羅 云，陳 霖，張雪漣，蘭 進(jìn)，魏 菲，孫曉波

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

中藥材高質(zhì)量發(fā)展是中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)振興必經(jīng)之路，高質(zhì)量藥材離不開(kāi)其核心功效評(píng)價(jià)，即基于主要成分的最主要藥理作用評(píng)價(jià)。靈芝是多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss. ex Fr.) Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao，Xu et Zhang的干燥子實(shí)體，是我國(guó)最知名的藥用真菌物種之一，是極具代表性的中藥材大品種。靈芝在上古時(shí)期稱(chēng)為“仙草”、“瑞草”；在《神農(nóng)本草經(jīng)》中稱(chēng)為“神芝”；秦時(shí)稱(chēng)為“還陽(yáng)草”；東漢稱(chēng)為“靈草”?，F(xiàn)代對(duì)靈芝的利用除了子實(shí)體以外，其生殖細(xì)胞即靈芝孢子粉也被大量使用。靈芝的藥理活性早就在公元前100年被《神農(nóng)本草經(jīng)》所證實(shí)，此后東晉《抱樸子》、唐朝《新修本草》、梁代《神農(nóng)本草經(jīng)集注》等，均認(rèn)為靈芝是最具促進(jìn)健康、增加活力和延長(zhǎng)壽命的中藥[1]。靈芝具有多種藥理活性，例如具有防治心血管疾病、保肝、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗菌等作用[2]。靈芝三萜作為靈芝中主要的化學(xué)成分，也顯現(xiàn)出很好的藥理活性。本文就針對(duì)靈芝三萜抗腫瘤、抗炎、保肝、保腎、調(diào)節(jié)免疫、降血脂、降血糖、抗菌的內(nèi)容進(jìn)行綜述。

1 抗腫瘤作用

靈芝三萜類(lèi)化合物是靈芝的重要活性成分，具有一定的抗腫瘤活性。相較于靈芝多糖間接作用于腫瘤細(xì)胞，靈芝三萜對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒性作用[2]。不同種的靈芝三萜類(lèi)化合物的抗腫瘤活性不同，實(shí)驗(yàn)得出低極性三萜的體外抗腫瘤活性明顯強(qiáng)于中等極性三萜[3]。靈芝三萜可通過(guò)以下機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用：①通過(guò)破壞膜結(jié)構(gòu)的完整性來(lái)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。徐賓等[4]研究發(fā)現(xiàn)，靈芝酸A能降低前列腺癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄激活因子的表達(dá)，并通過(guò)引發(fā)細(xì)胞線粒體功能障礙釋放過(guò)量活性氧引起細(xì)胞生物膜損傷，最終誘發(fā)細(xì)胞凋亡。Shao等[5]的研究中，靈芝酸D可下調(diào)食管鱗癌細(xì)胞mTOR信號(hào)通路中的PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白表達(dá)，從而誘導(dǎo)了該細(xì)胞的凋亡與細(xì)胞自噬；② 抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。不同濃度乙醇提取的靈芝三萜均具有良好的抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖能力和阻滯癌細(xì)胞遷移能力[6]。蔡蕤[7]研究發(fā)現(xiàn)，靈芝三萜通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)節(jié)下游靶標(biāo)表達(dá)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，引起細(xì)胞凋亡。Xia等[8]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明靈芝酸DM通過(guò)抑制Akt/mTOR活性誘導(dǎo)自噬性細(xì)胞死亡，進(jìn)而抑制非小細(xì)胞肺癌的形成。

