曾 君，吳本清△，李 嵐，高國蘭，鄭 義，楊江濤，楊菊紅，林列坤，梁 欣，王長山

1.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，廣東深圳 518107；2.廣東省深圳市人民醫(yī)院產(chǎn)科，廣東深圳 518020；3.深圳愛灣醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，廣東深圳 518107

珠蛋白生成障礙性貧血，是一組嚴(yán)重影響人體健康的隱性遺傳性血液系統(tǒng)疾病，主要發(fā)病原因是患者攜帶有缺陷的血紅蛋白基因，導(dǎo)致血紅蛋白合成異常，引起患者貧血表現(xiàn)及其他病理狀態(tài)，其發(fā)病機(jī)制在國內(nèi)外被廣泛研究[1-2]。根據(jù)珠蛋白生成障礙性貧血患者的基因異常類型，可分為α-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血，部分患者合并攜帶α和β兩種珠蛋白生成障礙性貧血基因。本研究采用先進(jìn)的膜條導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)珠蛋白生成障礙性貧血基因，分析珠蛋白生成障礙性貧血患者基因分布特征，以輔助珠蛋白生成障礙性貧血臨床診斷，探索防治策略。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年12月至2019年12月在中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因突變檢測(cè)的3 891例就診者為研究對(duì)象，其中男1 358例，女2 533例；年齡為出生1 d至90歲，平均(25.64±10.69)歲。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過，并在研究對(duì)象簽署知情同意書后開展珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)。

1.2方法

1.2.1血液樣本DNA提取 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集研究對(duì)象2 mL外周血，應(yīng)用廈門至善生物有限公司提供的磁珠法核酸提取試劑盒在全自動(dòng)核酸提取儀上提取DNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書及儀器操作步驟開展提取實(shí)驗(yàn)。為鑒定儀器提取DNA的質(zhì)量，利用超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定提取DNA的吸光度比值A(chǔ)260/A280和濃度，A260/A280在1.6～2.0且濃度大于50 ng/mL時(shí)進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，未達(dá)到上述條件的樣本重新提取DNA。

1.2.2基因檢測(cè) 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)采用潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)試劑盒，運(yùn)用膜條導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)3種缺失型α-珠蛋白生成障礙性貧血和3種突變型α-珠蛋白生成障礙性貧血及19種突變型β-珠蛋白生成障礙性貧血。檢測(cè)過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié) 果

在3 891例研究對(duì)象中檢出珠蛋白生成障礙性貧血基因變異1 910例，占比49.09%；其中α-珠蛋白生成障礙性貧血1 135例，占比29.17%；β-珠蛋白生成障礙性貧血697例，占比17.91%；αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血78例(2.00%)。珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果及頻率分布見表1～3。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果及頻率分布

續(xù)表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果及頻率分布

表2 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果及頻率分布

表3 αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果分布

3 討 論

本研究應(yīng)用先進(jìn)膜條導(dǎo)流雜交技術(shù)一次性檢測(cè)患者攜帶的珠蛋白生成障礙性貧血基因。膜條導(dǎo)流雜交技術(shù)是近年來發(fā)展起來的可對(duì)核酸進(jìn)行高通量快速檢測(cè)的技術(shù)，此技術(shù)集合了PCR、導(dǎo)流雜交及基因芯片技術(shù)。一張基因膜條同時(shí)檢測(cè)6種α-珠蛋白生成障礙性貧血和19種β-珠蛋白生成障礙性貧血，可大幅度提高研究的檢測(cè)通量及工作效率。本研究中，深圳地區(qū)α-珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生主要的基因型是--SEA/αα和-α3.7/αα，其發(fā)生頻率分別為17.68%和4.19%，其他α-珠蛋白生成障礙性貧血基因發(fā)生頻率均小于4%；β-珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生主要基因型是CD41-42，其發(fā)生頻率為7.76%，與同類研究結(jié)果相似[3-5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因患者78例，其發(fā)生率為2.00%(78/3 891)，與曾祥興等[6]研究廣東河源地區(qū)的結(jié)果相近。其中CD41-42與--SEA/αα復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血患者共16例，占復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血總數(shù)的20.51%(16/78)。通過對(duì)深圳地區(qū)αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因型分析，與CD41-42及--SEA/αα相關(guān)的復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血共42例，占復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血總數(shù)的53.85%(42/78)。對(duì)于αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因患者，由于αβ-珠蛋白生成障礙性貧血基因的同時(shí)缺失或突變，致使αβ-珠蛋白的合成達(dá)到平衡，從而使得患者的臨床貧血癥狀相對(duì)較輕，故在珠蛋白生成障礙性貧血常規(guī)篩查時(shí)容易漏診，但該類患者由于攜帶αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因，在產(chǎn)前篩查中應(yīng)重點(diǎn)防控，預(yù)防該類患者婚育導(dǎo)致重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生[7-9]。在臨床實(shí)際工作中，αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，而且β-珠蛋白生成障礙性貧血的臨床表型會(huì)掩蓋α-地貧的表型[10]，因此對(duì)于血液學(xué)篩查一定要同時(shí)進(jìn)行αβ-復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因的檢測(cè)，可以有效防止復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血漏診。

本研究應(yīng)用膜條導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)患者珠蛋白生成障礙性貧血基因型，研究了珠蛋白生成障礙性貧血基因型的分布情況，基因突變類型及其流行病學(xué)特征，明確了深圳地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血的基因突變譜，為珠蛋白生成障礙性貧血的產(chǎn)前診斷提供了科學(xué)依據(jù)，且可促進(jìn)深圳地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血的有效防治，對(duì)提高深圳地區(qū)的人口質(zhì)量有重要意義。