王 磊，劉 燕

(1.開封市中心醫(yī)院病理科，河南 開封 475000；2.開封市人民醫(yī)院腫瘤科，河南 開封 475002)

膀胱癌是泌尿系生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居常見惡性腫瘤的第9位，病死率位于13位[1]。隨著生活環(huán)境的改變以及醫(yī)療水平的進(jìn)步，使膀胱癌的發(fā)生率及檢出率明顯提高，成為影響人們健康狀況的主要疾病[2]。近年來，在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展中，表觀遺傳學(xué)作用機(jī)制受到臨床重點(diǎn)關(guān)注。抑癌基因表達(dá)的降低或其功能喪失，極易誘發(fā)各種惡性腫瘤，且在發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵性作用[3]。尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2(CDX2)與同源框蛋白A9(HOXA9)是與人類關(guān)系最為密切的抑癌基因，其結(jié)構(gòu)改變會促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性。CDX2是人體內(nèi)特異性表達(dá)的核轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)與調(diào)控的過程復(fù)雜，是一個(gè)多因子、多渠道參與，在基因結(jié)構(gòu)改變以及啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化，均會導(dǎo)致CDX2蛋白表達(dá)降低[4]。HOXA9蛋白是同源盒基因內(nèi)的一員，HOX基因可編碼DNA，結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，起到調(diào)節(jié)基因表達(dá)、分化作用[5]。本研究分析CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2014-12～2016-12在開封市中心醫(yī)院行膀胱癌根治術(shù)100例患者的臨床資料。男61例，女39例；年齡40～73歲，平均(58.41±9.18)歲；病變直徑2～7cm，平均(3.97±1.02)cm；低分化25例，中分化16例，高分化59例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例；T1期25例，T2期31例，T3期28例，T4期16例。另選取同期行良性膀胱炎而進(jìn)行手術(shù)患者100例作為對照組，男65例，女35例；年齡40～75歲，平均(59.01±9.23)歲；兩組患者基線資料比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可進(jìn)行比較。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者術(shù)前均未接受放化療治療；(2)所有患者均有膀胱組織標(biāo)本，具備完整的檢查、治療及隨訪資料；(3)具備隨訪條件。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前接受放化療治療；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)伴其他惡性腫瘤者；(4)臨床資料欠缺者。

1.3 檢測方法

CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)檢測，膀胱癌組留取膀胱癌組織及癌旁組織標(biāo)本，其標(biāo)本超過4cm；對照組留取膀胱正常黏膜組織，組織標(biāo)本以30g/L甲醛溶液固定，石蠟包埋后切片，約4μm。免疫組織化學(xué)法測定CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)，人鼠抗人CDX2單克隆抗體(上海信裕生物科技有限公司)、人鼠抗人HOXA9多克隆抗體(上海煊翎生物科技有限公司)，按照免疫組化學(xué)法測定步驟，烤片溫度低于60℃，1～2h。石蠟切片行二甲苯脫蠟，脫水至水化，用PBS沖洗。行抗原修復(fù)采用熱修復(fù)，阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶，將PBS甩去后，加入正常血清工作液37℃，孵育15～20min。滴加CDX2和HOXA9一抗，4℃冰箱內(nèi)孵育、過夜。雙重染色后，自來水沖洗停止顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精進(jìn)行分化、藍(lán)化，脫水、封片，鏡檢，行病理觀察。每個(gè)組織切片隨機(jī)選取5個(gè)染色均勻的高倍視野進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)視野內(nèi)陽性細(xì)胞染色情況。陰性：視野內(nèi)無陽性細(xì)胞染色；弱陽性：陽性細(xì)胞染色<1/4；中陽性：陽性細(xì)胞染色在1/4～1/2；強(qiáng)陽性：陽性細(xì)胞染計(jì)數(shù)超過1/2。低表達(dá)：CDX2和HOXA9蛋白陽性細(xì)胞染色為陰性或弱陽性；高表達(dá)：CDX2和HOXA9蛋白陽性細(xì)胞染色為中陽性或強(qiáng)陽性。

1.4 隨訪

膀胱癌組患者均獲得隨訪，無失訪、脫落患者，隨訪至2019年12月31日，統(tǒng)計(jì)患者3年累積生存率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料經(jīng)n(%)表示，采取χ2檢驗(yàn)；采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率表達(dá)

膀胱癌組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率分別為47.0%、65.0%，均高于癌旁組織、正常黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同標(biāo)本組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率表達(dá)[n(%)]

