◎ 張敏莉

（寶雞市質(zhì)量技術(shù)檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西 寶雞 721000）

食品色素按照來源不同可分為天然色素和人工合成色素兩大類。合成色素性質(zhì)穩(wěn)定，著色力強(qiáng)，價(jià)格低廉，因此被廣泛使用[1]，但過量使用存在一定的安全隱患，我國(guó)對(duì)合成著色劑的使用范圍和使用量有嚴(yán)格的規(guī)定。因此，食品中合成著色劑的檢測(cè)顯得尤為重要。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB 5009.35—2016）[2]方法中，采用聚酰胺粉吸附食品中的合成著色劑，并用無水乙醇-氨水-水溶液進(jìn)行洗脫。聚酰胺粉的吸附能力會(huì)受到外界環(huán)境的影響，回收率較低，同時(shí)操作步驟復(fù)雜，不適合大批量樣品的處理[3]。本試驗(yàn)采用ProElut PWA-2 固相萃取柱，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，極大的提高了回收率。而且可以同時(shí)檢測(cè)含乳飲料中7 種合成著色劑。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Waterse2695 高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）、WelchUltimateAQ-C18柱、固相萃取裝置及氮吹儀。

1.2 試驗(yàn)試劑

甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸銨（色譜純）、甲酸（色譜純）和氨水（分析純）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液

檸檬黃（編號(hào)：GBW（E）100158，濃度1.00 mg·mL-1）、新紅（編號(hào)：BW0719-1，濃度1 000 μg·mL-1）、莧菜紅（編號(hào)：GBW（E）100160，濃度1.00 mg·mL-1）、靛藍(lán)（編號(hào)：BW0726-1，濃度1 000 μg·mL-1）、胭脂紅（編號(hào)：GBW（E）100161，濃度1.00 mg·mL-1）、日落黃（編號(hào)：GBW（E）100159，濃度1 000 μg·mL-1）及亮藍(lán)（編號(hào)：GBW（E）100162，濃度1 000 μg·mL-1），以上7 種標(biāo)準(zhǔn)溶液由北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別準(zhǔn)確吸取檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液0.025 mL、0.125 mL、0.250 mL、0.375 mL、0.625 mL 和1.250 mL 于25 mL 容 量 瓶中，用水定容至刻度，搖勻，配制成1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.4.2 樣品處理

提?。簻?zhǔn)確稱取1.0 g 樣品，加入10.0 mL 水、5.00 mL 甲醇和3.00 mL 甲酸混勻，待凈化。

凈化：取已活化好的ProElut PWA-2 固相萃取柱（依次用5 mL 甲醇、5 mL10%甲酸水活化），加入待凈化液。溶液完全流干后，用5.00 mL 甲醇淋洗。淋洗液完全流干后，用5.00 mL 15%氨水甲醇洗脫，接收洗脫液，并于50 ℃下氮吹至約300 μL，用流動(dòng)相定容至2.00 mL。0.22 μm 的有機(jī)相濾膜過濾，待測(cè)。

1.4.3 色譜條件

色譜柱：WelchUltimateAQ-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相A 為乙酸銨溶液（0.02 mol·L-1），B 為甲醇+乙腈（70+30），流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm，梯度洗脫設(shè)置見表1。

表1 流動(dòng)相梯度表

1.4.4 回收率測(cè)定

稱取1.0 g 含乳飲料空白樣品，分別加入含量為5 mg·kg-1、25 mg·kg-1、40 mg·kg-1的7 種合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)前處理后進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。

1.4.5 重復(fù)性測(cè)定

取污染后濃度為25.0 μg·mL-1的含乳飲料樣品各6 份，經(jīng)前處理后進(jìn)行分析，測(cè)得7 種色素的濃度，計(jì)算其RSD，獲得重復(fù)性結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 洗脫梯度的優(yōu)化

不同類別的色素極性差異較大，采用等度洗脫不能得到很好的分離，故采用梯度洗脫。本實(shí)驗(yàn)先參照GB/T 5009.35—2016 方法用甲醇、乙酸銨進(jìn)行梯度洗脫，實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)以下問題：①甲醇濃度變化過快，檸檬黃、新紅不能很好的分離。②亮藍(lán)出峰前后會(huì)出現(xiàn)基線向上漂移，影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。故采用甲醇+乙腈（70+30）的混合液作為流動(dòng)相B，參照GB/T 5009.35—2016 方法進(jìn)行梯度洗脫，使7 種色素得到較好的分離。圖1 為7 種色素在本實(shí)驗(yàn)條件下得到的色譜峰。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

配 制 濃 度 為1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)序列，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為1.00 ～50.0 μg·mL-1，各組分相關(guān)系數(shù)均在0.999 以上，線性關(guān)系良好。線性方程、相關(guān)系數(shù)見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)表

2.3 方法的準(zhǔn)確度

稱取1.0 g 含乳飲料空白樣品，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。測(cè)定回收率結(jié)果見表3。該方法回收率在91.4%～107.5%，說明方法準(zhǔn)確度良好。

表3 回收率實(shí)驗(yàn)表

2.4 方法的重復(fù)性

取污染后濃度為25.0 μg·mL-1的含乳飲料樣品各6 份，進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4，7 種色素的重復(fù)性（RSD值）均＜5%，表明方法的重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性測(cè)定結(jié)果（n=6）表

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，通過優(yōu)化梯度洗脫條件，同時(shí)改進(jìn)含乳飲料樣品的前處理方法，采用ProElut PWA-2 固相萃取柱進(jìn)行前處理，可以達(dá)到簡(jiǎn)化前處理過程、縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、提高實(shí)驗(yàn)回收率的目的。該方法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于含乳飲料中7 種合成著色劑的同時(shí)測(cè)定。