徐永娟，蘇稼航，遲榮香，呂曙光

高血壓是常見的心血管疾病之一，以動脈血壓增高為基本特征，易損傷諸多靶器官，如心、腎、腦等，是影響現(xiàn)代人生活質(zhì)量的主要因素[1-3]。該疾病發(fā)生、發(fā)展與高鹽膳食、肥胖及飲食等諸多因素相關(guān)，目前，學(xué)術(shù)界比較認(rèn)可的致病機制包括內(nèi)分泌學(xué)說、腎素-血管緊張素-醛固酮學(xué)說、遺傳學(xué)說等[4-5]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，高血壓疾病病理因素涉及虛、火、風(fēng)、痰等，造成三臟(脾、肝、腎)功能失常，陰陽失衡。中醫(yī)體質(zhì)辨識，將高血壓病人分為陰性體質(zhì)及陽性體質(zhì)。目前，臨床治療陰性體質(zhì)高血壓病人常以藥物為主，雖可取得一定降壓效果，但缺乏一種預(yù)測治療效果的生物學(xué)標(biāo)志物[6-7]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，炎性因子、內(nèi)皮因子等均參與高血壓疾病的發(fā)生過程，但白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、同型半胱氨酸(Hcy)等標(biāo)志物的靈敏度及特異度較低，而microRNA-92a是一種在內(nèi)皮細(xì)胞特異性高表達的微小RNA，且與動脈粥樣硬化、炎癥反應(yīng)及內(nèi)皮功能障礙緊密聯(lián)系，影響心血管疾病的預(yù)后[8]。目前，臨床上已有關(guān)于血清microRNA-92a與高血壓病人大動脈僵硬度關(guān)系的研究，但將血清microRNA-92a用于評估高血壓治療效果的研究并不多見。鑒于此，本研究監(jiān)測納入的100例陰性體質(zhì)高血壓病人血清microRNA-92a、WBC及Hcy的表達，并分析三者與臍灸聯(lián)合穴位貼敷治療陰性體質(zhì)高血壓病人血壓控制效果的相關(guān)性，以判斷血清microRNA-92a、WBC及Hcy水平是否可以作為血壓控制水平的預(yù)測指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年9月—2018年12月就診于我院的100例陰性體質(zhì)高血壓病人的臨床資料，其中男55例，女45例；年齡51～65(56.75±5.13)歲；病程1～7(4.32±1.25)年；中醫(yī)辨證分型：痰濕內(nèi)阻證21例，腎精不足證28例，氣血兩虛證37例，沖任失調(diào)證14例。根據(jù)治療后血壓控制水平將病人分為4組：A組[血壓<120/80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，20例]、B組[血壓(120～139)/(80～89)mmHg，27例]、C組[血壓(140～159)/(90～99)mmHg，45例]、D組(血壓≥160/100 mmHg，8例)。本研究符合我院醫(yī)學(xué)倫理委員會制定的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國高血壓基層管理指南》[9]中高血壓診治標(biāo)準(zhǔn)。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《高血壓中醫(yī)診療指南》[10]中陰性體質(zhì)辨證標(biāo)準(zhǔn)。①氣血兩虛，主證：口干心煩、眩暈時作、短氣乏力，次證：納呆、面白、心悸失眠、腹脹便溏；②痰濕內(nèi)阻，主證：頭重如裹，次證：少食多寐、嘔吐痰涎、胸脘痞悶，舌脈：脈細(xì)、舌淡；③腎精不足，主證：耳鳴腰酸、心煩不寐，次證：失眠夢遺、心悸健忘等，舌脈：脈細(xì)數(shù)、舌紅；④沖任失調(diào)，主證：婦女更年期前后或月經(jīng)來潮時出現(xiàn)頭痛、頭暈，次證：心煩、失眠，舌脈：舌淡，脈弦細(xì)。

1.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)且為陰性體質(zhì)者；②年齡18～80歲；③對本研究用藥無過敏者；④治療依從性較高；⑤臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①哺乳期、妊娠期女性；②存在繼發(fā)性高血壓者；③伴有嚴(yán)重肝腎功能衰竭、心肺疾病及重度糖尿病者；④嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙。

