田淑娟，劉欣宇，賈永宏，張 眉, 胡建宏

(1.白水縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 白水 715600；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院；3.陜西省畜牧產(chǎn)業(yè)試驗(yàn)示范中心;4.陜西省畜牧技術(shù)推廣總站)

在現(xiàn)代家畜的繁育過程中，精液保存技術(shù)的廣泛應(yīng)用極大地提高了良種畜禽的種用價(jià)值，使畜牧業(yè)取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。由于豬精子質(zhì)膜中膽固醇/磷脂較低的比值使其對(duì)低溫環(huán)境十分敏感，大多數(shù)生豬養(yǎng)殖場人工授精時(shí)所用的精液以液態(tài)常溫保存為主，而豬精液保存過程中又常許多因素的影響，活性氧(ROS)的累積是目前面臨的最重要的問題之一。因此，在精液常溫保存稀釋液中，適當(dāng)添加抗氧化劑及其他保護(hù)成分有助于改善精液品質(zhì)，有效降低所受活性氧自由基的攻擊。

近些年有研究表示，在精液常溫保存過程中，精液品質(zhì)會(huì)受到多方面因素影響，如溫度、pH、滲透壓、營養(yǎng)水平、稀釋倍數(shù)等，其中影響最大的是ROS的累積，當(dāng)ROS累積過量時(shí)，會(huì)攻擊精子膜質(zhì)系統(tǒng),使其脂質(zhì)發(fā)生過氧化損傷，同時(shí)還會(huì)攻擊精子的DNA和蛋白質(zhì)，也能導(dǎo)致精子產(chǎn)生病理損傷，影響精子的正常功能。而抗氧化劑對(duì)于消除或減弱ROS對(duì)精子細(xì)胞的不利影響，保護(hù)精子質(zhì)膜、頂體和DNA的完整性方面具有顯著的作用。因此，本文通過綜述在稀釋液中添加不同的抗氧化劑后對(duì)豬精液品質(zhì)的影響，以期為豬精液常溫保存中抗氧化劑的推廣應(yīng)用提供理論參考。

1 酶類抗氧化劑

精液中正常存在的抗氧化酶體系能夠改善精液品質(zhì)，其中包括過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)對(duì)維持家畜精子活力和運(yùn)動(dòng)能力等方面發(fā)揮著重要作用。酶類抗氧化劑的作用機(jī)理是能夠降低精子質(zhì)膜脂質(zhì)過氧化損傷，減弱了ROS對(duì)公豬精子質(zhì)量的不利影響，延長了精子的有效保存時(shí)間。朱林煒等研究發(fā)現(xiàn)，在Modena稀釋劑中添加200 IU/mL 或300 IU/mL SOD在BTS稀釋液中時(shí)都可以有效提高精液保存效果。Zhang等發(fā)現(xiàn)，在17℃保存條件下，在Modena稀釋液中添加不同濃度的SOD能夠改善精子活力、保存時(shí)間、質(zhì)膜完整性和總抗氧化能力(T-AOC),其中添加濃度為200 IU/mL效果最好，可顯著降低精子的氧化應(yīng)激損傷，有效改善精液品質(zhì)。Gangwar等研究發(fā)現(xiàn)，將還原型GSH添加到稀釋液中的處理組表現(xiàn)出在精子活力、線粒體功能和質(zhì)膜完整性方面均優(yōu)于對(duì)照組。張斌等在豬的冷凍精液中添加濃度為5 mmol/L的GSH時(shí)發(fā)現(xiàn)，精液冷凍后活力、頂體完整率以及SOD活性均顯著提高，且丙二醛(MDA)含量較對(duì)照組顯著降低，有效提高了精液品質(zhì)。

2 維生素類抗氧化劑

適當(dāng)?shù)奶砑泳S生素可以有效地減緩精液在常溫保存過程中由于ROS過量積累而對(duì)精子造成的損傷，保護(hù)精子頂體完整性，進(jìn)而改善精液品質(zhì)。翟靜雯等在精液冷凍保存過程中發(fā)現(xiàn)，添加維生素C到稀釋液中，可有效降低精液氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的破壞并提高DNA的完整性。黃俻華的研究發(fā)現(xiàn)，在豬精液稀釋液中添加600 μg/mL的維生素C可以顯著提高解凍精子的活力、線粒體活性、質(zhì)膜和頂體完整性、存活時(shí)間以及抗氧化物酶的活性，同時(shí)明顯降低精子畸形。馬紅等發(fā)現(xiàn)，稀釋液中添加不同的維生素類物質(zhì)能夠明顯延長精子保存時(shí)間和提高質(zhì)膜完整性，添加維生素E的民豬精液在保存5 d后精子活率為50.8%，具有更優(yōu)的保存效果。Hamedani等發(fā)現(xiàn)，維生素B12對(duì)提高精子活力、運(yùn)動(dòng)性能以及維持正常生理狀態(tài)均具有顯著影響，維生素P在精液常溫或低溫保存過程中也表現(xiàn)出積極的影響。

