張波 張余芬

HCV RNA日益受到臨床重視。HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌因其缺乏特異性表現(xiàn)，具有一定的誤診率[1-2]，失去最佳治療時機，導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生。近年來HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌逐漸引起臨床重視，本研究探討HCV在HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌中的意義。

資料與方法

一、 臨床資料

54例全部經(jīng)肝穿刺活檢證實為HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌[3]。排除伴有酒精性肝炎、HBV感染、自身免疫性肝炎者。

二、檢測方法

(一)熒光定量PCR ①標(biāo)本組織DNA提取：取手術(shù)病理標(biāo)本，制成1 cm×1 cm大小標(biāo)本，參照Trizol法提取肝癌病灶組織與癌旁組織總DNA，試劑盒為德國Qiagen Gentra Puregene Tissue Kit-組織DNA提取試劑盒。②逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA：將提取的DNA解凍，震蕩混勻，離心后再進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴增，記錄HCV RNA陽性率[4]。

(二) 免疫組化法 以PBS洗片，修復(fù)抗原，封閉內(nèi)源性過氧化物酶0.5 h，再次洗滌后滴入正常牛血清100 mL/L，封閉15 min后吸干，加抗HCV核心蛋白、生物素化羊抗鼠IgG、SABC復(fù)合物，均-4 ℃下冷凍過夜，復(fù)溫后進(jìn)行洗滌，以DAB顯色10 min，再次洗滌后以蘇木素脫水封固。記錄檢測結(jié)果[5]。

三、數(shù)據(jù)處理

記錄54例患者HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌患者熒光定量PCR與免疫組化測定結(jié)果，比較癌組織及癌旁組織HCV RNA含量、HCV RNA陽性率及HCV核心蛋白陽性率。分析熒光定量PCR與免疫組化結(jié)果的一致性，記錄并比較HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌患者癌組織HCV RNA和HCV核心蛋白表達(dá)情況。

結(jié) 果

一、HCV RNA相關(guān)結(jié)果比較

癌組織HCV RNA含量≥500拷貝數(shù)/mL者41例，陽性率75.93%，整體平均(640.78±185.64)拷貝數(shù)/mL，癌旁組織HCV RNA含量≥500拷貝數(shù)/mL者17例，陽性率31.48%，整體平均(512.78±124.52)拷貝數(shù)/mL，HCV RNA陽性率差異顯著(χ2=21.451，P=0.000)。

二、HCV核心蛋白結(jié)果

HCV核心蛋白表達(dá)結(jié)果見表1。癌組織、癌旁組織免疫組化結(jié)果差異顯著(P<0.05)。

表1 免疫組化檢測結(jié)果[n(%)]

三、不同檢查方法結(jié)果比較

兩種檢查結(jié)果見表2。PCR與免疫組化一致性良好(Kappa值=0.951，P=0.000)。

表2 熒光定量RCP與免疫組化結(jié)果比較

四、不同病理特點癌組織HCV RNA陽性率比較

HCV RNA陽性、陰性結(jié)果見表3-4?？梢姴±矸制?、分化程度表現(xiàn)出顯著差異(P<0.05)。

表3 不同病理特點癌組織HCV RNA陽性率比較

表4 不同病理特點患者癌組織免疫組化結(jié)果

討 論

既往臨床多認(rèn)為HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌是肝細(xì)胞癌主要誘因，近年來有學(xué)者發(fā)現(xiàn)對于早期孤立性肝癌患者，亦可因HCV感染引起[6]。但對于HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌與其他病灶不同，膽管無粘連[7]，而目前有關(guān)HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌的具體機制尚未完全闡明。HCV感染被認(rèn)為是肝細(xì)胞肝癌的高危因素，HCV感染后誘發(fā)和加重肝損傷，還可使肝組織細(xì)胞發(fā)生異型增生，成為癌變的誘因。Ng等[8]還認(rèn)為HCV中NS3蛋白結(jié)構(gòu)可通過調(diào)控基因和信號傳導(dǎo)，使肝細(xì)胞正常增殖機制被打破，并獲得免疫逃逸，使機體長期處于HCV感染狀態(tài)，進(jìn)而導(dǎo)致肝細(xì)胞變性壞死。HCC發(fā)生后逐漸侵襲門靜脈血管，而HCV感染的持續(xù)存在使患者免疫力降低，癌細(xì)胞更易透過淋巴管累及膽管壁，穿過膽管上皮，侵襲膽管組織[9]，導(dǎo)致癌癥進(jìn)展。

另外，HCV核心蛋白可通過Ras/Raf通路、Jak/Stat信號傳導(dǎo)，參與癌變[10]。HCV核心蛋白陽性引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常改變，進(jìn)而對HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌病理進(jìn)程和腫瘤生物學(xué)行為能力產(chǎn)生影響[11]。本文顯示HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌組織HCV RNA含量與核心蛋白表達(dá)一致，也說明HCV參與HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌病理過程，HCV感染可能是HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌的誘發(fā)和促進(jìn)因素，這將為HCV相關(guān)肝細(xì)胞癌早期防治提供依據(jù)。