劉 艷，呂 萌

(1 河南省省立醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 450000；2 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 451161)

頭孢硫脒是我國首個(gè)自主研發(fā)的、用于臨床的頭孢菌素類化合物，屬于第1代頭孢菌素類抗生素，通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成發(fā)揮抗菌作用[1]。其對金黃色葡萄球菌、草綠色鏈球菌、肺炎球菌的作用較強(qiáng)，對腸球菌有獨(dú)特的抗菌活性，主要用于敏感菌導(dǎo)致的呼吸系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)、五官、尿路感染、心內(nèi)膜炎及敗血癥。

注射用頭孢硫脒不良反應(yīng)主要累及皮膚及其附件、全身、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等[2]。2015年原國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的第69期《藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)》提示，關(guān)注注射用頭孢硫脒引起的過敏性休克及兒童用藥風(fēng)險(xiǎn)[3]。頭孢硫脒與部分輸液配伍穩(wěn)定性較差，隨著放置時(shí)間的增加，可產(chǎn)生具有過敏原性的雜質(zhì)，這可能是其藥物不良反應(yīng)(adverse drug reaction,ADR)發(fā)生的原因之一[4]。本文研究了注射用頭孢硫脒在5～15 mg/ml濃度范圍內(nèi)與臨床常用的0.9%氯化鈉、5%葡萄糖、10%葡萄糖及5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍后放置24 h內(nèi)的穩(wěn)定性，以期為臨床安全、合理使用注射用頭孢硫脒提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Nexera XR高效液相色譜系統(tǒng)、SPD-20A紫外檢測器(日本島津公司)；FA1104分析電子天平(上海上平儀器有限公司)；雷磁PHS-3C型pH計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)。

1.2 藥品與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，批號130523-201203，純度99.0%)；實(shí)驗(yàn)用藥品：注射用頭孢硫脒(廣州白云醫(yī)藥集團(tuán)藥股份有限公司白云山制藥總廠，批號3192049，規(guī)格0.5 g)、5%葡萄糖注射液(河南科倫藥業(yè)有限公司，批號A19072902A，規(guī)格500 ml∶25 g)、10%葡萄糖注射液(安徽豐原藥業(yè)股份有限公司，批號190130127，規(guī)格250 ml∶25 g)、0.9%氯化鈉注射液(安徽豐原藥業(yè)股份有限公司，批號190729125，規(guī)格250 ml∶2.25 g)、5%葡萄糖氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號C119061602-1，規(guī)格250 ml∶葡萄糖12.5 g+氯化鈉2.25 g)；其他試劑及用品：乙腈為色譜純，無水磷酸氫二鈉、枸櫞酸為分析純，超純水為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱定頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品125.0 mg加蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移，置于5 ml量瓶中稀釋定容至刻度。

2.2 頭孢硫脒模擬臨床配伍溶液的配制

通過前期調(diào)查得知本院靜脈用藥調(diào)配中心注射用頭孢硫脒常用配置濃度為4～15 mg/ml，臨床常用輸液為5%葡萄糖、10%葡萄糖、0.9%氯化鈉、5%葡萄糖氯化鈉注射液。分別精密稱定注射用頭孢硫脒0.25、0.25和0.375 g，用2 ml 0.9%氯化鈉注射液溶解后，分別轉(zhuǎn)移至50、25和25 ml量瓶中，用以上4種注射液定容，制得注射用頭孢硫脒濃度為5、10和15 mg/ml配伍溶液。

2.3 色譜條件

分析柱：Intersil ODS-3 C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，日本島津有限公司)；流動相：磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉2.760 g與枸櫞酸1.291 g，加水溶解并稀釋到1000 ml)-乙腈(80∶20)；柱溫：30 ℃；檢測波長：254 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取“2.1”項(xiàng)下頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用超純水依次稀釋至濃度為25.0、20.0、12.5、10.0、6.25、5.0、3.125和1.56 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取100 μl用超純水稀釋至1000 μl，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。以相應(yīng)色譜峰面積(x)為橫坐標(biāo)，濃度(y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程y=7×10-7x+0.384 8(r2=0.999 2)，線性范圍：0.156～2.5 mg/ml。

2.4.2精密度試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以超純水分別配制成理論質(zhì)量濃度為3.125、6.25和12.5 mg/ml的溶液各3份，配置后即按照“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，代入線性回歸方程求得測量濃度，以測量濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)反映精密度。每日各檢測1次，共檢測3天，計(jì)算批內(nèi)及批間精密度。見表1。

表1 頭孢硫脒的精密度、準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.4.3準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下頭孢硫脒標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以超純水分別配制成理論質(zhì)量濃度為3.125、6.25和12.5 mg/ml的溶液各5份，配制后即按照“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，代入線性回歸方程求得測量濃度，以回收率反映準(zhǔn)確度。見表1。

