陳志軍，曹克鑫，甘紹印，閆二帥，王忠民

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科一病區(qū)，河南 衛(wèi)輝 453100)

食管癌是世界上常見的消化道惡性腫瘤之一，在我國具有較高的發(fā)病率和致死率[1]。食管癌患者早期可無明顯癥狀，中晚期臨床癥狀以進行性吞咽困難為主。目前，手術(shù)治療仍是治療食管癌的主要手段，對于早期食管癌患者具有較好的療效；但對于Ⅱ、Ⅲ期食管癌患者常規(guī)手術(shù)治療不能完全切除病灶，因此治療效果欠佳，通常還需要接受新輔助化療以改善預(yù)后[2]。新輔助化療又稱術(shù)前化學(xué)治療，即在手術(shù)或者放射治療前對患者進行全身性化學(xué)治療，以期縮小腫瘤體積，控制病灶，降低病理分期，使難以直接通過手術(shù)切除的病灶轉(zhuǎn)化為可切除病灶，降低手術(shù)難度，提高手術(shù)切除率[3]。在臨床中，順鉑和氟尿嘧啶新輔助化療聯(lián)合手術(shù)治療雖然能夠提高食管癌患者生存率，但卻可能誘發(fā)不良反應(yīng)，患者耐受性差[4]，且對晚期食管癌患者療效不佳，因此，需要尋找更有效的化學(xué)治療方案。胸腺肽α1作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑可重塑體內(nèi)免疫環(huán)境，誘導(dǎo)機體免疫反應(yīng)，為手術(shù)創(chuàng)造條件[4]。微RNA(microRNA,miRNA)是一類長約22個核苷酸的非編碼RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達。有研究報道，當(dāng)血清中miR-451和miR-21水平過高時會誘導(dǎo)腫瘤進展，因此，其有可能作為驗證新輔助化療效果的標志物[5-6]。探究如何增強食管癌患者的免疫功能、提高耐受性是治療食管癌領(lǐng)域的熱點內(nèi)容。本研究旨在探討胸腺肽α1聯(lián)合順鉑和氟尿嘧啶新輔助化療方案對食管癌患者的臨床效果，以期為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2017年9月至2019年12月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的124例食管癌患者為研究對象。納入標準：(1)經(jīng)病理學(xué)檢查確診為食管癌；(2)凝血功能正常；(3)心、肺功能正常；(4)無發(fā)聲異常癥狀；(5)需行胸腹腔鏡下食管癌根治術(shù)。排除標準：(1)無糖尿病、冠狀動脈性心臟病及高血壓等慢性疾??；(2)術(shù)前存在突發(fā)異常情況，影響治療方案實施；(3)手術(shù)過程中發(fā)現(xiàn)患者腫瘤與臟器存在臨近甚至粘連情況，無法進行預(yù)期手術(shù)；(4)患者病情嚴重偏離預(yù)期。根據(jù)治療方案不同將患者分為對照組和觀察組，每組62例。2組患者一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，結(jié)果見表1。

表1 2組食管癌患者一般資料比較

1.2 治療方法所有患者術(shù)前給予順鉑(云南植物有限公司，國藥準字H53021741)和氟尿嘧啶(天津金耀藥業(yè)有限公司，國藥準字H12020959)新輔助化療，治療第1天靜脈滴注順鉑80 mg·m-2，第1～5天靜脈滴注氟尿嘧啶750 mg·m-2，3周為1個化學(xué)治療周期，持續(xù)化學(xué)治療2個周期。觀察組患者于新輔助化療開始前3 d至新輔助化療結(jié)束給予胸腺肽α1(成都地奧九泓制藥廠，國藥準字H20020545)1.6 mg，皮下注射，每日1次。依據(jù)患者身體狀況，2組患者在化學(xué)治療結(jié)束2～4周后行胸腔鏡下食管癌根治術(shù)。

1.3 觀察指標

1.3.1 細胞免疫功能分別于化學(xué)治療前1 d、化學(xué)治療第1個周期結(jié)束后3 d(即治療24 d)、化學(xué)治療第2個周期結(jié)束后3 d(即治療45 d)和術(shù)后7 d，采集2組患者清晨空腹靜脈血2 mL，采用流式細胞儀(蘇州賽景公司)進行血清中淋巴細胞亞群檢測，包括T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)和自然殺傷(natural killer，NK)細胞亞群(CD16+、CD56+)，并計算CD4+/CD8+、CD16+/CD56+比值。

