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院風濕免疫科,內(nèi)蒙古呼和浩特 010059;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學藥學院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010059

        痛風是一種常見的關(guān)節(jié)炎,男性發(fā)病率高于女性,且各年齡段均可能出現(xiàn)痛風[1]。痛風常在夜間發(fā)作,受累關(guān)節(jié)疼痛進行性加劇,呈撕裂樣、刀割樣或咬噬樣,難以忍受。關(guān)節(jié)可表現(xiàn)為紅腫灼熱、皮膚緊繃、觸痛明顯、功能受限,疼痛感持續(xù)幾天至幾周不等,緩慢減輕至消失[2]。發(fā)病關(guān)節(jié)會導致活動及功能受限,影響日常生活,因此,對痛風的發(fā)生、發(fā)展機制進行深入研究,并探討藥物治療的臨床療效和藥理作用機制,具有十分重要的意義[3]。有研究指出,在痛風急性發(fā)作期患者關(guān)節(jié)腔內(nèi)多出現(xiàn)單鈉尿酸鹽晶體沉積,誘導多形核中性粒細胞聚集,且當炎癥反應加重后,產(chǎn)生大量活性氧,誘導中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)形成,降解趨化因子及細胞因子,抑制炎癥反應,有助于急性痛風性關(guān)節(jié)炎的恢復[4-5]。槲皮素又名櫟精,在槐樹、蘋果、茶樹、銀杏、西紅柿、丹皮等植物中廣泛存在,具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌、祛痰止咳、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護及抗血栓等藥理作用[6-7]。近年來,有關(guān)槲皮素對血清NETs和淋巴細胞水平影響的報道較少。因此,本研究擬構(gòu)建痛風動物模型,分析槲皮素對痛風動物模型血清NETs和淋巴細胞水平的影響。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 本研究所使用的30只6周齡Wistar雄性大鼠均購自南京青龍山實驗動物繁育場,體質(zhì)量180~210 g,平均(190.32±13.29)g。常規(guī)適應性飼養(yǎng)1周,5只1籠,分籠飼養(yǎng),維持室溫22~26 ℃,濕度55%~65%,正常晝夜循環(huán),維持12 h光照,大鼠灌胃、換水、添加飼料等均由專人進行。

        1.2方法 將所有大鼠依照體質(zhì)量編號,并采用隨機數(shù)表法分為3組,即對照組、模型組、槲皮素組,每組10只。模型組和槲皮素組進行造模,取仰臥位在解剖板上固定,右后肢小腿踝關(guān)節(jié)進行常規(guī)消毒,選取踝關(guān)節(jié)外側(cè)作為6號注射針穿刺點,針口和脛骨為45°夾角傾向上刺入踝關(guān)節(jié)腔內(nèi),注射250 mg/mL尿酸鈉溶液0.2 mL,踝關(guān)節(jié)對側(cè)鼓起則注射成功。對照組注入等體積的生理鹽水。造模成功后槲皮素組大鼠每天早上9:00給予200 mg/kg的槲皮素灌胃,持續(xù)給藥1周,對照組及模型組同期灌胃等體積的蒸餾水。

        1.3觀察指標 給藥前和第7天給藥后依照炎癥指數(shù)評定準則[8]和Goderre功能障礙指數(shù)[9]對大鼠急性炎癥狀況進行評估,使用足容積測量儀檢測足趾腫脹度,炎癥指數(shù)分級如下:0級,正常;1級,左后足皮膚有紅斑、關(guān)節(jié)稍微腫脹;2級:左后足顯著紅腫,關(guān)節(jié)部位骨性標志消失;3級:左后足關(guān)節(jié)肢體發(fā)生腫脹。Goderre功能障礙指數(shù)分級如下:0級,步態(tài)正常,四足著地均勻;1級,輕微跛行,左后足足趾未展開,著地減輕;2級,跛行顯著,左后足趾背著地、屈起;3級:三足步態(tài),左后足完全離地。給藥第1天和第6天眼底取血,離心收集血清,使用全自動生化分析儀分析血清中淋巴細胞水平,后取100 μL血清加入100 μL PicoGreen熒光染料,避光孵育300 s,使用熒光染色法檢測血清中游離DNA/中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)(cf-DNA/NETs)水平,采用熒光酶標儀檢測熒光值,后繪制標準曲線計算cf-DNA/NETs水平。

        2 結(jié) 果

        2.1模型組、槲皮素組大鼠功能障礙指數(shù)、炎癥指數(shù)和足趾腫脹度的比較 本研究結(jié)果顯示,采用槲皮素干預前模型組和槲皮素組大鼠功能障礙指數(shù)、炎癥指數(shù)和足趾腫脹度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);給藥后,槲皮素組大鼠功能障礙指數(shù)、炎癥指數(shù)和足趾腫脹度均明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

