周 娜

（北大醫(yī)療魯中醫(yī)院藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)辦公室，山東 淄博 255400）

本文將比較不同BAC檢測(cè)方法間的優(yōu)缺點(diǎn)，并結(jié)合我院2017年以來(lái)在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心開展的50余項(xiàng)BE試驗(yàn)呼氣乙醇含量檢測(cè)流程，探討如何建立符合GCP要求的BE試驗(yàn)BAC檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作流程[1]。

1 BE試驗(yàn)與BAC檢測(cè)

為防止不符合入組條件的受試者進(jìn)入試驗(yàn)，BE試驗(yàn)方案一般明確將篩選前嗜酒（每周飲用超過(guò)14個(gè)單位的乙醇：1單位=啤酒285 mL，或烈酒25 mL，或葡萄酒100 mL）或試驗(yàn)期間不能停止飲用任何乙醇制品列為受試者的排除標(biāo)準(zhǔn)。在試驗(yàn)篩選期，除通過(guò)詢問(wèn)受試者了解其飲酒情況外，BAC檢測(cè)便成為客觀評(píng)價(jià)受試者是否符合試驗(yàn)入組條件的必要措施[2-3]。此外，在試驗(yàn)期間，為保證試驗(yàn)藥物的體內(nèi)代謝不受乙醇干擾，每周期受試者入?、衿诓》壳耙残枰M(jìn)行BAC檢測(cè)。

2 BAC檢測(cè)方法

BAC檢測(cè)可分為直接檢測(cè)和間接檢測(cè)2種方法，所謂直接檢測(cè)就是抽取被檢測(cè)人的血液進(jìn)行BAC檢測(cè)的方法，目前國(guó)內(nèi)報(bào)道的常用方法包括化學(xué)法、酶法和氣相色譜法[4-5]?；瘜W(xué)法不需要精密儀器，操作簡(jiǎn)單，成本低，在一般實(shí)驗(yàn)室即可開展，但是該法靈敏度較低，準(zhǔn)確性易受還原物質(zhì)的影響。酶法可定量檢測(cè)乙醇含量，但易受酶的反應(yīng)溫度及保存條件等影響，人體內(nèi)的某些酶或藥物等影響試驗(yàn)結(jié)果。上述2種檢測(cè)方法受靈敏度和準(zhǔn)確性低的限制，不宜用于臨床試驗(yàn)BAC檢測(cè)中。氣相色譜法因其靈敏度高（可以檢測(cè)出10-6至10-9級(jí)的乙醇含量）、選擇性好（能把乙醇分離出來(lái)并做定量分析）、分析速度快（一般每個(gè)樣品的分析時(shí)間在5 min內(nèi)）、易于自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)，在BE試驗(yàn)BAC檢測(cè)方面被認(rèn)為是最科學(xué)的方法。目前市售的血液乙醇含量專用氣相色譜儀，符合中華人民共和國(guó)行業(yè)規(guī)范技術(shù)要求、中華人民共和國(guó)司法部司法技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)：GA/T842-2009GA/T1073-2013行業(yè)技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜-火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，可直接測(cè)出血液乙醇含量。但出于儀器價(jià)格、使用率等實(shí)際情況考慮，很多開展BE試驗(yàn)的機(jī)構(gòu)無(wú)法配備氣相色譜儀，不能進(jìn)行BAC直接檢測(cè)；所謂間接檢測(cè)就是采用自動(dòng)檢測(cè)儀器測(cè)定乙醇濃度，并按照一定比例換算為BAC的方法。呼氣乙醇檢測(cè)（口腔呼出氣體同血液之間有換算關(guān)系）、非抽血式紅外檢測(cè)（血液中乙醇分子反射被照上的紅外線）和汗腺檢測(cè)（汗液中乙醇含量間接推斷）均屬于間接檢測(cè)。其中呼氣乙醇檢測(cè)因其操作方便和可快速檢測(cè)出乙醇含量的優(yōu)勢(shì)，被很多機(jī)構(gòu)用于BE試驗(yàn)中[6]。