2 抗炎作用

炎癥是機(jī)體對(duì)刺激的一種自動(dòng)防御反應(yīng)，可由多種因素引起，與人體的免疫反應(yīng)息息相關(guān)。研究表明，靈芝三萜類(lèi)化合物具有抗炎的藥理活性。靈芝三萜可以通過(guò)以下方式抗炎：① 調(diào)節(jié)細(xì)胞炎性因子的表達(dá)。靈芝酸A能夠通過(guò)調(diào)節(jié)法尼酯X受體(farnesoid-X-receptor，F(xiàn)XR)信號(hào)通路提高抗炎因子白介素4(interleukin 4, IL-4)，抑制促炎因子IL-1β和IL-6的表達(dá)，改善多發(fā)性硬化癥[9]。② 通過(guò)影響炎性信號(hào)通路。邊子堯[10]在鹿角靈芝、赤芝、紫芝的三種甲醇提取物中進(jìn)一步提取9種三萜類(lèi)化合物并進(jìn)行體外抗炎效果檢測(cè)，篩選出20-OH lucidericN、ganodermanontriol、Ganoderiol A和Ergosterol peroxide 4種高抗炎化合物，通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)TLR4、Myd88基因的表達(dá)以及通過(guò)Western blot檢測(cè)核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)通路的關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平，證明了4種代表化合物均能抑制Myd88基因表達(dá)，且抑制脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘發(fā)的NF-κB的激活，特別表現(xiàn)在抑制IκB-α降解以及抑制IκB-α和p65磷酸化，可知提取出的9種三萜類(lèi)化合物均有抗炎效果，且4種高抗炎化合物效果更明顯。王超群[11]利用腹腔注射LPS構(gòu)建的小鼠急性肺損傷模型，通過(guò)計(jì)數(shù)肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)，測(cè)定肺組織、血清、肺泡灌洗液中的腫瘤壞死因子α(tumour necrosis factor α，TNF-α)、IL-1β含量和肺組織中MPO含量，以及Western blot分析炎性信號(hào)通路的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)靈芝三萜可以減少肺組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)及陽(yáng)性巨噬細(xì)胞的聚集，抑制MAPK和NF-κB炎性信號(hào)通路中特征性蛋白p-p38、p-ERK1/2、p-JNK和IκB的表達(dá)，降低LPS致小鼠肺損傷中的NF-κB和AP-1中的DNA結(jié)合活性，表現(xiàn)出一定的抗炎性[11]。Wu等[12]的研究中，靈芝三萜類(lèi)提取物對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞中脂多糖誘導(dǎo)的一氧化氮產(chǎn)生有效抑制作用。靈芝三萜類(lèi)對(duì)脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中IL-6和IL-1β的產(chǎn)生以及iNOS, COX-2和NF-κB的表達(dá)呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性降低，IκB-α和IKK-β的磷酸化被阻斷。

3 保肝作用

Peng等[13]研究表明，靈芝三萜類(lèi)中的部分提取物對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肝星形細(xì)胞的增殖具有抑制作用，表現(xiàn)出抗肝纖維化活性。我們的發(fā)現(xiàn)不僅豐富了靈芝三萜類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)多樣性，而且表明靈芝三萜類(lèi)化合物在肝臟保護(hù)中也起著重要作用。Chiu等[14]的研究中，經(jīng)臨床給藥組和安慰劑組對(duì)比，接受治療者，肝損傷形態(tài)正?；`芝三萜類(lèi)和多糖類(lèi)可通過(guò)減弱自由基的過(guò)度產(chǎn)生，從而實(shí)現(xiàn)抗氧化、抗衰老、保肝的功效[14]。此外，靈芝三萜還可修復(fù)因鵝膏毒肽中毒引起的小鼠肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的破壞從而對(duì)肝細(xì)胞損傷起到保護(hù)作用。金屬鎘會(huì)對(duì)肝臟等組織器官造成損害，而靈芝三萜類(lèi)化合物可明顯減少雞肝中鎘的積累同時(shí)降低了炎癥細(xì)胞因子和熱激蛋白的表達(dá)水平[15]。

4 保腎作用

鎘在人體內(nèi)大量積蓄會(huì)對(duì)腎臟造成嚴(yán)重的損傷以至于腎功能出現(xiàn)障礙，腎臟的臟器系數(shù)也會(huì)增加，靈芝三萜能減少鎘在腎臟中的積蓄并提高腎臟組織的抗氧化能力、抑制相關(guān)炎癥因子的表達(dá)、降低了熱休克蛋白的表達(dá)量[10]。常染色體顯性多囊腎病是一種常見(jiàn)的遺傳性疾病，特征表現(xiàn)為腎囊腫，研究表明靈芝三萜可明顯減少囊腫的形成并能促進(jìn)犬腎細(xì)胞細(xì)胞中的上皮小管的形成，其機(jī)制是通過(guò)下調(diào)Ras/MAPK信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的[16]。

5 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)

靈芝三萜化合物可以明顯抑制肥大細(xì)胞釋放組胺，在不影響Th1型細(xì)胞因子分泌IL-2和IFNγ的同時(shí)抑制T細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-5，并抑制NF-κB活化，靈芝三萜化合物也可激活巨噬細(xì)胞NF-κB途徑，從而促進(jìn)T細(xì)胞分泌IL-2，但對(duì)于T細(xì)胞分泌IL-4只有在靈芝三萜高劑量時(shí)才會(huì)有所影響[17]。Radwan等[18]證實(shí)靈芝酸A不僅能夠誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡，但也可以通過(guò)減少髓源性抑制細(xì)胞，并提高抗原呈遞和T細(xì)胞識(shí)別，從而減緩淋巴瘤的形成。

