◎ 張敏莉
(寶雞市質(zhì)量技術(shù)檢驗(yàn)檢測(cè)中心,陜西 寶雞 721000)
食品色素按照來源不同可分為天然色素和人工合成色素兩大類。合成色素性質(zhì)穩(wěn)定,著色力強(qiáng),價(jià)格低廉,因此被廣泛使用[1],但過量使用存在一定的安全隱患,我國(guó)對(duì)合成著色劑的使用范圍和使用量有嚴(yán)格的規(guī)定。因此,食品中合成著色劑的檢測(cè)顯得尤為重要。
《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》(GB 5009.35—2016)[2]方法中,采用聚酰胺粉吸附食品中的合成著色劑,并用無水乙醇-氨水-水溶液進(jìn)行洗脫。聚酰胺粉的吸附能力會(huì)受到外界環(huán)境的影響,回收率較低,同時(shí)操作步驟復(fù)雜,不適合大批量樣品的處理[3]。本試驗(yàn)采用ProElut PWA-2 固相萃取柱,簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,極大的提高了回收率。而且可以同時(shí)檢測(cè)含乳飲料中7 種合成著色劑。
Waterse2695 高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)、WelchUltimateAQ-C18柱、固相萃取裝置及氮吹儀。
甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、乙酸銨(色譜純)、甲酸(色譜純)和氨水(分析純)。
檸檬黃(編號(hào):GBW(E)100158,濃度1.00 mg·mL-1)、新紅(編號(hào):BW0719-1,濃度1 000 μg·mL-1)、莧菜紅(編號(hào):GBW(E)100160,濃度1.00 mg·mL-1)、靛藍(lán)(編號(hào):BW0726-1,濃度1 000 μg·mL-1)、胭脂紅(編號(hào):GBW(E)100161,濃度1.00 mg·mL-1)、日落黃(編號(hào):GBW(E)100159,濃度1 000 μg·mL-1)及亮藍(lán)(編號(hào):GBW(E)100162,濃度1 000 μg·mL-1),以上7 種標(biāo)準(zhǔn)溶液由北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司提供。
1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
分別準(zhǔn)確吸取檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液0.025 mL、0.125 mL、0.250 mL、0.375 mL、0.625 mL 和1.250 mL 于25 mL 容 量 瓶中,用水定容至刻度,搖勻,配制成1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
1.4.2 樣品處理
提?。簻?zhǔn)確稱取1.0 g 樣品,加入10.0 mL 水、5.00 mL 甲醇和3.00 mL 甲酸混勻,待凈化。
凈化:取已活化好的ProElut PWA-2 固相萃取柱(依次用5 mL 甲醇、5 mL10%甲酸水活化),加入待凈化液。溶液完全流干后,用5.00 mL 甲醇淋洗。淋洗液完全流干后,用5.00 mL 15%氨水甲醇洗脫,接收洗脫液,并于50 ℃下氮吹至約300 μL,用流動(dòng)相定容至2.00 mL。0.22 μm 的有機(jī)相濾膜過濾,待測(cè)。
1.4.3 色譜條件
色譜柱:WelchUltimateAQ-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相A 為乙酸銨溶液(0.02 mol·L-1),B 為甲醇+乙腈(70+30),流速1.0 mL·min-1,進(jìn)樣量10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm,梯度洗脫設(shè)置見表1。
表1 流動(dòng)相梯度表
1.4.4 回收率測(cè)定
稱取1.0 g 含乳飲料空白樣品,分別加入含量為5 mg·kg-1、25 mg·kg-1、40 mg·kg-1的7 種合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,經(jīng)前處理后進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。
1.4.5 重復(fù)性測(cè)定
取污染后濃度為25.0 μg·mL-1的含乳飲料樣品各6 份,經(jīng)前處理后進(jìn)行分析,測(cè)得7 種色素的濃度,計(jì)算其RSD,獲得重復(fù)性結(jié)果。
不同類別的色素極性差異較大,采用等度洗脫不能得到很好的分離,故采用梯度洗脫。本實(shí)驗(yàn)先參照GB/T 5009.35—2016 方法用甲醇、乙酸銨進(jìn)行梯度洗脫,實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)以下問題:①甲醇濃度變化過快,檸檬黃、新紅不能很好的分離。②亮藍(lán)出峰前后會(huì)出現(xiàn)基線向上漂移,影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。故采用甲醇+乙腈(70+30)的混合液作為流動(dòng)相B,參照GB/T 5009.35—2016 方法進(jìn)行梯度洗脫,使7 種色素得到較好的分離。圖1 為7 種色素在本實(shí)驗(yàn)條件下得到的色譜峰。
圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
配 制 濃 度 為1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)序列,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性范圍為1.00 ~50.0 μg·mL-1,各組分相關(guān)系數(shù)均在0.999 以上,線性關(guān)系良好。線性方程、相關(guān)系數(shù)見表2。
表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)表
稱取1.0 g 含乳飲料空白樣品,加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。測(cè)定回收率結(jié)果見表3。該方法回收率在91.4%~107.5%,說明方法準(zhǔn)確度良好。
表3 回收率實(shí)驗(yàn)表
取污染后濃度為25.0 μg·mL-1的含乳飲料樣品各6 份,進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表4,7 種色素的重復(fù)性(RSD值)均<5%,表明方法的重復(fù)性良好。
表4 重復(fù)性測(cè)定結(jié)果(n=6)表
實(shí)驗(yàn)表明,通過優(yōu)化梯度洗脫條件,同時(shí)改進(jìn)含乳飲料樣品的前處理方法,采用ProElut PWA-2 固相萃取柱進(jìn)行前處理,可以達(dá)到簡(jiǎn)化前處理過程、縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、提高實(shí)驗(yàn)回收率的目的。該方法結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可用于含乳飲料中7 種合成著色劑的同時(shí)測(cè)定。