唐后樂(lè)

（邵陽(yáng)學(xué)院，湖南邵陽(yáng) 422000）

油茶籽受到高溫焙炒,特別是壓榨過(guò)程又受到高溫、高壓的作用,就會(huì)產(chǎn)生苯并(a)芘[Benzo (a) Pyrene，B(a)P ]，它是一種多環(huán)芳烴（PAHs）類化合物，對(duì)人體有著較大影響，過(guò)量攝入有可能致癌[1-2]。為保障人們的身體健康，應(yīng)對(duì)油茶籽油制備檢測(cè)精準(zhǔn)度提出較高要求，從而獲取準(zhǔn)確的苯并(a)芘含量數(shù)據(jù)[3]。油茶籽油制備流程較為復(fù)雜，且制備過(guò)程中易受多種因素的干擾，加大了苯并(a)芘檢測(cè)難度[4]。本文嘗試選取LC-PAHs專用液相色譜柱作為制備處理工具，提出一種HPLC-FLD法檢測(cè)方案。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

油茶籽脫酸油、浸提油茶籽毛油、壓榨油茶籽毛油，采用自制方式獲?。徊煌N類的品牌市售油茶籽油，編號(hào)1～8，采購(gòu)于沃爾瑪超市；丙酮、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、甲醇，均為色譜純（AR），由Tedia公司提供。

本研究短期觀察結(jié)果顯示，MSDAR和PETD均能有效治療青少年腰椎間盤(pán)突出癥。在嚴(yán)格把握手術(shù)適應(yīng)證、熟練掌握技術(shù)的前提下，MSDAR安全可靠有效，尤其對(duì)于椎間盤(pán)退變等級(jí)為Ⅲ級(jí)的LDH患者，行纖維環(huán)縫合可提高術(shù)后髓核“再水化”，有助于促進(jìn)患者腰椎功能恢復(fù)。但本研究樣本量較小，隨訪時(shí)間較短，遠(yuǎn)期兩組患者療效仍有待觀察。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1200型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司；LC-PAHs色譜柱（25 cm×4.6 mm，5 μm），美國(guó)Supeleo；配熒光檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司；固相萃取裝置，美國(guó) Supeleo；TDL-80-2B型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；堿性氧化鋁柱，博納艾杰爾科技；HiCapt Benzo型固相萃取柱，維泰克科技（武漢）有限公司；弗羅里柱，德國(guó)Simon Aldrich；C18柱，博納艾杰爾科技；Turbo VapO LV型氮?dú)獯祾哐b置，美國(guó)Biotage；硅膠柱，德國(guó)Simon Aldrich。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

（3）固相萃取洗脫劑的用量。為了確定更為精準(zhǔn)的固相萃取洗脫劑用量，本實(shí)驗(yàn)在B(a)P標(biāo)準(zhǔn)工作液上樣過(guò)柱，而后對(duì)其采取洗脫處理。其中，洗脫劑的添加量為5 mL，分5次洗脫，每次洗脫用量 1 mL。操作過(guò)程中，控制洗脫速度，要求耗時(shí)70 s完成一次洗脫。分別檢測(cè)每洗脫一次后的B(a)P回收率，并記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3.2 樣品前處理

上海市于2015年6月出臺(tái)了《關(guān)于進(jìn)一步推進(jìn)本市社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)綜合改革與發(fā)展的指導(dǎo)意見(jiàn)》，推行由1家社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心、1家區(qū)級(jí)醫(yī)院和1家市級(jí)醫(yī)院組成的“1+1+1”組合，為簽約糖尿病居民提供分級(jí)診療服務(wù)[5]。