3 呼氣乙醇含量檢測(cè)儀

乙醇檢測(cè)儀是用來(lái)檢測(cè)人體是否攝入乙醇和攝入乙醇程度的儀器。呼氣式乙醇檢測(cè)儀是乙醇測(cè)試儀中最常用的一種，它只需呼入被檢測(cè)者的氣體即可快速檢測(cè)出乙醇含量。它分為濕化學(xué)法、氣相色譜法、電化學(xué)法、紅外光譜法和半導(dǎo)體傳感器5種工作原理，其中電化學(xué)/燃料電池乙醇檢測(cè)儀應(yīng)用較多，其原理為呼氣中乙醇被催化劑氧化成氧化碳（或乙醛）和水的過(guò)程中釋放出化學(xué)能，化學(xué)能經(jīng)能量轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換之后成電流通過(guò)電伏特表，表的讀值越高，則乙醇濃度越高。我院BE試驗(yàn)乙醇檢測(cè)使用的是已獲得“中華人民共和國(guó)制造計(jì)量器具許可證”的興喜電子（深圳）有限公司生產(chǎn)的燃料電池型呼氣乙醇含量檢測(cè)儀（型號(hào)：AT13），該檢測(cè)儀已經(jīng)通過(guò)“國(guó)家道路安全產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心”以及“廣東省計(jì)量科學(xué)研究院”按GB/T 21254-2007 及JJG657-2006的檢測(cè)。為保證該儀器的準(zhǔn)確性，每6個(gè)月由淄博市計(jì)量測(cè)試所依據(jù)JJG657-2006《呼出氣體乙醇含量探測(cè)器檢定規(guī)程》對(duì)其進(jìn)行檢定，只有檢定合格且在檢定有效期內(nèi)的儀器，才能被用于我院BE試驗(yàn)中。

4 我院呼氣乙醇含量檢測(cè)流程

4.1 測(cè)試前準(zhǔn)備 ①儀器準(zhǔn)備：我院Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心實(shí)行項(xiàng)目聯(lián)系人（project contact，PC）負(fù)責(zé)制，由主要研究者指定專人作為PC，其負(fù)責(zé)對(duì)整個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目的協(xié)調(diào)與安排。根據(jù)PC制訂的試驗(yàn)流程及項(xiàng)目時(shí)間安排，儀器設(shè)備管理人員會(huì)提前準(zhǔn)備試驗(yàn)所需儀器設(shè)備。如BE試驗(yàn)的篩選期和每周期入?、衿诓》壳靶枰M(jìn)行呼氣乙醇檢測(cè)，需要提前準(zhǔn)備呼氣乙醇含量檢測(cè)儀，并檢查儀器的校準(zhǔn)和檢定是否在有效期內(nèi)、儀器運(yùn)轉(zhuǎn)是否良好、電源儲(chǔ)備和打印紙是否充足等，以保證試驗(yàn)中所用儀器滿足GCP對(duì)臨床試驗(yàn)的要求。②HIS醫(yī)囑：有些機(jī)構(gòu)因?yàn)獒t(yī)院檢驗(yàn)科不具備BAC檢測(cè)資質(zhì)，呼氣乙醇檢測(cè)非由檢驗(yàn)人員操作，而是由Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心的研究人員在本科室進(jìn)行測(cè)試操作，檢測(cè)后將檢測(cè)結(jié)果復(fù)印后粘貼于原始文件中，導(dǎo)致非檢驗(yàn)科檢測(cè)項(xiàng)目在實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（laboratory information system，LIS）中無(wú)法溯源。這些在試驗(yàn)科室進(jìn)行檢查的項(xiàng)目不能溯源，檢查過(guò)程無(wú)標(biāo)準(zhǔn)操作流程，無(wú)室間質(zhì)評(píng)證書，檢查人員也難以做到專門的培訓(xùn)，這些都對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性、規(guī)范性帶來(lái)了不利的因素[7]。為滿足GCP對(duì)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)可溯源的要求，檢測(cè)前一天，我院研究醫(yī)師在醫(yī)院信息系統(tǒng)（hospital information system，HIS）中開具呼氣乙醇檢測(cè)醫(yī)囑，研究護(hù)士進(jìn)行醫(yī)囑確認(rèn)后打印醫(yī)囑條碼，交有資質(zhì)的檢驗(yàn)人員進(jìn)行呼氣乙醇檢測(cè)時(shí)使用。