1.3.2 血清炎癥因子水平分別于治療前及化學(xué)治療6 個月后采集患者清晨空腹靜脈血10 mL，2 500 r· min-1離心5 min分離血清，采用酶聯(lián)免疫試劑盒(上海撫生生物科技有限公司)檢測白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細胞介素-8(interleukin-8，IL-8)以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3.3 血清miR-451和miR-21水平分別于化學(xué)治療前1 d和治療結(jié)束后當(dāng)天采集患者清晨空腹肘靜脈血10 mL，并在采樣后1 h內(nèi) 4 ℃ 12 000×g離心10 min，取上層血清，采用TRIzol試劑盒(廣州威佳科技有限公司)提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄試劑盒(廣州威佳科技有限公司)反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)儀(北京安麥閣貿(mào)易有限公司)檢測目的基因的相對表達量。miR-451上游引物序列為5′-TCCGATTGAGTCATTACCAT-3′；下游引物序列為5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。miR-21上游引物序列為5′-TCAACATCAGTCTGATAAGCTA-3′；下游引物序列為5′-GAATTTGCGTGTCATCCTTGCG-3′。甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)上游引物序列為5′-GTACGACTCACTATAGGGA-3′；下游引物序列為5′-AACAGCGACACCCACTCCTCCA-3′。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算患者血清中miR-451和miR-21的相對表達量。

1.3.4 外科手術(shù)治療效果患者腫瘤切除例數(shù)和腫瘤完全性切除例數(shù)與總例數(shù)的比值分別表示腫瘤切除率和腫瘤完全性切除率。

1.3.5 不良反應(yīng)記錄所有患者住院治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況，即嘔吐、粒細胞減少、血紅蛋白減少、血小板減少、食管炎、肺炎、周圍神經(jīng)損害、肝功能損害及腎功能損害。根據(jù)Karnofsky分級，化學(xué)治療不良反應(yīng)嚴重程度分為4級：1級為輕度反應(yīng)，無需治療；2級為中度反應(yīng)，需要治療；3級為重度反應(yīng)，威脅患者生命；4級為嚴重反應(yīng)，可導(dǎo)致死亡。不良反應(yīng)3、4級患者例數(shù)與總例數(shù)的比值表示3、4級不良反應(yīng)發(fā)生率。

2 結(jié)果

2.1 2組患者免疫細胞水平比較結(jié)果見表2。化學(xué)治療前2組患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+、CD16+/CD56+比值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?；瘜W(xué)治療24、45 d及術(shù)后7 d 2組患者CD3+、CD4+、CD8+水平及CD16+/CD56+比值顯著低于治療前，CD4+/CD8比值顯著高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?；瘜W(xué)治療24、45 d及術(shù)后7 d，觀察組患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+、CD16+/CD56+比值顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 2組患者外周血中免疫細胞水平比較

2.2 2組患者炎癥因子水平比較結(jié)果見表3。治療前2組患者血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。2組患者治療后血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后，觀察組患者血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 2組患者血清IL-6、IL-8及TNF-α水平比較

2.3 2組患者血清中miR-451和miR-21相對表達量比較結(jié)果見表4。治療前2組患者血清中miR-451和miR-21相對表達量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。2組患者治療后血清中miR-451及miR-21相對表達量均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后，觀察組患者血清中miR-451及miR-21相對表達量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 2組患者血清中miR-451和miR-21相對表達量比較

2.4 2組患者手術(shù)治療效果的比較結(jié)果見表5。觀察組患者手術(shù)切除率和完全性切除率均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表5 2組患者手術(shù)治療效果比較

2.5 2組患者3、4級不良反應(yīng)發(fā)生率比較結(jié)果見表6。2組患者均無發(fā)生3、4級肺炎、周圍神經(jīng)損害、肝功能損害及腎功能損害不良反應(yīng)。觀察組患者3、4級嘔吐、粒細胞減少、血紅蛋白減少、血小板減少、食管炎不良反應(yīng)發(fā)生率均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表6 2組患者3、4級不良反應(yīng)發(fā)生率比較

