侯曉琪，袁 林

（1.貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學院，貴州貴陽 551400；2.息烽縣畜牧水產(chǎn)技術(shù)開發(fā)服務(wù)中心，貴州貴陽 551100）

老鼠簕是爵床科植物，它是紅樹林重要組成部分之一，其75% 乙醇提取物中已經(jīng)鑒定出8 種化合物，分別為二十六烷酸、豆甾醇、三十四烷醇、豆甾醇-3- 吡喃葡萄糖苷、香草酸、4- 羥基2- 苯并惡唑啉酮和槲皮素（彭興和龍盛京，2006）。這種植物有多種醫(yī)學用途，包括治療淋巴腫大、脾臟腫大、胃痛、咳嗽和哮喘，其提取物還被用于治療癱瘓、蛇咬傷、風濕病等（彭興和龍盛京，2004）。此外，Mani（2012）還報道，老鼠簕提取物具有顯著的抗炎和胃保護作用，其中丁醇和氯仿提取物還具有抑制枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、曲霉菌、黑曲霉的作用。Babu 等（2002）也報道了老鼠簕的抗氧化活性和抑制腫瘤作用。但目前在醫(yī)藥上主要使用這種中草藥來治療肝炎。目前關(guān)于其在動物上的抗病毒活性研究有限，特別是針對鴨肝炎病毒。因此，本試驗以商品肉鴨為動物模型，通過注射鴨肝炎病毒建立毒理模型，研究老鼠簕乙醇提取物對肉鴨生長性能、抗氧化及對鴨病毒性肝炎的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試驗日糧與動物分組 試驗選擇平均初始體重為（48.63±0.06）g 的肉鴨600 只，隨機分為4 組，每組5 個重復，每個重復30 只。對照組肉鴨飼喂基礎(chǔ)日糧（不處理），處理組肉鴨注射0.15 mL/ 只（LD50為104.38×0.2/mL）鴨肝炎病毒B，分別飼喂基礎(chǔ)日糧+0、40 和80 mg/kg 中草藥制劑?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1，老鼠簕乙醇提取物的制備方法參考Babu 等（2001）的方法制備。

1.2 數(shù)據(jù)記錄與樣品采集 在試驗第1、21、42天早上禁食前按照重復對肉鴨進行稱重，每周統(tǒng)計1 次飼料消耗量，試驗結(jié)束后計算1 ～21 d、22 ～42 d 和1 ～42 d 肉鴨的平均日增重、平均日采食量和料重比。分別在試驗第21 和42 天時，每個重復隨機選擇8 只體重接近的肉鴨翅下靜脈采血5 mL，25℃靜置15 min，3000g下離心15 min，分離血清-20℃保存。同時在試驗結(jié)束當天每個重復選擇8 只體重接近的肉鴨進行屠宰，取右側(cè)肝臟，-20℃保存。

表1 日糧原料組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品測定 血清抗氧化酶活性，如谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性采用南京建成生物工程有限公司的試劑盒測定，具體方法參考試劑盒說明書。鴨病毒性肝炎OD 值參考上海研謹生物科技有限公司的試劑盒測定。肝臟病變的判定采用Wei 等（2015）的方法，即無病變（0）、輕微病變（＜1/3 區(qū)域）、中度病變（1/3 ＜病變區(qū)域＜2/3）、嚴重病變（＞2/3 區(qū)域）。

1.4 數(shù)據(jù)分析 試驗數(shù)據(jù)采用SAS 軟件單因素方差分析模型，采用Turkey 法進行多重比較，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥制劑對肉鴨生長性能的影響 由表2 可知，試驗處理對1 d 和21 d 肉鴨體重、1 ～21 d、1 ～42 d 平均日增重、1 ～21 d 飼料報酬及各階段采食量無顯著影響（P＞0.05）。T1 組肉鴨42 d 體 重、22 ～42 d 日 增 重 最 低（P＜0.05）。與對照組相比，T1 組肉鴨22 ～42 d 飼料報酬顯著降低1.5%（P＜0.05），同時在整個試驗階段，T1 組肉鴨飼料報酬較其他組分別顯著降低了8.33%、6.38% 和6.38%（P＜0.05）。