（2）樣品凈化。選取真空固相萃取裝置作為凈化工具，按照以下4個(gè)操作步驟，對(duì)樣品采取凈化處理。①樣品活化處理。以固相萃取柱作為實(shí)驗(yàn)器皿，向其中添加丙酮、正己烷，用量分別為5.2 mL、 2.2 mL，攪拌均勻，使得器皿內(nèi)環(huán)境得以活化。②上樣。將第一步提取的2 mL上層溶液加入器皿中，控制流速1 mL/min。③淋洗。取3 mL正己烷和乙酸乙酯，按照體積為4∶1的比例混合，利用此部分混合液淋洗固相萃取柱，而后棄去淋洗液，并抽干小柱。④用3 mL丙酮洗脫樣品，控制洗脫流速2.1 mL/min。將所有樣品洗脫液收集起來(lái)，放置在50 ℃環(huán)境中，以氯作為媒介吹干樣品，向器皿中添加0.5 mL甲醇，采用渦旋方式處理，使得樣品得以溶解，完成定容操作，形成1 mL樣品，將其裝入樣瓶中，等待檢測(cè)。

為了提高實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)度，本次實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的使用條件進(jìn)行了限定，同時(shí)對(duì)檢測(cè)器的作業(yè)參數(shù)進(jìn)行了設(shè)置。本實(shí)驗(yàn)采用專用液相色譜柱LC-PAHs創(chuàng)造色譜柱實(shí)驗(yàn)條件，控制進(jìn)樣量為10 μL，保持柱溫恒定在30 ℃左右。按照1∶1的配比，將水和乙腈混合在一起，注入器皿中，控制流速1.0 mL/min。關(guān)于檢測(cè)器作業(yè)參數(shù)的設(shè)定，按照國(guó)家測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)置作業(yè)波長(zhǎng)為324 nm，激發(fā)波長(zhǎng)270 nm，檢測(cè)作業(yè)時(shí)間29 min。

1.3.3 苯并(a)芘檢測(cè)方法

（1）B(a)P固相萃取柱的選取。本次實(shí)驗(yàn)選取4種固相萃取柱作為實(shí)驗(yàn)裝置，包括HiCapt Benzo固相萃取柱、佛羅里硅土柱、C18柱、堿性氧化鋁柱。以濃度為10 μg/L的B(a)P甲醇溶液作為實(shí)驗(yàn)材料，用量0.5 mL，吸附在不同類型固相萃取柱上，重復(fù)3次操作，采用與前文相同的方法采取洗脫處理，完成固相萃取柱丙酮洗脫，經(jīng)過(guò)濃縮定容后，轉(zhuǎn)移到檢測(cè)儀器上。通過(guò)觀察儀器上B(a)P的吸附效果，給出相應(yīng)判斷。按照本實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的正己烷的萃取用量、凈化上樣用量，對(duì)實(shí)際回收率進(jìn)行調(diào)整，計(jì)算如下：

式中：M0為空白樣品測(cè)定值；μg/kg；M1為加標(biāo)樣品測(cè)定值；μg/kg；Z為加標(biāo)量；μg/kg。

2.1.1 B(a)P固相萃取柱

取1ml的B(a)P標(biāo)液，向其中加入甲醇，將其稀釋成1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，冰箱中4 ℃下密封 保存[5]。

1.3.4 色譜條件

從回歸分析結(jié)果看，可決系數(shù)為0.6579，調(diào)整后的可決系數(shù),達(dá)到0.6389，說(shuō)明所建模型整體上對(duì)樣本數(shù)據(jù)擬合較好，同時(shí)，在95%的置信度水平下LnFIR系數(shù)通過(guò)了t統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，表明深圳市金融資產(chǎn)規(guī)模對(duì)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)有顯著性影響；LnFIR與LnGDP之間的相關(guān)系數(shù)為3.9810，說(shuō)明LnFIR與LnGDP之間存在高度的正相關(guān)。由此可以證明，金融支持與經(jīng)濟(jì)發(fā)展之間的關(guān)系是正相關(guān)的，金融的發(fā)展會(huì)推動(dòng)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，符合理論分析中金融支持對(duì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的促進(jìn)作用。