        表1 模型組和槲皮素組大鼠功能障礙指數(shù)、炎癥指數(shù)和足趾腫脹度的比較

        2.23組大鼠血清中淋巴細胞水平的比較 本研究結(jié)果顯示,給藥前,槲皮素組和模型組大鼠血清中淋巴細胞水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但模型組和槲皮素組大鼠血清中淋巴細胞水平均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);進一步分析發(fā)現(xiàn),給藥后3組大鼠血清中淋巴細胞水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其中模型組最高,對照組最低,且兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

        表2 3組大鼠血清中淋巴細胞水平檢測結(jié)果比較

        2.33組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平的比較 本研究結(jié)果顯示,給藥前,槲皮素組和模型組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但模型組和槲皮素組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);進一步分析發(fā)現(xiàn),給藥后3組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其中模型組最高,對照組最低,且兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

        表3 3組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平的比較

        3 討 論

        槲皮素分布廣泛,屬于黃酮醇類化合物,具有多種生物活性。有研究指出,槲皮素具有對抗自由基作用,可捕獲自由基預防脂質(zhì)過氧化反應,抑制腫瘤,并還具有較強的抗炎、抗菌、預防糖尿病、抗過敏等較強的生物活性[10]。此外,槲皮素還具有輔助治療高血壓及冠心病的作用,且槲皮素毒性低,具有較大研究價值。有學者指出,采用槲皮素對痛風性關(guān)節(jié)炎模型大鼠進行干預后,具有顯著的抗氧化、抗炎活性,但其作用機制尚不清楚[11]。有研究指出,將尿酸鈉晶體注入大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)可用于建立急性痛風性關(guān)節(jié)炎病變模型,其臨床表現(xiàn)與病理表現(xiàn)相似[12]。采用該方案造模后關(guān)節(jié)腔內(nèi)出現(xiàn)中性粒細胞,在滑膜和關(guān)節(jié)積液中,細胞吞噬尿酸單鈉結(jié)晶,擴大炎性反應和釋放趨化介質(zhì),同時關(guān)節(jié)滑膜肥厚和增生,關(guān)節(jié)液量增加。該造模方案快速、操作簡單、成功率高,被視為經(jīng)典的急性痛風性關(guān)節(jié)炎造模方法,因此,本研究采用該方案進行造模。

        痛風為慢性且復雜的炎癥反應,與機體免疫系統(tǒng)密切相關(guān),其中天然免疫和適應性免疫在機體持續(xù)炎癥階段起到十分重要的主導作用。有研究指出,痛風發(fā)病初期,天然免疫激活單核細胞進入炎癥組織,將尿酸鈉晶體吞噬,促進淋巴細胞聚集,合成并分泌大量白細胞介素(IL)-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α等炎癥因子[13]。本研究結(jié)果顯示,槲皮素干預7 d后,槲皮素組大鼠功能障礙、炎癥指數(shù)和足趾腫脹度均明顯低于模型組,且槲皮素組大鼠體內(nèi)淋巴細胞水平顯著降低。說明槲皮素能夠顯著減輕痛風模型大鼠的關(guān)節(jié)腔內(nèi)炎性反應,減少關(guān)節(jié)液容積。

        人體天然免疫系統(tǒng)中的中性粒細胞是重要的效應細胞,在早期免疫應答階段起到十分重要的作用。有學者研究發(fā)現(xiàn),中性粒細胞活化后會釋放由組蛋白和DNA構(gòu)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)被稱為NETs[14]。此外,NETs為球狀顆粒串并相互纏繞形成網(wǎng)狀陷阱樣結(jié)構(gòu),可限制多種病原微生物擴散,捕獲病原微生物,是中性粒細胞殺菌的新途徑。但過量NETs可誘導凝血功能障礙、內(nèi)皮細胞損傷、炎癥反應,對機體產(chǎn)生有害作用。本研究結(jié)果顯示,模型組和槲皮素組大鼠血清中cf-DNA/NETs水平均明顯高于對照組,給藥后槲皮素組大鼠血清中cf-DNA/NETs明顯降低,且槲皮素組大鼠血清中cf-DNA/NETs低于模型組。說明采用槲皮素對痛風模型大鼠干預后可有效降低血中cf-DNA/NETs水平,進而有效下調(diào)體內(nèi)炎癥反應程度[15]。

        綜上所述,槲皮素干預痛風模型大鼠后可有效降低血清NETs和淋巴細胞水平。但本研究并未對基因水平的改變進行分析,有待進一步探討。

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