表2 中草藥對肉鴨生長性能的影響

2.2 中草藥制劑對肉鴨血清抗氧化和肝臟酶活的影響 由表3 可知，對照組與處理組對21 d 肉鴨血清GSH-Px 活性及21、42 d 肉鴨血清SOD活性的影響無顯著差異（P＞0.05）。T1 組肉鴨42 d 血 清GSH-Px 活 性 最 低（P＜0.05），但21和42 d 血清丙二醛含量及肝臟AST 和ALT 活性最高（P＜0.05）。

表3 中草藥對肉鴨血清抗氧化和肝臟酶活的影響

2.3 中草藥制劑對鴨病毒性肝炎OD 值及肝臟病變的影響 由表4 可知，試驗處理對21 和42 d鴨病毒性肝炎OD 值無顯著影響（P＞0.05）。對照組肉鴨肝臟無病變的樣品數(shù)顯著高于處理組（P＜0.05），T2 組肝臟處于輕微病變數(shù)顯著高于其他組（P＜0.05），而T1 組肝臟處于嚴重病變的樣品數(shù)表現(xiàn)最高（P＜0.05）。

表4 中草藥對鴨病毒性肝炎OD 值和肝臟病變的影響

3 討論

鴨病毒性肝炎動物模型是一種簡單、經(jīng)濟的動物模型，可以提供一種類似于人類肝炎病毒感染的體內(nèi)試驗系統(tǒng)，目前該動物模型正應(yīng)用于抗肝炎藥物篩選和治療的研究（Kundgen 等，2002）。本研究以鴨病毒性肝炎動物模型為研究對象，研究了老鼠簕乙醇提取物對抗鴨病毒性肝炎病毒和保護肝臟的作用，本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，感染了肝炎病毒的肉鴨（T1）42 d 體重、22 ～42 d 日增重最低，同時該組肉鴨22 ～42 d 飼料報酬顯著降低，在整個試驗階段，T1 組肉鴨飼料報酬較其他組分別顯著降低了8.33%、6.38% 和6.38%。結(jié)果說明，老鼠簕乙醇提取物可改善肝炎病毒對肉鴨生長的抑制作用，提高帶毒肉鴨的飼料報酬。

血清抗氧化酶活性及丙二醛含量顯示，T1 組肉鴨42 d 血清GSH-Px 活性最低，但21 和42 d血清丙二醛含量顯著升高。田瑩等（2007）報道了老鼠簕的多糖成分具有較強的抗氧化性和良好的還原力，主要機制是老鼠簕活性成分顯著提高自由基清除效果，其中對羥基自由基的清除率達到80%，對超氧陰離子的抑制率為66.1%。此外，感染了肝炎病毒的肉鴨（T1 組）肝臟AST 和ALT 活性顯著高于對照組和其他處理組，盡管感染肝炎病毒的肉鴨（T1 ～T3）組這兩種酶活性無顯著差異，但日糧添加老鼠簕提取物的肉鴨（T2和T3 組）兩種酶活性在數(shù)值上都高于對照組。血清ALT 和AST 仍被認為是反映肝細胞損傷的基本指標，也是反映肝損傷的敏感指標（Pratt 和Kaplan，2000）。因此，本研究結(jié)果說明，老鼠簕提取物有助于緩解肝炎病毒對肝臟的損傷程度。

抗原檢測結(jié)果顯示，處理組抗原OD 值在數(shù)值上高于對照組，但無顯著差異，說明老鼠簕提取物可能對兩種抗原的活性無明顯降低作用，這與Wei 等（2015）報道的結(jié)果一致。病理檢查顯示，T1 組肉鴨肝臟嚴重病變的數(shù)量達到50%，而感染組添加40 mg/kg 老鼠簕提取物組未發(fā)現(xiàn)肝臟嚴重病變，該組僅有50% 表現(xiàn)輕微病變，12.5% 表現(xiàn)為中度病變，說明日糧添加40 mg/kg 老鼠簕乙醇提取物對感染鴨病毒性肝炎病毒的肉鴨肝臟有一定的保護作用。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加中草藥制劑對肉鴨病毒性肝炎無抵抗作用，但可以降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶、緩解病毒性肝炎所致的損傷作用，其保護作用可能與抗氧化活性升高有關(guān)。