3 植物性提取物抗氧化劑

植物性提取物具有良好的抗氧化能力，可以降低體外保存過程中精子的氧化應(yīng)激損傷。白藜蘆醇是一種天然的非黃酮類多酚類復(fù)合物，能通過清除豬精子內(nèi)的ROS，降低氧自由基對(duì)精子的損傷作用，在精液的常溫和低溫保存中都具有一定的保護(hù)作用。范曉騰在精液常溫保存中發(fā)現(xiàn)，將濃度為50 μmol/L的白藜蘆醇添加到稀釋液中達(dá)到了最佳的保存效果，而在冷凍保存時(shí)，白藜蘆醇的最佳濃度為150 μmol/L。中草藥提取物淫羊藿苷具有較好的抑菌作用并可以清除ROS。陳美杰研究發(fā)現(xiàn)，在稀釋液中單獨(dú)添加25 μmol/L的丹參素和40μmol/L的迷迭香酸時(shí)，精子活率分別達(dá)到61.83%和66.47%，精液有效保存時(shí)間延長至9 d。靈芝多糖作為靈芝提取物的主要成分之一，也具有良好的抗氧化能力，能夠保護(hù)細(xì)胞遭受氧化損傷。吳琳研究發(fā)現(xiàn)，添加0.4 mg/mL靈芝多糖在常溫稀釋液中，保存6 d后豬精子活率及頂體完整性顯著提高，精液品質(zhì)有效改善。

4 其他抗氧化劑

隨著人們對(duì)精液保存技術(shù)的不斷深入探索，更多具有抗氧化特性的物質(zhì)也被應(yīng)用于精液常溫保存，除了抗氧化酶，維生素類抗氧化劑以及植物提取物抗氧化劑之外，近年發(fā)現(xiàn)殼聚糖、沒食子酸、激素類物質(zhì)等同樣具有良好的抗氧化能力，常被用于豬精液的常溫保存。殼聚糖是生命體中重要的堿性多糖，其結(jié)構(gòu)類似于纖維素等大分子，且自身的游離氨基酸具有還原性。謝東淇將0.1 g/L殼聚糖添加于常溫保存稀釋液中，6 d后豬精子活率為61.56%，精子的質(zhì)膜、頂體完整率和T-AOC活性得到顯著提升，同時(shí)精液中的MDA含量和細(xì)菌含量顯著降低。石武等研究發(fā)現(xiàn)，常溫保存6 d后，稀釋液中添加0.1 g/L殼聚糖組豬精子質(zhì)膜完整率為68.67%，質(zhì)膜完整率相較于對(duì)照組的56.42%顯著提高。沒食子酸(GA)是一種天然酚酸，有較強(qiáng)的抗氧化性。趙琦研究發(fā)現(xiàn)，9 mg/L的沒食子酸對(duì)豬精液的常溫效果最好，能顯著提高保存后精子活率、質(zhì)膜和頂體完整性、線粒體模電位等，且精子活率在保存第10 d活率達(dá)到62.9%極顯著高于對(duì)照組，延長了常溫下精液的保存時(shí)間。褪黑素和多巴胺等激素類物質(zhì)被廣泛應(yīng)用于精液常溫保存中以提高精子細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性。許春榮發(fā)現(xiàn)，與其他處理組相比，在豬精液稀釋液中添加0.01 mmol/L褪黑素時(shí)，具有最好的保存效果。胡傳水研究發(fā)現(xiàn)，稀釋液中添加1 mmol/L鹽酸多巴胺能夠有效延長精液保存時(shí)間，顯著提高了精液保存質(zhì)量。目前，豬精液的常溫保存技術(shù)仍在不斷的發(fā)展與完善，為了實(shí)現(xiàn)家畜精液的長期、快速保存，更多抗氧化劑有效應(yīng)用仍需人們進(jìn)行更深入的探究。