王小雯，王曉丹

威海市胸科醫(yī)院檢驗科，山東威海 264200

肺結(jié)核疾病以及糖尿病疾病作為兩種嚴重影響公共健康的疾病，其患者數(shù)量在不斷增多。 曾有報道指出[1]，在2016 年， 共計有900 萬名患者診斷出患有結(jié)核病，由結(jié)核病導致死亡的患者共計150 萬。 誘發(fā)結(jié)核病的影響因素主要有吸煙、腎臟疾病、糖尿病、飲酒、家庭接觸等，其中男性發(fā)病率高于女性發(fā)病率。 有研究資料[2]曾指出， 在18～80 歲的成年人群體中，100 個人中一般有9 個人患有糖尿病，且多項研究均指出，糖尿病可以在肺結(jié)核患者中作為一個獨立的誘發(fā)因素存在， 若糖尿病患者的血糖控制效果不佳， 那么其誘發(fā)肺結(jié)核的概率就會相應的增高。 在臨床診斷中，肺結(jié)核合并糖尿病患者沒有典型的臨床癥狀， 且二者的臨床影像學也不典型，在診斷中容易誤診，因此需要該類患者尋找一個快速便捷的診斷方法，以便實施相應的治療措施。 為此， 該次研究于2017 年10 月—2019 年4 月選擇120例患者， 選用結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗的檢測方法對比臨床常用的其他診斷方法， 以分析結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗在肺結(jié)核合并糖尿病患者的臨床診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

通過抽簽選出收治的60 例（非肺結(jié)核）糖尿病患者作為該次研究的一號組， 同時選取同時期在該院確診的60 例患有肺結(jié)核合并糖尿病的患者作為該次研究的二號組。 一號組中，男性患者45 例，女性患者15例；最大年齡為80 歲，最小年齡為29 歲，平均年齡為（53.17±10.27）歲。 二號組中，男性患者47 例，女性患者13 例；最大年齡為81 歲，最小年齡為28 歲，平均年齡為（53.44±10.18）歲，60 例患者全部為初次確診患有肺結(jié)核疾病， 且排除臟器功能不全患者以及妊娠期或者精神不正常患者。 該次研究選取的兩組患者的基本臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標準

糖尿病診斷標準通過2017 年美國糖尿病協(xié)會制定的診斷標準進行診斷。

肺結(jié)核疾病診斷通過《肺結(jié)核診斷和治療指南》中的診斷標準進行診斷。

1.3 方法

1.3.1 結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法 采集患者3 mL 靜脈血液，提取PBMC，根據(jù)試劑盒使用說明，在培養(yǎng)顯色之后， 將細胞因子分泌處形成的斑點進行詳細觀察記錄，以檢測T 淋巴細胞的數(shù)量。 所有患者在初診當日采集肝素鋰抗凝靜脈血6 m L, 4 h 內(nèi)用Ficoll 淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC) , 配置250 萬細胞/mL 的標準溶液。 取出微量板, 以細胞培養(yǎng)液為陰性對照, 陽性對照加入植物血凝素, 剩余2 孔分別加入50 μL 抗原A 和抗原B, 分別含抗原A (ESAT-6) 和抗原B (CFP-10) , 每孔加入含有25 萬PBMC 的上述細胞懸液100μL, 將微量板置于37℃、5%CO2孵育箱16～20 h 后用磷酸鹽緩沖液 (PBS) 洗板, 加入酶標二抗2～8℃冰箱反應1 h 后用PBS 洗板。 最后加入顯色底物, 室溫暗室反應7 min 后, 蒸餾水沖洗終止反應。 根據(jù)抗原A和(或) 抗原B 的反應孔的斑點數(shù)進行判斷。T-SPOT 根據(jù)試劑盒使用說明進行結(jié)果判定：當陰性對照孔斑點數(shù)0～5 個時, （抗原A 或B 孔斑點數(shù)）-陰性對照孔斑點數(shù))≥6 時, 判為陽性; 當陰性對照孔斑點數(shù)6～10 個時,(抗原A 或B 孔斑點數(shù)) ≥2* 陰性對照孔斑點計數(shù),判定為陽性; 如不符合上述標準, 且陽性對照孔正常時檢測結(jié)果為陰性。 陽性結(jié)果提示患者體內(nèi)存在結(jié)核菌特異的效應T 淋巴細胞;陰性結(jié)果提示患者體內(nèi)不存在結(jié)核菌特異的效應T 淋巴細胞。

1.3.2 痰抗酸桿菌涂片檢測法 采集患者即時痰、 夜間痰、晨痰,選擇萋-尼氏染色法, 染液為珠海貝索生物技術(shù)有限責任公司生產(chǎn)的抗酸染色液，經(jīng)萋-尼氏抗酸染色后顯微鏡下觀察,不間斷地觀察視野300 個,抗酸桿菌菌數(shù)：300 個視野抗酸桿菌/1 條-8 條、(4+) 、 (3+) 、(2+)、(1 +) , 則說明為抗酸桿菌陽性。 未見抗酸抗菌則說明抗酸桿菌陰性。