4.2 測(cè)試操作 ①時(shí)間校準(zhǔn)：檢測(cè)當(dāng)天，檢驗(yàn)人員按Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心要求領(lǐng)取項(xiàng)目所需呼氣乙醇含量檢測(cè)儀及其《儀器設(shè)備使用登記表》，開機(jī)檢查儀器狀態(tài)，并與GPS時(shí)鐘進(jìn)行時(shí)間校準(zhǔn)。②受試者身份核對(duì)：將醫(yī)囑條碼信息（科室、姓名、性別、年齡等）和受試者信息（身份證、所參加項(xiàng)目的編號(hào)等）進(jìn)行核對(duì)，核對(duì)無(wú)誤后進(jìn)行呼氣乙醇檢測(cè)操作。③測(cè)試操作：我院使用的AT13燃料電池型呼氣乙醇含量檢測(cè)儀操作簡(jiǎn)單，開機(jī)狀態(tài)下，直接點(diǎn)擊屏幕“測(cè)試”按鈕，進(jìn)入乙醇測(cè)試狀態(tài)，按照屏幕的提示裝好吹管，讓受試者深吸一口氣，然后含住吹嘴吹氣，當(dāng)達(dá)到吹氣壓力后儀器發(fā)出“嗶”一聲，同時(shí)屏幕測(cè)壓指示條開始滾動(dòng)、狀態(tài)指示燈常亮；當(dāng)指示條到達(dá)盡頭時(shí)，儀器自動(dòng)抽氣采樣，受試者可停止吹氣，若測(cè)試時(shí)滾動(dòng)條未到達(dá)盡頭，儀器會(huì)顯示“吹氣中斷，請(qǐng)重吹”，同時(shí)發(fā)出提示音，受試者應(yīng)重新吹氣，直至測(cè)試完成。注意在測(cè)試時(shí)，兩次測(cè)試應(yīng)間隔2 min。如果測(cè)試結(jié)果超過(guò)80 mg/100 mL(即呼氣乙醇含量超過(guò)0.36 mg/L)，下次測(cè)試需間隔3 min，以便讓燃料電池充分歸零。④BrAC與BAC自動(dòng)換算：AT13燃料電池型呼氣乙醇含量檢測(cè)儀是由興喜電子（深圳）有限公司生產(chǎn)，該企業(yè)執(zhí)行2011年1月14日國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)批準(zhǔn)的強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣乙醇含量閾值與檢驗(yàn)》（GB19522-2010），該標(biāo)準(zhǔn)中4.2條明確規(guī)定“血液與呼氣乙醇含量換算：車輛駕駛?cè)藛T呼氣乙醇含量按1∶2 200的比例關(guān)系換算成血液乙醇含量，即呼氣乙醇含量值乘以2 200等于血液乙醇含量值”。該儀器已按照GB19522-2010規(guī)定的系數(shù)設(shè)置好，即通過(guò)測(cè)定BrAC，以BAC∶BrAC=2 200∶1的比例自動(dòng)換算為BAC，故儀器打印出的熱敏紙結(jié)果直接顯示為BAC。⑤結(jié)果打?。涸趦x器顯示BAC數(shù)值后，按“OK”鍵進(jìn)入輸入相關(guān)信息界面（測(cè)試模式選擇“主動(dòng)”模式），持續(xù)按“OK”鍵直至出現(xiàn)條碼打印界面，點(diǎn)擊“打印”按鈕進(jìn)行結(jié)果打印。結(jié)果打印后，將該受試者的醫(yī)囑條碼粘貼于熱敏紙結(jié)果“被測(cè)試人”下面的空白處，并在“被測(cè)試人”處記錄受試者的篩選號(hào)或隨機(jī)號(hào)及姓名縮寫，操作人員在“執(zhí)勤民警警號(hào)”處簽名，至此完成一次呼氣乙醇測(cè)試。選擇“退出”按鈕，開始下一位受試者的測(cè)試。儀器使用時(shí)，及時(shí)在呼氣乙醇檢測(cè)儀的《儀器設(shè)備使用登記表》上登記使用相關(guān)信息（方案編號(hào)、使用日期、開始時(shí)間、結(jié)束時(shí)間、儀器狀態(tài)、操作內(nèi)容和操作人等）。⑥結(jié)果復(fù)印：待所有受試者檢測(cè)完畢，檢驗(yàn)人員核對(duì)儀器操作記錄無(wú)誤后，將呼氣乙醇含量檢測(cè)儀及其《儀器設(shè)備使用登記表》歸還Ⅰ期儀器設(shè)備管理人員，并將呼氣乙醇檢測(cè)的熱敏紙結(jié)果復(fù)印2份，1份復(fù)印件留存于Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心的項(xiàng)目原始文件中，另1份復(fù)印件和熱敏紙檢測(cè)結(jié)果原件由檢驗(yàn)人員帶回檢驗(yàn)科用于完成測(cè)試報(bào)告。