6 降血脂降血糖

靈芝酸是從靈芝子實(shí)體中分離出的一種羊毛烷型三萜，其特有的結(jié)構(gòu)能夠明顯地抑制醛糖還原酶的活性，而醛糖還原酶可將葡萄糖轉(zhuǎn)化為山梨糖醇，山梨糖醇的積累可引發(fā)糖尿病的并發(fā)癥。靈芝酸能夠通過(guò)抑制α葡糖苷酶和α淀粉酶，進(jìn)而調(diào)節(jié)腸道菌群、炎癥反應(yīng)改善鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的1型糖尿病[19]。靈芝醇類(lèi)是由三氯甲烷所萃取到的中性產(chǎn)物，其中包括麥角甾醇和靈芝甾醇B；α-葡萄糖苷酶具有將二糖和低糖轉(zhuǎn)化為位于小腸上皮的葡萄糖的功能，而α-葡萄糖苷酶抑制劑是治療II型糖尿病的藥物，研究結(jié)果表明靈芝醇B具有抑制α-葡萄糖苷酶活性，且作用高于抑制餐后血糖水平的α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖[21]。因此，靈芝酸和靈芝醇都具有調(diào)節(jié)血糖的作用。

7 抗菌

Liu等[20]從靈芝子實(shí)體中化學(xué)分離鑒定出1種新的三萜化合物對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌具有顯著的抑菌活性。Pu等[21]從靈芝子實(shí)體中分離得到21個(gè)高氧羊毛烷型三萜化合物并對(duì)它們進(jìn)行耐藥研究，這些化合物能提高白色念珠菌對(duì)氟康唑這種常用的抗真菌藥物的敏感性，其中7個(gè)化合物表現(xiàn)為較強(qiáng)的抗真菌活性，其mic50值為3.8—8.8 mg·L-1。靈芝中可以分離出樹(shù)舌環(huán)氧酸和甾醇類(lèi)化合物，經(jīng)乙?；鸵一梢缘玫饺苹衔锏难苌?，經(jīng)微稀釋法研究其對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、毛蘚菌的抗菌、真菌活性，結(jié)果顯示三萜化合物的衍生物具有與天然化合物一樣的抗菌效果[22]。

8 展望

靈芝在我國(guó)達(dá)到了三千多年的藥用歷史，也是我國(guó)民間常用的傳統(tǒng)名貴中藥材，對(duì)維護(hù)人體健康發(fā)揮著重要作用。2020年12月，市場(chǎng)監(jiān)督管理總局將破壁靈芝孢子粉等保健食品納入原料目錄，表明靈芝在我國(guó)保健食品市場(chǎng)占有重要地位[23]。同時(shí)，靈芝已被《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》收錄，表明靈芝在國(guó)際上也得到了廣泛的使用[24-25]。靈芝三萜是靈芝眾多化學(xué)成分中最主要的活性成分，近年來(lái)關(guān)于靈芝三萜在抗腫瘤、抗炎、保肝護(hù)肝、保腎、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、降血脂降血糖、抗菌等方面具有優(yōu)異的藥用潛力，是良好的藥食同源物質(zhì)，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。盡管?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)靈芝三萜的藥理作用的研究已經(jīng)深入到分子水平，但其中多靶點(diǎn)的復(fù)雜分子調(diào)控機(jī)制仍不明確，還需要更多的科研工作者進(jìn)一步探究。通過(guò)本文總結(jié)來(lái)看，雖然靈芝三萜類(lèi)成分藥理活性研究涉及多個(gè)方面，但研究報(bào)道最多的是三萜的抗腫瘤作用，表明抗腫瘤可能是其核心功效。另外，研究靈芝三萜藥理作用主要集中于單一成分如靈芝酸A，靈芝酸D，靈芝醇F等，或者提取物的藥理活性研究；而忽視了三萜中各類(lèi)成分比例(如靈芝酸和靈芝醇的比例)藥理作用研究，即在什么比例下，靈芝三萜的抗腫瘤活性最強(qiáng)。只有通過(guò)核心功效評(píng)價(jià)才能定位什么樣的靈芝才是高品質(zhì)的，才能進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)中藥材高質(zhì)量發(fā)展的目標(biāo)。