牛曉方，高一軍，懷寶剛，尹二彥，馬騰洲，李克明，黃利敏，王 培，侯明超，姜偉洲

（1菏澤市立醫(yī)院，山東 菏澤 274031；2平邑縣中醫(yī)醫(yī)院，山東 平邑273300；3山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南250014；4濰坊市中醫(yī)醫(yī)院，山東 濰坊 261041）

牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.），中藥稱(chēng)之為“牡丹皮”，具有清熱涼血，活血化瘀的功效，是一味臨床常用的中藥材，其中黃酮類(lèi)成分含量相對(duì)較高，其具有抗病毒、抗氧化及抗疲勞、抗癌和預(yù)防骨質(zhì)疏松等作用[1-3]。本文采用醇提法測(cè)定6 個(gè)不同產(chǎn)地的牡丹葉總黃酮含量，以期為不同產(chǎn)地牡丹葉中黃酮類(lèi)成分研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料U-1800 型紫外分光光度計(jì)（日本Hitachi公司）；SB25-12DTDN 超聲清洗機(jī)（寧波新芝科技股份有限公司）；Metter Toledo EL2401 電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。牡丹葉(產(chǎn)地分別為1號(hào)地山東菏澤、2 號(hào)地山西運(yùn)城、3 號(hào)地甘肅武威、4 號(hào)地安徽亳州、5 號(hào)地四川墊江、6 號(hào)地安徽銅陵；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究所，批號(hào)B20771，純度98%以上）；亞硝酸鈉、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉等試劑均為分析純。

1.2 方法（1）黃酮測(cè)定方法：蘆丁與Al3+產(chǎn)生黃色絡(luò)合物，在NaNO2的堿性溶液中呈現(xiàn)橙紅色，在波長(zhǎng)400～600 nm 有一最大吸收波長(zhǎng)。根據(jù)朗伯比爾定律，當(dāng)波長(zhǎng)和強(qiáng)度一定的入射光通過(guò)光程長(zhǎng)度固定的有色溶液時(shí)，吸光度A 和物質(zhì)濃度C 呈正比，計(jì)算濃度。（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品5 mg，置10 mL 容量瓶中，加60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成濃度為500 μg/mL 的蘆丁對(duì)照品溶液。（3）樣品的制備：取不同產(chǎn)地牡丹葉樣品，粉碎后稱(chēng)約1g，置100mL錐形瓶中，加入60%乙醇30 mL，密塞，稱(chēng)定重量，80℃水浴加熱處理2 h，放冷后再稱(chēng)定重量，濾過(guò)，用60%乙醇定容至100 mL。（4）檢測(cè)方法：精密吸取供試品溶液0.5 mL，置于10 mL 比色管中，依次加入0.5 mL5%NaNO2，放置5 min后加入0.5 mL10% Al(NO3)3，6 min 后再加入4 mL NaOH 溶液，60%乙醇稀釋至刻度，放置10 min 后，以空白溶液作為參比溶液，在510 nm處測(cè)定吸光度(A)。

2 結(jié)果

2.1 總黃酮含量測(cè)定結(jié)果1～6 號(hào)總黃酮含量分別為：（175.91±3.56）μg/g、（為127.79±2.27）μg/g、（89.31±3.22）μg/g、（100.56±3.82）μg/g、（79.93±1.73）μg/g及（124.52±4.28）μg/g。

2.2 線(xiàn)性關(guān)系 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度在100～500 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與峰面積具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)（1）精密度：1～6號(hào)吸光度分別為0.173、0.176、0.177、0.176、0.175 及0.176，RSD 為0.79%，表明儀器精密度良好。（2）穩(wěn)定性：1～6 號(hào)吸光度分別為0.169、0.171、0.172、0.172、0.173及0.175，RSD為1.16%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。（3）重復(fù)實(shí)驗(yàn)：1～6 號(hào)吸光度分別為0.165、0.167、0.172、0.170、0.168 及0.171 吸光度的RSD為1.56%，該方法重復(fù)性良好。

2.5 加樣回收率 平均回收率為102.66%，RSD 為1.78%，表明該方法準(zhǔn)確性良好。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)牡丹葉中含有黃酮、多糖、多酚、芍藥苷等多種活性成分[4]，而又以黃酮類(lèi)成分含量較高，黃酮類(lèi)成分在臨床上具有較高的應(yīng)用價(jià)值，因而牡丹葉的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值較高，本研究測(cè)定6種不同產(chǎn)地牡丹葉中總黃酮的含量，確定總黃酮含量最高的樣地，對(duì)于后期牡丹葉的綜合開(kāi)發(fā)利用具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)選用60%的乙醇溶液提取樣品中的總黃酮成分，結(jié)果顯示，該方法能較好的提取樣品中的總黃酮成分，并能準(zhǔn)確快速地對(duì)樣品中的總黃酮進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)，不同產(chǎn)地的牡丹葉中總黃酮的含量存在差異，其中以1號(hào)樣地的牡丹葉總黃酮含量最高，并且優(yōu)勢(shì)明顯，后面依次排列為為2號(hào)樣地，6號(hào)樣地，4號(hào)樣地，3號(hào)樣地，以5號(hào)樣地含量最低，提示在牡丹葉總黃酮的開(kāi)發(fā)利用過(guò)程中可著重考慮1 號(hào)樣地。