高偉霞，秦小菀，張靖，朱永杰

（1.南陽市中心醫(yī)院急診兒科，河南 南陽473009；2.鄭州兒童醫(yī)院急診科，河南 鄭州450053）

流行病學(xué)研究表明,小兒哮喘的發(fā)病率可超過869/1萬人左右[1]，在合并有基礎(chǔ)性高危合并癥的群體中，小兒哮喘的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[2,3]。對于小兒哮喘的病情評估具有重要的意義,其能夠在指導(dǎo)小兒哮喘的臨床診療及臨床預(yù)后隨訪方面發(fā)揮作用。細(xì)胞因子或者炎癥性相關(guān)指標(biāo)的研究，可以為臨床上小兒哮喘的診療發(fā)揮一定的參考。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin）的表達(dá)上升，能夠通過募集嗜酸性粒細(xì)胞,進(jìn)而誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的激活,促進(jìn)呼吸道平滑肌細(xì)胞的痙攣，進(jìn)而促進(jìn)肺部小氣道的阻塞[4]；白細(xì)胞介素-17（IL-17）是炎癥性相關(guān)指標(biāo),其能夠通過提高下游中性粒細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞的激活程度,進(jìn)而加劇哮喘的病情進(jìn)展[5]；紅細(xì)胞分布寬度（RDW）是反應(yīng)貧血病情變化的指標(biāo),在炎癥或者自身免疫性疾病中，RDW同樣存在明顯的波動[6]。為了揭示Eotaxin、IL-17及RDW的表達(dá)與小兒哮喘的病情關(guān)系,從而為臨床上小兒哮喘的病情評估提供參考,本次研究選取我院確診的支氣管哮喘患兒110例,探討了Eotaxin、IL-17及RDW的表達(dá)變化，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院確診的支氣管哮喘患兒110例（哮喘組）,2015年3月至2018年3月,選取60例健康小兒作為對照組。

哮喘組，年齡5～13歲，平均8.2±1.8歲，男60例、女50例，依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會制定的病情嚴(yán)重程度分級標(biāo)準(zhǔn)[7]：輕度33例、中度50例、重度27例。對照組，年齡5～13歲，平均8.1±2.0歲，男30例、女30例。兩組患兒的年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴支氣管哮喘患兒的診斷及病情分組標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會制定的標(biāo)準(zhǔn)[7]；⑵患兒年齡5～13歲；⑶患兒處于急性發(fā)作期；⑷對照組為健康體檢小兒；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病；⑵惡性腫瘤患者；⑶先心病；⑷支氣管異物吸入、支氣管畸形；⑸肝腎功能疾??；⑹合并其他系統(tǒng)性疾病的患兒；⑺近2周內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素、免疫制劑治療的患兒。

1.2 指標(biāo)檢測方法 采用一次性靜脈血采集器進(jìn)行肘部靜脈血采集，采集5ml靜脈血后自然放置，采用南京碧云天公司生產(chǎn)sysmex/XN1000血液系統(tǒng)分析儀器進(jìn)行紅細(xì)胞分布寬度（RDW）的檢測。

采用ELISA法進(jìn)行Eotaxin、IL-17的檢測，采用十字交叉的方法進(jìn)行抗原濃度的測定,采用碳酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原稀釋,加入96孔的酶標(biāo)板中，蓋好酶標(biāo)板蓋后置于4℃冰箱過夜,蒸餾水沖洗3次，每次5min，輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200l，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5min，加入稀釋好的抗體（購自abcum公司 批號：20083845濃度1：800），蒸餾水沖洗3次，每次5min，每孔中加入100l的底物，顯色后在酶標(biāo)儀上進(jìn)行吸光度的檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS21.0對本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用±s表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料,應(yīng)用t檢驗(yàn)分析兩組間差異、方差分析檢測三組間差異；應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料的組間差異；相關(guān)性分析采用Pearson簡單線性相關(guān)分析法；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 哮喘組和對照組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較 哮喘組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平高于對照組（P＜0.05）；見表1。