2.2 不同CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)患者3年累積生存率比較

CDX2和HOXA9蛋白高表達(dá)患者3年累積生存率分別為38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)患者3年累積生存率比較[n(%)]

2.3 CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性分析

Spearman 檢驗(yàn)分析，CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)與患者預(yù)后呈正相關(guān)性(r=0.401，0.508，P<0.05)。

3 討論

膀胱癌作為危害人類身心健康主要惡性腫瘤，其免疫、放化療取得一定進(jìn)展，但仍未獲得理想效果，預(yù)后差。而且現(xiàn)今膀胱癌存在的腫瘤分子標(biāo)記物仍不能充分反映惡性腫瘤的生物學(xué)特征，給術(shù)后輔助治療及預(yù)后判斷帶來一定難度。因此，如何開辟一條新的治療途徑，為治療及術(shù)后復(fù)發(fā)提供依據(jù)，成為臨床研究熱點(diǎn)。

CDX2蛋白隸屬于尾相關(guān)性同源盒基因家族，由3個(gè)外顯子及2個(gè)內(nèi)含子組成，以螺旋-環(huán)-螺旋方式，與DNA相結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)DNA的表達(dá)。當(dāng)前CDX2蛋白在胃癌、結(jié)直腸癌組織中的具有典型特征基因，并呈陽性表達(dá)，且在腸上皮演變逐漸發(fā)展至癌變占據(jù)著重要作用[6]。HOXA9蛋白是HOX基因的A簇同源盒基因，可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞分化、活化，并具有促使胚胎發(fā)育的作用。有研究顯示[7]，HOXA9蛋白對DNA不斷編碼，并與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，可能是基因突變或移位，造成DNA編碼錯(cuò)誤，進(jìn)而使HOXA9蛋白不斷蓄積，導(dǎo)致HOXA9蛋白呈高表達(dá)。CDX2蛋白表達(dá)位于正常腸黏膜上皮細(xì)胞，是維持腸黏膜正常發(fā)育、分化的重要蛋白因子，在正常黏膜組織內(nèi)無表達(dá)。若蛋白水平增加，誘導(dǎo)了黏膜上皮化生，促使腫瘤侵襲性的發(fā)生。HOXA9蛋白是調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、發(fā)育以及增殖的重要調(diào)節(jié)因子，隨著腫瘤進(jìn)展，惡性腫瘤的形成，或基因突變及移位，導(dǎo)致編碼錯(cuò)誤，造成腫瘤細(xì)胞內(nèi)HOXA9蛋白的高表達(dá)。本組研究中，膀胱癌組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率分別為47.0%、65.0%，均高于癌旁組織、正常黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此次研究結(jié)果表明，在膀胱癌組織標(biāo)本內(nèi)，CDX2和HOXA9蛋白呈高表達(dá)，其陽性率明顯增加?？赡苁前螂装┑男纬?，惡性腫瘤細(xì)胞的形成以及遷移，致CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)升高[8]。張健鋒等[9]研究分析CDX2蛋白與胃癌之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，CDX2蛋白表達(dá)與胃癌浸潤深度、胃癌的TNM 分期、有無淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。張盛等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在漿液性卵巢癌中HOXA9蛋白表達(dá)陽性率為75.8%明顯高于良性漿液性腫瘤的34.8%，與卵巢癌的分級和預(yù)后轉(zhuǎn)歸具有一定相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此CDX2和HOXA9蛋白在惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中占據(jù)著重要作用。

患者預(yù)后方面，CDX2和HOXA9蛋白高表達(dá)患者3年累積生存率分別為38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Spearman 檢驗(yàn)分析，CDX2和HOXA9蛋白表達(dá)與患者預(yù)后呈正相關(guān)性。本研究提示，CDX2和HOXA9蛋白高表達(dá)促使膀胱癌的進(jìn)展，其原因可能是CDX2和HOXA9蛋白高表達(dá)會促進(jìn)惡性腫瘤的生長及侵襲，腫瘤惡性程度高，使患者預(yù)后差。因此根據(jù)CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，通過抑制CDX2和HOXA9蛋白的表達(dá)，或許可作為治療膀胱癌的新方法。

綜上所述，膀胱癌組織中尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2與同源框蛋白A9表達(dá)均有所提高，兩種蛋白表達(dá)與患者預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)患者生存率越低，在膀胱癌中的發(fā)生、發(fā)展中占據(jù)著重要作用，并為臨床治療方案的選擇及制定提供新的思路。