2.5 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.5.1相對百分含量測定

注射用頭孢硫脒與4種常用輸液制得的配伍溶液放置在(25±1) ℃、不避光的條件下，于0、1、2、4、6、8、12和24 h時(shí)，取配伍溶液100 μl，用相應(yīng)配伍注射液稀釋至1000 μl。按照“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜峰面積，通過外標(biāo)法計(jì)算配伍溶液頭孢硫脒含量。以配伍溶液0 h的頭孢硫脒含量為100%，計(jì)算配伍溶液中不同時(shí)間點(diǎn)頭孢硫脒的相對百分含量變化，見表2。由表2可見，在 8 h 內(nèi)，頭孢硫脒與5%葡萄糖、10%葡萄糖、0.9%氯化鈉、5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍(濃度5～15 mg/ml)中頭孢硫脒相對百分含量變化為95.40%～102.44%，符合國際上常用的輸液化學(xué)穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)(>95%)[5]，提示頭孢硫脒與該4種常用輸液濃度在5～15 mg/ml、8 h內(nèi)的配伍輸液化學(xué)穩(wěn)定性良好。在12 h內(nèi)，頭孢硫脒與10%葡萄糖、0.9%氯化鈉及5%葡萄糖氯化鈉注射液(濃度5～15 mg/ml)配伍溶液中頭孢硫脒相對百分含量>95%，配伍穩(wěn)定性良好。頭孢硫脒與5%葡萄糖注射液配伍，濃度為5 mg/ml時(shí)，在12 h內(nèi)相對百分含量>95%；濃度為10～15 mg/ml時(shí)，在8 h內(nèi)相對百分含量>95%，在12和24 h時(shí)間點(diǎn)相對百分含量<95%，表示其配伍溶液穩(wěn)定性較差。在24 h范圍內(nèi)，僅有濃度為5 mg/ml的頭孢硫脒與0.9%氯化鈉相對百分含量>95%，配伍溶液穩(wěn)定性良好，其余配伍溶液穩(wěn)定性均較差。

表2 注射用頭孢硫脒與4種常用輸液配伍前后的含量變化 %

2.5.2pH測定

在不同時(shí)間點(diǎn)取適量上述配伍溶液，測定pH。不同時(shí)間點(diǎn)配伍溶液的pH在3.83～5.16(見表3)，各組配伍溶液pH隨著放置時(shí)間延長而呈現(xiàn)降低的趨勢。

表3 注射用頭孢硫脒與4種常用輸液配伍前后的pH變化

(續(xù)表)

3 討論

隨著注射用頭孢硫脒在臨床的廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)報(bào)道日益增多。頭孢硫脒ADR可能是由部分雜質(zhì)引起[5]，如生產(chǎn)過程中引入的外源性雜質(zhì)，或生產(chǎn)、貯存、使用過程中產(chǎn)生的內(nèi)源性的高分子雜質(zhì)[6]，以及與部分輸液配伍不穩(wěn)定從而降解產(chǎn)生的雜質(zhì)[7-9]。鄒明等[10]采用高效液相色譜法(HPLC)研究了注射用頭孢硫脒與0.9%氯化鈉、5%葡萄糖、10%葡萄糖及5%葡萄糖氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性。結(jié)果表明，放置6 h內(nèi)，8 mg/ml的注射用頭孢硫脒與上述4種輸液配伍穩(wěn)定性較好。王映輝等[11]采用紫外分光光度法測定注射用頭孢硫脒與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、10%葡萄糖注射液配伍穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，8 mg/ml的注射用頭孢硫脒與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液在6 h內(nèi)配伍穩(wěn)定，但是與10%葡萄糖注射液配伍放置2 h后，吸收曲線圖譜發(fā)生明顯變化，考慮其轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，配伍溶液不穩(wěn)定。何建平等[12]采用HPLC含量測定法分別考察了頭孢硫脒與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，上述配伍溶液在25 ℃下頭孢硫脒濃度為4 mg/ml時(shí)放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

本研究通過前期調(diào)研[4]，研究了注射用頭孢硫脒與0.9%氯化鈉、5%葡萄糖、10%葡萄糖及5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍濃度為5、10和15 mg/ml、放置24 h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，在5～15 mg/ml濃度范圍內(nèi)，與上述4種輸液配伍放置8 h內(nèi)的化學(xué)穩(wěn)定性良好。在12 h內(nèi)，頭孢硫脒與10%葡萄糖、0.9%氯化鈉、5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍穩(wěn)定性良好；與5%葡萄糖配伍，濃度為10～15 mg/ml時(shí)，配伍穩(wěn)定性較差。在24 h范圍內(nèi)，僅5 mg/ml的頭孢硫脒與0.9%氯化鈉配伍溶液穩(wěn)定性良好。其原因可能為頭孢硫脒配伍溶液穩(wěn)定性不僅與放置時(shí)間有關(guān)，還與配伍溶液濃度、配伍用注射液種類有關(guān)。此外，頭孢硫脒與注射液配伍后，其穩(wěn)定性容易受溫度影響，在37 ℃、45 ℃條件下，穩(wěn)定性變差；配伍溶液對光照、pH不敏感[13]。本研究中，頭孢硫脒各組配伍溶液pH隨著放置時(shí)間延長而略有降低，范圍在3.83～5.16，考慮pH不是影響頭孢硫脒配伍溶液穩(wěn)定性的因素。本研究結(jié)果提示，濃度在 5～15 mg/ml，頭孢硫脒與0.9%氯化鈉、5%葡萄糖、10%葡萄糖及5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍時(shí)，放置8 h內(nèi)配伍穩(wěn)定。提示在臨床常見配伍環(huán)境下(室溫不避光)，頭孢硫脒濃度不宜過高，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，從而減少過敏原性雜質(zhì)的產(chǎn)生，降低不良反應(yīng)發(fā)生率。

由于本實(shí)驗(yàn)存在某些局限性，如頭孢硫脒與輸液配伍穩(wěn)定性的因素還可能受輸液容器材質(zhì)的影響；本實(shí)驗(yàn)采用量瓶進(jìn)行供試溶液的配制，對輸液容器的材質(zhì)影響未做研究。此外，由于條件限制，本實(shí)驗(yàn)未對配伍溶液產(chǎn)生的雜質(zhì)作進(jìn)一步的定性、定量分析。因此，頭孢硫脒不良反應(yīng)發(fā)生的影響因素仍需進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究。