表1 哮喘組和對照組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較(±s)

表1 哮喘組和對照組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較(±s)

組別 n哮喘組對照組t值P值110 60 Eotaxin（ng/L）IL-17（pg/ml）44.91±18.63 4.80±1.55 16.623 0.000 44.81±11.75 33.69±8.20 6.512 0.000 RDW（%）14.6±1.1 12.5±0.9 12.652 0.000

2.2 不同病情的哮喘組血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較 重度哮喘組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平高于中度組和輕度組（P＜0.05），中度哮喘組的血清Eotaxin、IL-17、RDW水平高于輕度組（P＜0.05）；見表2。

表2 不同病情的哮喘組血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較(±s)

表2 不同病情的哮喘組血清Eotaxin、IL-17、RDW水平比較(±s)

組別 n輕度組中度組重度組F值P值33 50 27 Eotaxin（ng/L）IL-17（pg/ml）31.03±15.20 46.04±17.71 53.38±13.94 26.683 0.000 38.00±9.26 45.14±10.38 50.77±8.93 21.110 0.000 RDW（%）13.2±0.7 14.7±1.0 15.8±0.9 14.485 0.000

2.3 哮喘組和對照組的肺功能指標(biāo)比較 哮喘組的FEV1、PEF、FEV1/FVC測定值均低于對照組（P＜0.05）；見表3。

表3 哮喘組和對照組的肺功能指標(biāo)比較（±s）

表3 哮喘組和對照組的肺功能指標(biāo)比較（±s）

組別 n哮喘組對照組t值P值110 60 FEV1（L/min） PEF（%）1.36±0.40 1.88±0.48-7.539 0.000 68.21±9.64 98.57±11.43-18.359 0.000 FEV1/FVC（%）71.33±8.20 85.09±7.33-10.845 0.000

2.4 哮喘組患兒血清Eotaxin、IL-17、RDW與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性 哮喘組的血清Eotaxin、IL-17與FEV1、PEF測定值均呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.05),哮喘組患兒RDW與FEV1、PEF測定值無明顯的相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）；見表4。

表4 哮喘組患兒血清Eotaxin、IL-17、RDW與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性（±s）

表4 哮喘組患兒血清Eotaxin、IL-17、RDW與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性（±s）

肺功能 相關(guān)性FEV1 PEF r值P值r值P值Eotaxin IL-17-0.633 0.000-0.594 0.000-0.528 0.000-0.541 0.000 RDW-0.183 0.117-0.216 0.078

3 討論

自身免疫性損傷或者過度的炎癥反應(yīng)體系的激活,均能夠促進(jìn)小兒哮喘的發(fā)生[8]。臨床上小兒哮喘的發(fā)生，能夠?qū)е孪純悍喂δ軔夯陌l(fā)生，增加了患兒的致殘率和病死風(fēng)險[9]。而通過對于相關(guān)評估性指標(biāo)的分析,能夠在臨床上早期干預(yù)或者出院后患者的隨訪方面發(fā)揮作用。雖然一氧化氮等指標(biāo)能夠在小兒哮喘的病情評估過程中發(fā)揮作用，但部分單中心的分析研究發(fā)現(xiàn)，采用一氧化氮評估小兒哮喘病情的靈敏度不足45%,其評估的一致性率和吻合程度均不佳[10]。本次研究通過對于小兒哮喘患者血清中Eotaxin、IL-17、RDW的表達(dá)分析研究,不僅能夠揭示小兒哮喘的病情進(jìn)展內(nèi)在機(jī)理,同時還能夠?yàn)榕R床上小兒哮喘的病情評估提供血清學(xué)方面的依據(jù)。