2.1.2 固相萃取洗脫劑

(3) 液壓振動(dòng)：利用液壓力作為振動(dòng)的能量來(lái)源，相比于機(jī)械振動(dòng)和超聲波振動(dòng)，液壓振動(dòng)的振幅可以更大，振動(dòng)的精度更加精確。

2 結(jié)果與分析

2.1 苯并(a)芘檢測(cè)方法的確定

（2）固相萃取洗脫劑的選取。實(shí)驗(yàn)選擇4種洗脫溶劑作為實(shí)驗(yàn)材料，包括甲醇洗脫劑、二氯甲烷洗脫劑、丙酮洗脫劑、乙腈洗脫劑，利用這4種洗脫劑，完成固相萃取柱洗脫處理，檢測(cè)B(a)P的回收率。實(shí)驗(yàn)中，控制其他參數(shù)保持不變。

我得說(shuō)，坐擁保時(shí)捷911 Carrera RS 2.7只要有錢(qián)就行，但要想充分發(fā)揮它所蘊(yùn)藏的潛力，絕非是一件易事。如果你能擁有R?hrl Walter的駕駛技術(shù)，那也沒(méi)有問(wèn)題，畢竟他早在40多年前就和這輛特殊的保時(shí)捷融為一體了。雖然，以今天的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)衡量這輛身價(jià)奇高的保時(shí)捷，它各方面都顯得有些松松垮垮的了。

按照1.3.2（1）中方法測(cè)定B(a)P固相萃取柱回收率結(jié)果如下：①HiCapt Benzo固相萃取柱添加洗脫劑為丙酮，加標(biāo)量為10.5 μg/L，測(cè)得固相萃取柱回收率為（92.30±0.45）%；②佛羅里硅土柱添加洗脫劑為丙酮，加標(biāo)量為10.5 μg/L，固相萃取柱回收率為（85.65±0.77）%；③C18柱添加洗脫劑為二氯甲烷，加標(biāo)量為10.5 μg/L，固相萃取柱回收率為（88.43±0.45）%；④堿性氧化鋁柱添加洗脫劑為二氯甲烷，加標(biāo)量為10.5 μg/L，固相萃取柱回收率為（53.60±1.55）%。

檢測(cè)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)選取的4種固相萃取柱的吸附回收率數(shù)值差異較為顯著（p＜0.05），由此可以判斷，固相萃取柱的類別對(duì)B(a)P的吸附作用差異顯著。另外，通過(guò)對(duì)比4種固相萃取柱的吸附回收率數(shù)值，HiCapt Benzo數(shù)值最大，回收率為（92.30±0.45）%。所以，應(yīng)該選擇HiCapt Benzo作為B(a)P固相萃取柱。

在水泥水化放熱過(guò)程中，放熱速度與放熱最高峰時(shí)釋放出來(lái)的熱量，會(huì)對(duì)水泥水化反應(yīng)過(guò)程的進(jìn)度產(chǎn)生重要的影響[2]。一般來(lái)講，溫度升高會(huì)促進(jìn)水泥的水化反應(yīng)，而水化反應(yīng)的加快會(huì)進(jìn)一步放出熱量，這樣會(huì)導(dǎo)致混凝土的內(nèi)外溫差大，最終因?yàn)闊崦浝淇s而產(chǎn)生裂縫。裂縫對(duì)混凝土強(qiáng)度和密實(shí)度的影響很大，并最終影響到工程的整體結(jié)構(gòu)安全和使用功能。所以，控制水泥的水化速度至關(guān)重要。

觀察比較干預(yù)前后的空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖以及糖化血紅蛋白（hba1c）變化情況，糖尿病知識(shí)掌握情況，服藥依從性和生活方式改善情況。

測(cè)試結(jié)果顯示，甲醇洗脫劑應(yīng)用下B(a)P的回收率為72.56%，二氯甲烷洗脫劑應(yīng)用下B(a)P的回收率為90.01%，丙酮洗脫劑應(yīng)用下B(a)P的回收率為92.54%，乙腈洗脫劑應(yīng)用下B(a)P的回收率為76.08%。