1.4 治療方法 100例陰性體質(zhì)高血壓病人均接受臍灸聯(lián)合穴位貼敷治療。①臍灸。將茯苓、吳茱萸、肉豆蔻、五味子、補骨脂及白術(shù)等藥方根據(jù)比例混合后并粉碎，密封備用。病人取仰臥位，將臍部充分暴露、消毒，用溫開水將上述粉狀物調(diào)制成上窄下寬圈狀，內(nèi)徑等于臍部直徑，于臍部處填滿藥末并抹勻，將大艾柱置于藥末上，施灸10壯，時間維持在90 min。灸后保留臍部藥末，借助無紡布敷貼固封神闕穴處，4 h后揭下。每日1次，連續(xù)治療2周。②穴位貼敷。按照比例混合補骨脂、熟附塊、吳茱萸、桑寄生、丁香、淫羊藿、麻黃、肉桂等藥方，并超微粉碎，密封備用。在貼敷期間，取適量藥末姜汁調(diào)制成稠糊狀，制作成錐狀藥餅(直徑為20 mm)。將涌泉、內(nèi)關(guān)、三陰交3個穴位充分暴露、消毒，于無紡布(規(guī)格：60 mm×70 mm)中央處，將錐狀藥置入，并固定于穴位上，保留4～6 h，每日1次，連續(xù)治療2周。

1.5 觀察指標(biāo) ①血清microRNA-92a。于治療2周后，根據(jù)Trizol試劑盒說明書，提取血漿總RNA，并檢測RNA提取液的OD260吸光光度值，計算其純度及濃度，通過瓊脂糖凝膠電泳法對RNA完整性進行測定，通過實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測定microRNA-92a的表達，并用CT值計算相對microRNA-92a表達水平，U6 snRNA為內(nèi)參。microRNA-92a引物序列：5′-TATTGCACTTGTCCCGGCCTG-3′。②WBC及Hcy水平。于治療2周后，采集病人3 mL空腹肘靜脈血，3 000 r/min離心(半徑為6 cm，離心10 min)，采用日本東芝生產(chǎn)的TBA-120FR全自動生化分析儀測定WBC及Hcy水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析檢驗，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，經(jīng)雙變量Pearson直線相關(guān)性檢驗血清指標(biāo)與血壓之間的相關(guān)性，根據(jù)曲線下面積(AUC)檢驗各血清指標(biāo)與血壓的評估價值，AUC≤0.5無診斷價值，>0.5且<0.7診斷價值較低，0.7～0.9診斷價值中等，>0.9診斷價值高。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 4組臨床資料比較 4組性別、年齡、病程及中醫(yī)辨證分型比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 4組臨床資料比較

2.2 4組血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比較 microRNA-92a、WBC、Hcy水平比較，D組>C組>B組>A組，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 4組血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比較 (x±s)

2.3 血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平與血壓的相關(guān)性分析 雙變量直線相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，血清microRNA-92a、WBC、Hcy與血壓呈正相關(guān)(P<0.05)。詳見表3。

表3 血清microRNA-92a、WBC、Hcy與血壓的相關(guān)性分析

2.4 ROC曲線檢驗各血清指標(biāo)與血壓水平的評估價值 將陰性體質(zhì)高血壓作為狀態(tài)變量，將各血清指標(biāo)與血壓水平作為檢驗變量，得到ROC曲線，結(jié)果顯示，血清WBC、Hcy預(yù)測陰性體質(zhì)高血壓病人血壓控制水平的AUC分別為0.572，0.668，預(yù)測價值較低；而microRNA-92a預(yù)測陰性體質(zhì)高血壓病人血壓控制水平的AUC為0.781，預(yù)測價值理想。詳見表4、圖1。

表4 ROC曲線結(jié)果

圖1 血清WBC、Hcy、microRNA-92a預(yù)測陰性體質(zhì)高血壓病人血壓控制水平的ROC曲線圖

3 討 論

高血壓是諸多心血管疾病的高危因素，可導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞受到機械性損傷，增加血管壁通透性，進而激活凝血機制，導(dǎo)致管腔狹窄及血管壁增厚，提高動脈粥樣硬化敏感度[11]。高血壓屬于中醫(yī)學(xué)“眩暈”“頭痛”范疇，頭竅為其病位，其主要發(fā)病機制為陰虛陽亢，致使氣血失衡以及火、虛、風(fēng)等病理因素的發(fā)生[12]?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中記載“諸風(fēng)掉眩，皆屬于肝”“腎虛則頭重高搖，髓海不足則腦轉(zhuǎn)耳鳴”，認(rèn)為高血壓與肝、腎等臟器病變有緊密關(guān)聯(lián)，需將陰陽調(diào)節(jié)平衡，使經(jīng)氣運行正常，可有效控制高血壓癥狀，使病情緩解。