1.3.3 結(jié)核菌素試驗法 將0.1 mL 的結(jié)核菌素皮下注射于患者的前臂掌側(cè)前三分之一皮膚內(nèi), 注射后48 h觀察一次，72 h 判讀結(jié)果，測量注射局部紅腫處的硬結(jié)橫與縱徑，取其均值為硬結(jié)直徑。 ＜5 mm 為陰性(-)，5～9 mm 為弱陽性(+)，10～19 mm 為陽性(++)，≥20 mm 或局部出現(xiàn)水泡、壞死、潰瘍或有淋巴結(jié)炎，均為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計方法

該次研究選用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件分析研究所得數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[n(%)]表示，組間差異比較以χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗結(jié)果

一號組患者中共計57 名患者診斷為陰性，臨床診斷靈敏度為95%，二號組患者中共計58 名患者診斷為陽性，臨床診斷靈敏度為97%，見表1。

表1 結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗檢測結(jié)果對比[n（%）]

2.2 痰抗酸桿菌涂片檢測結(jié)果

一號組患者中共計58 例患者診斷為陰性，臨床診斷靈敏度為97%，二號組患者中共計23 例患者診斷為陽性，臨床診斷靈敏度為38%，見表2。

表2 痰抗酸桿菌涂片檢測結(jié)果對比[n（%）]

2.3 結(jié)核菌素試驗結(jié)果

一號組患者中共計48 名患者診斷為陰性，臨床診斷靈敏度為80%，二號組患者中共計37 名患者診斷為陽性，臨床診斷靈敏度為62%，見表3。

表3 結(jié)核菌素試驗檢測結(jié)果對比[n（%）]

2.4 不同診斷方法結(jié)果

結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗檢測在肺結(jié)核合并糖尿病患者中， 檢測為陽性的靈敏度顯著高于痰抗酸桿菌涂片檢測的靈敏度（P＜0.05）；結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗檢測在肺結(jié)核合并糖尿病患者中， 檢測為陽性的靈敏度顯著高于結(jié)核菌素試驗的檢測靈敏度（P＜0.05）；結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法的真陰性率與痰抗酸桿菌涂片檢測法以及結(jié)核菌素試驗法相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3 討論

肺結(jié)核疾病和糖尿病疾病在臨床中， 都是屬于常見的疾病種類之一， 兩組疾病能夠相互聯(lián)系， 相互轉(zhuǎn)化。 患有糖尿病的患者，容易誘發(fā)結(jié)核疾病，而患有結(jié)核疾病的患者又容易加重糖尿病病情。 相比于單純的患有肺疾病疾病的患者， 肺結(jié)核合并糖尿病疾病的患者，其病情發(fā)展速度要快的多，且病變范圍也要比單一的肺結(jié)核患者廣，此外，在臨床治療中，為難治性肺結(jié)核，治療較為困難。 隨著我國經(jīng)濟的飛速發(fā)展，人們的生活水平得到顯著提高的同時， 患有糖尿病疾病的患者數(shù)量也與日俱增，有相關(guān)研究資料指出[3-6]，在我國，20 歲以上的群體患有糖尿病疾病的概率為10%， 即每100 個人中，就有約10 個人可能患有糖尿病疾病。因此針對患有糖尿病疾病的患者， 加強對其結(jié)核感染的診斷力度，對患者的預后具有重大意義。

在臨床診斷中， 細菌學診斷是結(jié)核疾病的診斷金標準，但是需要較長的周期對細菌進行培養(yǎng)，且診斷期間容易受實驗條件以及主觀因素等影響， 診斷陽性率相對較低。 而結(jié)核菌素試驗作為臨床診斷的一種傳統(tǒng)診斷方法，具有操作簡便以及價格便宜等優(yōu)點，但是其缺點是容易受到機體免疫狀態(tài)或者是卡介苗接種等因素影響產(chǎn)生假陽性， 特別是對于處于高糖狀態(tài)的糖尿病合并肺結(jié)核患者，由于患者的免疫功能受損較重，容易使得結(jié)核菌素試驗結(jié)果呈現(xiàn)為假陰性[7-9]。

結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗是最近幾年在結(jié)核類疾病中的臨床診斷中，應用比較廣泛的一種診斷方法，但是在肺結(jié)核合并糖尿病患者群體中的診斷研究報道還相對較少。 在該次研究中，對該院收治的60 例肺結(jié)核合并糖尿病的患者分別給予了結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法、 結(jié)核菌素試驗法以及痰抗酸桿菌涂片法進行診斷，分析此3 種診斷方法的診斷結(jié)果，結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法的檢測靈敏度要高于痰抗酸桿菌涂片檢測法以及結(jié)核菌素試驗法的靈敏度（P＜0.05），同時其真陰性率差異較小， 說明結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法不易受機體免疫功能影響。 除此之外，由于在實驗中ESAT-6 的應用以及CFP-10 的應用，有效降低了非結(jié)核分枝桿菌以及卡介苗的影響， 因此針對免疫功能受損的患者， 采用結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法進行診斷結(jié)核分枝桿菌感染的真陰性率以及靈敏度均要大大高于結(jié)核菌素試驗法。且也有研究文獻資料[10-11]證實，結(jié)核桿菌T細胞斑點實驗法在結(jié)核疾病中具有良好的診斷效果，能夠為臨床診斷以及治療帶來參考。

綜上所述，針對肺結(jié)核合并糖尿病患者，在臨床診斷中，應用結(jié)核桿菌T 細胞斑點實驗法進行診斷，具有較高的診斷靈敏度，可為臨床診治提供參考。