與乙腈洗脫劑、甲醇洗脫劑相比，甲醇洗脫劑和二氯甲烷洗脫劑應(yīng)用下B(a)P的回收率更高，優(yōu)勢(shì)更為顯著。由此可以推斷，這兩種洗脫劑對(duì)B(a)P的洗脫影響更大。由于二氯甲烷自身基質(zhì)容易遭受干擾，不利于得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。因此，丙酮是最佳洗脫劑。

（1）提取樣品。采用稱量的方式，從樣品中提取部分油茶籽油樣品，重量為0.5 g，將此部分樣品放置于聚丙烯離心管中，器皿容積為50 mL。向器皿中加入正己烷，用量3.1 mL，采用渦旋方式混合兩部分樣品，持續(xù)時(shí)間70 s。向器皿中添加超純水，用量2.2 mL，繼續(xù)采用渦旋方式混合兩部分樣品，持續(xù)時(shí)間70 s，按照4 000 r/min速度離心，持續(xù)180 s。提取溶液中的上層溶液，提取量為2 mL。

2.1.3 固相萃取洗脫劑

檢測(cè)結(jié)果顯示，丙酮洗脫體積為1 mL時(shí)，B(a)P回收率為52.29%±1.93%aA；丙酮洗脫體積為2 mL時(shí)，B(a)P回收率為73.60%±1.05%aB；丙酮洗脫體積為3 mL時(shí)，B(a)P回收率為92.23%±0.59%aC；丙酮洗脫體積為4 mL時(shí)，B(a)P回收率為92.04%±0.59%aC；丙酮洗脫體積為5 mL時(shí)，B(a)P回收率為91.94%±0.95%aC（大寫(xiě)字母代表差異極顯著，p＜0.05，小寫(xiě)字母代表差異顯著，p＜0.01）。

上述檢測(cè)結(jié)果中，與丙酮1～2 mL用量相比，使用3～5 mL丙酮洗脫時(shí)，B(a)P回收率差異顯著性較強(qiáng)（p＜0.01）。當(dāng)丙酮用量達(dá)到3 mL時(shí)，回收率出現(xiàn)了明顯增加，而后隨著用量的增加，回收率并沒(méi)有出現(xiàn)增加變化趨勢(shì)，而是開(kāi)始小幅度下降，并且回收率變化差異顯著性較差（p＞0.05）。3～5 mL丙酮洗脫對(duì)B(a)P回收率影響較小，從環(huán)保角度出發(fā)應(yīng)盡可能減少丙酮用量，所以3 mL用量為最佳。綜上檢測(cè)分析，最佳苯并(a)芘檢測(cè)方法：選取HiCapt Benzo作為固相萃取柱，利用丙酮完成固相萃取柱洗脫，控制用量為3 mL。

4.在領(lǐng)用材料的生產(chǎn)制作過(guò)程中存在串料、替代料使用的現(xiàn)象，且在過(guò)程中沒(méi)有留下相應(yīng)的信息軌跡，導(dǎo)致無(wú)法歸集至相應(yīng)成本對(duì)象。

2.2 精煉程度不同條件下油茶籽油B(a)P加標(biāo)回收率的測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)選取浸提油茶籽毛油、壓榨油茶籽毛油、市售某品牌油茶籽油、油茶籽脫酸油作為樣本，設(shè)置樣本數(shù)量為6份，分別將這些樣本放入聚丙烯離心管（容積25 mL）中。設(shè)置空白對(duì)照組3份，實(shí)驗(yàn)組3份，即每一種樣本拆分為兩部分，其中3份添加B(a)P標(biāo)準(zhǔn)工作液，用量500 μL（10 μg/L），振蕩搖勻，而后放在檢測(cè)儀上，獲取B(a)P加標(biāo)回收率，并計(jì)算加標(biāo)樣品平均檢測(cè)值，結(jié)果如表1所示。