3 討論

食管癌在我國發(fā)病率較高，且嚴重損害患者的生命健康[7]。目前，雖然臨床中運用包括化學(xué)治療、放射治療和手術(shù)等多種治療方法以期實現(xiàn)食管癌的有效治療[8]，但患者生存率仍處于較低水平[9]。研究表明，在手術(shù)前進行新輔助化療有望縮小食管癌腫瘤體積，進而可通過手術(shù)根除腫瘤、提高手術(shù)切除率[10]。但食管癌患者機體免疫系統(tǒng)受損，免疫能力較低，使新輔助化療難以達到預(yù)期療效[11]，因此，提高食管癌患者免疫能力對腫瘤治療具有重要意義。

T淋巴細胞以及NK細胞為免疫活性細胞，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，通過檢測患者外周血中NK細胞以及T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+和CD8+)水平的變化可以判斷機體抗腫瘤能力[12]。本研究結(jié)果顯示，化學(xué)治療24、45 d及術(shù)后7 d，觀察組患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+、CD16+/CD56+比值顯著高于對照組；觀察組患者手術(shù)切除率和完全性切除率均顯著高于對照組；觀察組患者3、4級嘔吐、粒細胞減少、血紅蛋白減少、血小板減少、食管炎不良反應(yīng)發(fā)生率均顯著低于對照組；提示采用胸腺肽α1聯(lián)合順鉑和氟尿嘧啶新輔助化療方案可以提高食管癌患者免疫應(yīng)答能力，降低3、4級不良反應(yīng)發(fā)生率，有助于改善患者病情。順鉑及氟尿嘧啶是常見的廣譜抗癌藥物，能明顯改善機體免疫功能。順鉑主要通過破壞癌細胞DNA的復(fù)制發(fā)揮抗癌作用；氟尿嘧啶作為尿嘧啶抗代謝藥物，易進入癌細胞的轉(zhuǎn)移區(qū)中抑制DNA和RNA的合成，兩者聯(lián)合使用可以達到協(xié)同抗腫瘤作用，但對機體免疫系統(tǒng)影響較大[13]。研究表明，胸腺肽α1能夠促進T淋巴細胞成熟，改善細胞活性以及修復(fù)機體免疫功能[14]，進而可提高患者免疫能力，激活抗腫瘤免疫反應(yīng)。

IL-6、IL-8以及TNF-α等炎癥因子在體內(nèi)可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)[15]，對免疫細胞增殖起抑制作用，使機體免疫力處于較低水平[16]。本研究結(jié)果顯示，在治療后，觀察組患者血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平均顯著低于對照組，提示采用胸腺肽α1聯(lián)合順鉑和氟尿嘧啶新輔助化療后，食管癌患者體內(nèi)炎癥因子水平降低，炎癥狀態(tài)得到緩解。這可能是由于胸腺肽α1具有免疫調(diào)節(jié)作用，可增強機體抗腫瘤能力，進而有效降低患者炎癥反應(yīng)[17]。

miR-451為一種非編碼RNA，參與細胞凋亡過程，在臨床中常用作腫瘤細胞標志物[18]。miR-21在多種惡性腫瘤中呈高表達，與腫瘤細胞的發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[19]。本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組患者血清中miR-451及miR-21相對表達量顯著高于對照組，提示胸腺肽α1聯(lián)合順鉑和氟尿嘧啶治療方案有助于抑制患者體內(nèi)正常細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移，改善體內(nèi)微環(huán)境，這可能是因為胸腺肽α1具有增強細胞免疫水平的能力，可促進患者康復(fù)，進而使體內(nèi)腫瘤相關(guān)因子表達維持在正常水平[20]。

綜上所述，胸腺肽α1聯(lián)合順鉑和氟尿嘧啶新輔助化療在食管癌患者的臨床治療中療效較好，可以提高T淋巴細胞與NK細胞水平，提高外科手術(shù)切除率和完全性切除率，降低不良反應(yīng)發(fā)生率，抑制炎癥因子水平，并降低血清中miR-451以及miR-21水平。但本研究對食管癌患者長期療效的隨訪數(shù)據(jù)不足，今后研究中有待于進一步補充。