4.3 測(cè)試報(bào)告 ①樣本登陸：通過(guò)掃描我院HIS二維碼，實(shí)現(xiàn)和LIS的有效對(duì)接，實(shí)現(xiàn)呼氣乙醇檢測(cè)項(xiàng)目的可溯源性。檢驗(yàn)人員在瑞美“NS3001免疫層析判讀記錄儀”報(bào)告單元，在相應(yīng)編號(hào)位置掃入受試者醫(yī)囑二維碼，并確認(rèn)樣本一致性。②受試者信息核對(duì)：依次核對(duì)瑞美報(bào)告系統(tǒng)中受試者信息（科室、姓名、性別和年齡等）與呼氣乙醇熱敏紙檢測(cè)結(jié)果中的受試者信息是否一致，如有不一致及時(shí)聯(lián)系Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心查找原因。③結(jié)果判定與審核：檢驗(yàn)人員（操作人員）根據(jù)本院檢驗(yàn)科《呼氣乙醇檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》對(duì)呼氣乙醇熱敏紙檢測(cè)結(jié)果顯示的BAC定量結(jié)果進(jìn)行定性判讀。血液乙醇濃度為0.0 mg/100 mL，結(jié)果判定為“陰性”，高于0.0 mg/100 mL，結(jié)果判定為“陽(yáng)性”。結(jié)果初判后，由其他檢驗(yàn)人員（非操作人員）對(duì)最終結(jié)果進(jìn)行再次審核，以保證最終判讀結(jié)果的準(zhǔn)確性。④報(bào)告單打印分發(fā)：再次審核無(wú)誤后，檢驗(yàn)人員打印報(bào)告單并做好相關(guān)登記，將報(bào)告單發(fā)放給Ⅰ期臨床試驗(yàn)中心。

5 討 論

利用呼氣乙醇含量檢測(cè)儀進(jìn)行BAC間接檢測(cè)的方法，雖不如氣相色譜法直接檢測(cè)血液樣品檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，但該方法以其檢測(cè)儀器價(jià)格低、操作簡(jiǎn)便和出結(jié)果快等優(yōu)點(diǎn)，被大多數(shù)機(jī)構(gòu)認(rèn)可，并廣泛應(yīng)用于BE試驗(yàn)中[8]。目前，大多數(shù)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)科無(wú)法進(jìn)行呼氣乙醇檢測(cè)室間質(zhì)控，導(dǎo)致核查人員會(huì)對(duì)呼氣乙醇檢測(cè)數(shù)據(jù)獲取的規(guī)范性提出質(zhì)疑。希望國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（national medical products administration，NMPA）能聯(lián)合計(jì)量檢測(cè)部門早日為BE試驗(yàn)呼氣乙醇檢測(cè)提供室間質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及質(zhì)控方法，使檢驗(yàn)人員在進(jìn)行呼氣乙醇檢測(cè)過(guò)程中能開展室間質(zhì)控，以保證臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集的規(guī)范性[9-10]。開展BE研究時(shí)，無(wú)論采用直接還是間接BAC檢測(cè)方法，機(jī)構(gòu)都要建立完善的BAC檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，以滿足GCP對(duì)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠、試驗(yàn)結(jié)果完整可溯源的要求。