◎ 張?zhí)煨瘢?國，曹小彥

（廣電計量檢測（成都）有限公司，四川 成都 610000）

隨著農(nóng)藥新成分的開發(fā)，雙酰胺類殺蟲劑以其高效、低毒、對環(huán)境友好的獨特優(yōu)勢獲得了廣大種植戶的認(rèn)可，使用量逐年增加[1]。以氯蟲苯甲酰胺、氟苯蟲酰胺等為代表的雙酰胺類殺蟲劑廣泛用于水稻、蔬菜等作物上，這類殺蟲劑具有毒性低、效果好等特點。國內(nèi)限量標(biāo)準(zhǔn)[2]中除了氟苯蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和溴氰蟲酰胺規(guī)定了部分蔬菜水果中臨時限量外，其余雙酰胺類農(nóng)藥并未規(guī)定限量。國家標(biāo)準(zhǔn)中僅有氟苯蟲酰胺有規(guī)定的檢測方法[3]，地方及其他標(biāo)準(zhǔn)中也只有一項地方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大米中氯蟲苯甲酰胺的測定方法[4]，為液相色譜法，其余雙酰胺類農(nóng)藥并無檢測方法，因此，開發(fā)一種高效、準(zhǔn)確便捷的檢測方法迫在眉睫?；诖?，筆者利用QuEChERS 結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5]，建立適用于植物源性食品中多種雙酰胺類農(nóng)藥殘留同時檢測的方法，為農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的風(fēng)險檢測提供更準(zhǔn)確、便捷、環(huán)保的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB 4500 串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX 公司）、ME204E 萬分之一天平（MettlerToledo 公司）、LD5-2B低速離心機（北京京立離心機有限公司）。

氟苯蟲酰胺、氟蟲苯甲酰胺、溴氰蟲酰胺、四氯蟲酰胺、環(huán)丙蟲酰胺和四唑蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品純度為98%，均購自Merck 公司；甲酸、乙腈均為色譜純，購自Thermo Scientific 公司）；N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷鍵合硅膠、石墨化炭黑，均購自CNW 公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取適量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10 mL 容量瓶中，以乙腈溶解并定容，配制成100 mg·L-1的單標(biāo)儲備液。再將單個儲備液用乙腈配制成10 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-18 ℃貯存，有效期1 年。

1.3 樣品前處理

蔬菜、水果和食用菌：稱取均勻試樣10.00 g于50 mL塑料離心管中，加入15 mL 乙腈、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉、2 g 氯化鈉及一顆陶瓷質(zhì)子，蓋上離心管蓋，渦旋震蕩2 min，4 000 r·min-1離心3 min。移取上層乙腈3 mL 溶液，加入到裝有100 mg PSA 的15 mL離心管中，渦旋2 min，4 000 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確移取3 mL 于40 ℃水浴中氮氣緩緩吹至近干，準(zhǔn)確加入1 mL 乙腈+水（3+2）渦旋30 s，過0.22 μm 有機濾膜，待測。

稱取谷物、油料試樣5.00 g（茶葉、香辛料試樣2.00 g）于50 mL 塑料離心管中，加10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min，加入15 mL 1%醋酸乙腈、1 g 檸檬酸鈉、2 g 氯化鈉及一顆陶瓷質(zhì)子，蓋上離心管蓋，渦旋震蕩2 min，4 000 r·min-1離心3 min。移取上層乙腈3 mL溶液，加入到裝有200 mg C18 和200 mg PSA（茶葉、香辛料加入到裝有200 mg C18、200 mg PSA 和10 mg GCB）的15 mL 離心管中，渦旋2 min，4 000 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確移取3 mL 于40 ℃水浴中氮氣緩緩吹至近干，準(zhǔn)確加入1 mL 乙腈+水（3+2）渦旋30 s，過0.22 μm 有機濾膜，待測。

1.4 儀器參考條件

色譜柱：Venusil MP C18 色譜柱（10 cm×2.1 mm，3 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；流速：0.4 mL·min-1；流動相：A 為0.1%甲酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫程序：0 ～0.1 min，10% B；0.1 ～2 min，10%→90% B；2 ～4min，90% B；4 ～4.01 min，90% →10% B；4.01 ～6 min，10% B。

質(zhì)譜測定條件：ESI 正離子掃描；檢測方式：MRM；氣簾氣：32 L·min-1；霧化氣：50 L·min-1；輔助加熱氣：55 L·min-1；碰撞氣：Medium；輔助加熱氣溫度：500 ℃；噴霧電壓：5 500 V。定性離子對、定量離子對、碰撞能量、去簇電壓見表1。

表1 6 種雙酰胺類農(nóng)藥殘留的質(zhì)譜參數(shù)表

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

選用不同的空白樣品進(jìn)行提取、凈化、濃縮和復(fù)溶后，所得到的基質(zhì)空白液作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液，按1.3 節(jié)的操作準(zhǔn)確配制成質(zhì)量濃度為0.2 μg·L-1、0.5 μg·L-1、1.0 μg·L-1、2.0 μg·L-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1和50.0 μg·L-1系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以1.4 的條件進(jìn)行上機測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸計算。