表1 精煉程度不同條件下油茶籽油B(a)P加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果

目前，應(yīng)用比較多的B(a)P加標(biāo)回收率檢測(cè)方法為反相高效液相色譜法，利用該方法檢測(cè)到的油茶籽油B(a)P含量（回收率）均值為93.2%，而本文提出的檢測(cè)方法，測(cè)得4種油茶籽油中B(a)P回收率均超過(guò)了93.2%。其中，壓榨油茶籽毛油的B(a)P回收率達(dá)到了104.49%。由此看來(lái)，本文提出的檢測(cè)方法得到的B(a)P回收率較高。另外，當(dāng)前應(yīng)用比較多的氧化鋁活度測(cè)定法，加標(biāo)量相同情況下得到的樣品平均檢測(cè)值為（8.838±0.497）μg/kg，該數(shù)值明顯低于本文提出的檢測(cè)方法。本次檢測(cè)中，樣品平均檢測(cè)最小值為（8.871±0.076） μg/kg。因此，本文提出的B(a)P檢測(cè)方法實(shí)際應(yīng)用價(jià)值較高。

2.3 8種油茶籽油中苯并(a)芘含量的檢測(cè)

采用與實(shí)驗(yàn)2相同的檢測(cè)方法，選取8種不同的樣品，均為品牌市售油茶籽油，每種樣品準(zhǔn)備6份，每一種樣本拆分為兩部分，設(shè)置空白對(duì)照組3份，實(shí)驗(yàn)組3份。每份樣品單獨(dú)放入聚丙烯離心管（容積25 mL）中，向裝有實(shí)驗(yàn)組樣品的器皿中添加B(a)P標(biāo)準(zhǔn)工作液，用量500 μL（10 μg/L），振蕩搖勻，而后放在檢測(cè)儀上，獲取苯并(a)芘含量數(shù)據(jù)，同時(shí)檢測(cè)未添加B(a)P標(biāo)準(zhǔn)工作液的樣品苯并(a)芘含量，結(jié)果如表2所示。兩種方法下產(chǎn)生的8種品牌油茶籽油中苯并(a)芘含量檢測(cè)結(jié)果差異較小，相比之下，國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法應(yīng)用下得到的苯并(a)芘含量更高。從整體來(lái)看，本文提出的檢測(cè)方法在穩(wěn)定性能方面具備較大優(yōu)勢(shì)，可以得到比較精準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果，不易受外界因素干擾，與當(dāng)前已經(jīng)取得的研究成果相比，該檢測(cè)方法更貼近正確數(shù)值，可作為油茶籽油中苯并(a)芘檢測(cè)工具。

表2 兩種檢測(cè)方法下油茶籽油中苯并(a)芘含量檢測(cè)結(jié)果對(duì)比表（單位：μg/kg）

4 結(jié)論

本文圍繞油茶籽油中苯并(a)芘檢測(cè)方法展開(kāi)研究，針對(duì)傳統(tǒng)檢測(cè)方法存在的不足，提出一種基于HPLC-FLD法的檢測(cè)方法。該方法利用LC-PAHs專用液相色譜柱作為主要實(shí)驗(yàn)裝置，通過(guò)合理選取固相萃取柱種類、固相萃取洗脫劑種類，確定最佳洗脫劑用量，形成完整的苯并(a)芘檢測(cè)方法。精煉程度不同條件下油茶籽油B(a)P加標(biāo)回收率測(cè)定、8種油茶籽油中苯并(a)芘含量檢測(cè)結(jié)果顯示，本文提出的B(a)P檢測(cè)回收率較反相高效液相色譜法的B(a)P回收率更高，并且較氧化鋁活度測(cè)定法的加標(biāo)量相同情況下得到的樣品平均檢測(cè)值更高，更加貼近正確數(shù)值，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。