Eotaxin是嗜酸性粒細(xì)胞相關(guān)因子,其表達(dá)濃度的上升能夠通過募集嗜酸性粒細(xì)胞,加劇其遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)或者過敏反應(yīng)的激活,進(jìn)而參與到呼吸道平滑肌的痙攣過程中?；A(chǔ)方面的研究顯示，Eotaxin的表達(dá)上升還能夠提高呼吸道平滑肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激性損傷,進(jìn)而加劇小氣道的狹窄和氣流的阻塞[11]；IL-17是Th1/Th2 T淋巴細(xì)胞免疫相關(guān)因子,其能夠通過募集下游炎癥性信號通路NF-KB的激活，提高下游炎癥效應(yīng)因子的釋放程度[12]；RD W是紅細(xì)胞分布寬度,其能夠反應(yīng)紅細(xì)胞膜的形態(tài)學(xué)特征的改變，近年來的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，RDW的表達(dá)能夠反應(yīng)患者體內(nèi)的變態(tài)反應(yīng)、炎癥瀑布反應(yīng)等病理過程，進(jìn)而參與到多種病理生理進(jìn)程中。部分研究者探討了Eotaxin的表達(dá)與哮喘的病情關(guān)系，認(rèn)為在哮喘患者中，Eotaxin的表達(dá)濃度明顯上升[13]，但缺乏對于Eotaxin、IL-17、RDW的表達(dá)與肺功能的關(guān)系研究。

對于小兒哮喘患者血清中Eotaxin、IL-17、RDW的表達(dá)分析可見，在病例組患者血清中，Eotaxin、IL-17、RDW的表達(dá)濃度均明顯上升，高于正常對照組兒童，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，提示了Eotaxin、IL-17、RDW的高表達(dá)均能夠參與到小兒哮喘的病情進(jìn)展過程。分析其內(nèi)在的原因或者機(jī)理，主要由于Eotaxin、IL-17、RDW的下列病理作用有關(guān)[14]：⑴Eotaxin的表達(dá)上升,能夠促進(jìn)一氧化氮合酶的活性改變，降低了一氧化氮的合成速度，促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞的痙攣風(fēng)險；⑵IL-17是T淋巴細(xì)胞分泌的效應(yīng)因子，其能夠提高下游腫瘤壞死因子a的激活程度，進(jìn)而促進(jìn)氣道的高反應(yīng)性，加劇哮喘的病情進(jìn)展；⑶RDW的表達(dá)上升主要考慮與呼吸道局部炎癥反應(yīng)的激活有關(guān),炎癥性因子的釋放能夠促進(jìn)紅細(xì)胞釋放進(jìn)入外周血。陳凌等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在哮喘患者血清中，IL-17的表達(dá)濃度可顯著上升，其平均上升幅度可超過30%，同時在合并有明顯的肺性腦病的患者中，IL-17的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升。在不同病情嚴(yán)重程度的患者中，可以發(fā)現(xiàn)在重度組患者中，Eotaxin、IL-17、RDW的表達(dá)濃度明顯上升，高于輕度組及中度組患者，差異較為顯著,提示了Eotaxin、IL-17、RDW的高表達(dá)與哮喘的病情關(guān)系密切相關(guān),這主要由于相關(guān)指標(biāo)的上升，能夠通過綜合性影響到呼吸道的微環(huán)境、氣道反應(yīng)性等，進(jìn)而促進(jìn)哮喘病情的進(jìn)展。臨床上可以通過監(jiān)測Eotaxin、IL-17、RDW，進(jìn)而評估哮喘患兒的病情程度。第一秒用力呼氣容積（FEV1）、呼氣峰值流速（PEF）、用力肺活量（FVC）是評估患者肺功能的指標(biāo)，相關(guān)關(guān)系分析可見，哮喘患者體內(nèi)Eotaxin、IL-17與FEV1、PEF測定值均呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系，這主要由于Eotaxin、IL-17的表達(dá)改變，能夠影響到小氣道可逆性狹窄程度，加劇粘液滲出及平滑肌痙攣，從而影響到肺功能水平。

綜上所述,在小兒哮喘患者中，Eotaxin、IL-17及RDW的表達(dá)濃度均明顯上升，Eotaxin、IL-17等的表達(dá)與哮喘患者的病情嚴(yán)重程度及肺功能密切相關(guān)。