1.6 精密度和回收率測定

本次測試采用空白基質(zhì)配標(biāo)-外標(biāo)法定量，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品溶液在同一儀器條件下檢測。基質(zhì)選擇為白菜、蘋果、大米和綠茶，添加濃度水平為1.0 mg·kg-1、6.0 mg·kg-1和25.0 mg·kg-1，按照1.3 進(jìn)行前處理，針對植物源性食品中不同基質(zhì)可采用不同組合的凈化方式[6]，對于油料基質(zhì)樣品，凈化時選擇以PSA 和C18組合方式凈化，比例為2 ∶1、1 ∶1、1 ∶2。茶葉的上清液分別加入到含量為20 mg、50 mg、100 mg、150 mg 和200 mg 的GCB 凈化管中，重復(fù)處理6 次，以重復(fù)樣品間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）考察方法的精密度，平均加標(biāo)回收率考察方法的準(zhǔn)確度。

1.7 基質(zhì)效應(yīng)測定

以四唑蟲酰胺標(biāo)液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，選擇以溶劑和陰性樣品（白菜、綠茶、大米、蘋果和八角）按照1.3 進(jìn)行前處理得到的基質(zhì)溶液配制校準(zhǔn)曲線，對比在相同條件下的峰面積大小判斷基質(zhì)效應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱及流動相優(yōu)化

對比了相同色譜柱條件下不同流動相類型和梯度對化合物的響應(yīng)以及峰形的影響，在相同的流動相梯度下，含銨鹽流動相會導(dǎo)致峰拖尾，甲醇作為有機相時響應(yīng)低，綜合考慮選擇以乙腈-甲酸水組合最佳。正離子模式下的MRM 色譜圖見圖1。

圖1 正離子模式下的6 種雙酰胺類化合物MRM 色譜圖

2.2 前處理條件優(yōu)化

2.2.1 提取試劑的選擇

水果、蔬菜和食用菌類屬于含水量較大，可以直接加入提取試劑。谷物和茶葉類食品，由于含水量較少，所以在提取前要加入適量水浸泡30 min，提取溶劑也對比了純乙腈和含檸檬酸鹽的緩沖體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在以檸檬酸鹽組成的緩沖體系中提取效率明細(xì)提升。

2.2.2 凈化條件選擇

對于油料基質(zhì)樣品，當(dāng)PSA 和C18 比例為1 ∶1時回收率最好。茶葉含有大量的色素和酚類物質(zhì)，因此在選擇凈化時選擇用組合凈化的方式，但由于雙酰胺類化合物分子結(jié)構(gòu)中有平面結(jié)構(gòu)的苯環(huán)，GCB 會對其產(chǎn)生一定的吸附作用，發(fā)現(xiàn)當(dāng)GCB 使用量為100 mg時整體效果最好。

2.2.3 基質(zhì)效應(yīng)考察

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，選擇的幾類樣品中僅八角的基質(zhì)效應(yīng)是增強的，其余幾類樣品的基質(zhì)效應(yīng)有明顯的減弱，且茶葉的基質(zhì)減弱效應(yīng)最強，所以通過用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，可基本消除基質(zhì)效應(yīng)，不影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性。

2.3 方法的線性范圍和檢出限

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及相關(guān)系數(shù)

結(jié)果表明，6 種雙酰胺農(nóng)殘均在0.2 ～50 μg·L-1線性關(guān)系良好。線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

表2 線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)表

2.3.2 方法檢出限

在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測定，選取信噪比為3 的添加量作為方法檢出限，由表3 可以看出，蔬菜水果和食用菌的檢出限均為0.1 μg·kg-1；谷物油料類方法檢出限均為0.25 μg·kg-1；茶葉和香辛料類樣品檢出限均為1.0 μg·kg-1。

表3 檢出限表

2.4 回收率和精密度

結(jié)果表明，平均加標(biāo)回收率為64.3%～106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%～9.7%，具體結(jié)果見表4。

表4 回收率、精密度表（n=6）

2.5 市售樣品測定

應(yīng)用所建立的分析方法，在成都市區(qū)各大超市隨機購買番茄、大米、花生等樣品各5 份進(jìn)行測定。其中檢測出一批大米中含有氟苯蟲酰胺，其含量為3.89 mg·kg-1。

3 結(jié)論

本實驗建立了一種QuEChERS 技術(shù)結(jié)合色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定植物源性食品中6 種雙酰胺類農(nóng)藥殘留的方法，從檢測種類上彌補了目前已頒布的單一品種檢測標(biāo)準(zhǔn)。同時優(yōu)化了提取試劑，準(zhǔn)確度和精密度好，極大地提高了檢驗效率。