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        載脂蛋白E基因多態(tài)性、血漿同型半胱氨酸水平與阿爾茨海默病患者睡眠障礙相關(guān)性分析

        2021-03-17 09:41:40馬珊珊邢艷暉王瑞萍王秀芳
        臨床軍醫(yī)雜志 2021年2期
        關(guān)鍵詞:等位基因半胱氨酸血癥

        馬珊珊, 邢艷暉, 王瑞萍, 王秀芳, 彭 菲, 李 哲

        遼寧省金秋醫(yī)院 1.神經(jīng)內(nèi)科;2.耳鼻喉科,遼寧 沈陽 110016;3.廊坊師范學院教育學院,河北 廊坊 065000

        阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是發(fā)生于老年和老年前期,以進行性認知功能障礙和行為損害為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1-5]。同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸[6],體內(nèi)Hcy異常增高可損傷血管內(nèi)皮細胞,促進血管平滑肌細胞增殖,破壞凝血和纖溶平衡,導致脂代謝紊亂、動脈粥樣硬化等,影響機體微循環(huán),最終造成認知與神經(jīng)功能障礙[7-8]。本研究旨在探討載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因多態(tài)性及Hcy水平與AD患者睡眠障礙的相關(guān)性?,F(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取自2016年12月至2019年12月于遼寧省金秋醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的65例AD患者納入AD組。納入標準:年齡60~90歲;均符合美國國立神經(jīng)疾病語言障礙卒中研究所和AD及相關(guān)疾病協(xié)會制定“可能的AD”診斷標準及排除標準(2010版)。另選取38例健康體檢者納入健康組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。所有研究對象及家屬均簽署知情同意書。

        1.2 研究方法

        1.2.1 臨床資料采集 所有研究對象均完成頭顱CT或頭顱海馬檢查、簡易精神狀態(tài)檢查量表(mini-mental state examination,MMSE)評分。匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)量表評分≥7分,且多導睡眠監(jiān)測結(jié)果提示有睡眠紊亂,則診斷為睡眠障礙,不符合上述條件的為無睡眠障礙。

        1.2.2 ApoE基因型的鑒定 取清晨空腹EDTA抗凝全血2 ml,應用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA。采用Primer Premier 5軟件設(shè)計引物(北京華大基因科技有限公司合成)。對ApoE基因進行目的片段擴增。聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)體系:1 μl的DNA模板、PCR Super Mix、引物F(10p)、引物R(10p),12 μl的蒸餾水,共30 μl。反應條件:96℃預變性5 min,10個循環(huán)程序(96℃變性20 s,62℃~52℃退火20 s,72℃延伸30 s;每個循環(huán)下降1℃);再進行35個循環(huán)(96℃變性20 s,52℃退火30 s,72℃延伸30 s);完成后,72℃ 10 min,16℃ forever。對PCR產(chǎn)物進行電泳、純化,利用DNA測序儀(3730XL型,美國ABI公司)進行基因型鑒定。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組研究對象一般資料比較 AD組低密度脂蛋白膽固醇、Hcy水平及合并睡眠障礙比例高于健康組,兩組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

        表1 兩組研究對象一般資料比較

        2.2 ApoE基因型分布及比較 ApoE基因型在AD組和健康組的分布均符合H-W平衡(χ2=3.000、0.686;P>0.05)。AD組攜帶ε4等位基因比例為30.8%(20/65),明顯高于健康組的13.2%(5/38),兩組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

        2.3 AD合并睡眠障礙患者與未合并睡眠障礙患者各臨床指標比較 AD合并睡眠障礙組患者的低密度脂蛋白膽固醇、高同型半胱氨酸血癥比例明顯高于AD無睡眠障礙組,MMSE評分明顯低于AD無睡眠障礙組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

        表2 AD合并睡眠障礙與未合并睡眠障礙患者各臨床指標比較

        2.4 AD合并睡眠障礙患者危險因素分析 校正后Logistic回歸分析結(jié)果顯示,ε4等位基因、高同型半胱氨酸血癥是AD合并睡眠障礙的獨立危險因素。見表3。

        表3 AD合并睡眠障礙患者危險因素分析

        3 討論

        ApoE基因有ε2、ε3、ε4共3種等位基因、6種基因型[9-11]。其中,ε2具有神經(jīng)保護作用,而攜帶ε4的人群患AD的風險顯著增加[12-13]。ApoE4基因參與調(diào)解腦中Aβ聚集和清除,影響腦中脂質(zhì)轉(zhuǎn)運、葡萄糖代謝、神經(jīng)元信號傳導、神經(jīng)炎癥的發(fā)生、線粒體功能[14-15],但其機制尚未完全清楚。有研究報道,ε4在AD患者中的分布頻率為15%~30%[16-17]。本研究結(jié)果顯示,ε4在AD患者中的分布頻率為15.4%,顯著高于健康組,提示攜帶ε4等位基因可能為AD的危險因素。

        本研究中,AD組的Hcy水平明顯高于健康組。有研究發(fā)現(xiàn),Hcy可預測輕度認知功能障礙向AD轉(zhuǎn)化及認知功能的進行性衰退[18]。當患者發(fā)生高同型半胱氨酸血癥時,體內(nèi)產(chǎn)生超氧化物,不僅損傷血管內(nèi)皮細胞,增加血栓形成,干擾細胞的發(fā)育、分化,而且還增加Aβ的神經(jīng)毒性,誘導Tau蛋白磷酸化,損害神經(jīng)元功能和突觸傳遞,最終導致認知功能障礙[19]。有研究報道,睡眠時間的縮短、睡眠質(zhì)量下降均與老年人體內(nèi)Aβ的增加相關(guān)[20-21]。本研究將AD合并睡眠障礙和無睡眠障礙的患者進行比較發(fā)現(xiàn),AD合并睡眠障礙患者的低密度脂蛋白膽固醇水平、高同型半胱氨酸血癥的比例明顯高于無睡眠障礙的AD患者,且MMSE評分也明顯低于無睡眠障礙的AD患者;Logistic回歸分析結(jié)果顯示,ε4等位基因、高同型半胱氨酸血癥是AD合并睡眠障礙患者發(fā)病的獨立危險因素。這提示,ε4、高同型半胱氨酸血癥與AD合并睡眠障礙的發(fā)病和疾病進展密切相關(guān),可以作為臨床監(jiān)測指標。

        綜上所述,攜帶ε4等位基因可增加AD發(fā)生睡眠障礙概率,且高同型半胱氨酸血癥也是AD合并睡眠障礙的獨立危險因素。本研究的不足:納入患者數(shù)量有限,沒有納入癡呆前期患者進行分層研究,沒有進行隨訪數(shù)據(jù)的采集分析,針對患者睡眠障礙的數(shù)據(jù)沒有進行足夠的挖掘分析。因此,仍需繼續(xù)擴大樣本量進行更深入的研究。

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