中藥穴位貼敷是一種經(jīng)濟便捷、操作簡單的中醫(yī)外治方法，以經(jīng)絡(luò)學(xué)說為主要指導(dǎo)方法，將藥物貼敷在主要穴位上，藥物吸收發(fā)揮作用，調(diào)節(jié)陰陽使其平衡，進而達到治療疾病的目的。本研究采用吳茱萸、補骨脂、肉桂、淫羊藿、桑寄生、丁香等藥物進行穴位貼敷及臍灸，其中吳茱萸可發(fā)揮止痛散寒、疏肝理氣的功效；補骨脂具有補腎補脾、壯陽健胃的功效；肉桂則有補火助陽、引火歸元之功效，可治腎虛作喘、眩暈?zāi)砍嗟劝Y；淫羊藿、丁香具有補肝助陽、強健筋骨之功效；桑寄生有補肝腎的功效。且現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實，在涌泉穴貼敷吳茱萸等藥可降低細(xì)小動脈的外周阻力，在一定程度上可降低血壓[13-15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，臍灸聯(lián)合穴位貼敷治療陰性體質(zhì)高血壓病人的療效明顯，可有效控制其血壓水平。但目前臨床上仍缺乏一種高效預(yù)測治療效果的生物學(xué)標(biāo)志物。因此，客觀、準(zhǔn)確地評估高血壓病人病情，對指導(dǎo)早期合理治療、評估預(yù)后均有重要意義，也是改善病人預(yù)后的關(guān)鍵所在。

高血壓以原發(fā)性多見，具體發(fā)病機制尚未完全闡明，近年來研究報道m(xù)icroRNA與高血壓發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可能通過影響腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)激活及胰島素抵抗、神經(jīng)、血管等而進行血壓的調(diào)控[16]。microRNA屬于一種高度保守及內(nèi)源性的非編碼RNA，一般由19～25個核苷酸構(gòu)成，經(jīng)阻礙靶基因轉(zhuǎn)錄后翻譯參與細(xì)胞生理及病理過程，如增殖、分化、凋亡及免疫反應(yīng)、機體代謝等。臨床研究證實，在心肌梗死、糖尿病及腫瘤等諸多病人中，血清microRNA表達呈特異性，可見該指標(biāo)可成為診治、病情監(jiān)測及判斷預(yù)后的一項新型生物標(biāo)記物[17]。microRNA-92a是一種可以對內(nèi)皮細(xì)胞生長、遷徙、凋亡進行控制的microRNA，在體內(nèi)諸多組織器官生長及發(fā)展調(diào)控中均具有重要意義，當(dāng)病人血管內(nèi)皮功能受到損傷時，血漿中microRNA-92a含量明顯上升，缺乏microRNA-92a基因?qū)p弱組織及細(xì)胞的增生修復(fù)能力[18]。本研究中，血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比較，D組>C組>B組>A組，且均與血壓水平呈正相關(guān)，進一步繪制ROC曲線進行預(yù)測價值分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，microRNA-92a的AUC>0.7，而WBC、Hcy的AUC分別為0.572，0.668，可見，相比WBC、Hcy，microRNA-92a預(yù)測血壓控制水平的價值理想，對指導(dǎo)高血壓病人病情評估、臨床治療等均有較高的應(yīng)用價值。microRNA-92a與高血壓的作用機制體現(xiàn)在以下幾點：①microRNA-92a與激素。高血壓發(fā)病的經(jīng)典途徑為RAAS的激活，而microRNA-92a可經(jīng)諸多途徑對血壓水平產(chǎn)生間接或直接影響，且與RAAS的過度激活相關(guān)[19]。②microRNA-92a與血管。在高血壓的發(fā)生、發(fā)展過程中，血管平滑肌的遷移擴散及不同表型均發(fā)揮重要作用，而microRNA-92a有助于降低血管平滑肌的遷移及增殖。體內(nèi)及體外研究發(fā)現(xiàn)，在血管系統(tǒng)及內(nèi)皮細(xì)胞中，microRNA-92a呈高度表達，可損傷血管生成[20]。胎肝激酶-1、血管性血友病因子及內(nèi)皮型一氧化氮合酶等均為microRNA-92a的靶基因，其可通過對上述靶基因進行靶向調(diào)節(jié)，進而影響內(nèi)皮細(xì)胞功能。此外，高濃度葡萄糖、血管緊張素Ⅱ等均可增加microRNA-92a的表達，其通過作用于靶基因，進而激活內(nèi)皮細(xì)胞炎癥小體，加重內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，促進動脈粥樣硬化病變的發(fā)展[21]。

綜上所述，血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平與臍灸聯(lián)合穴位貼敷治療后陰性體質(zhì)高血壓病人的血壓控制水平密切相關(guān)，其中microRNA-92a用于臨床評估治療效果的準(zhǔn)確度較高，可考慮將其作為療效評估的血清標(biāo)志物。