王丕明1，張府君1，任建萍

(1.山西藥科職業(yè)學(xué)院, 山西 太原 030031;2.山西衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院，山西 晉中 030619)

熟地黃為玄參科植物干燥塊根生地黃(Rehmannia glutionsa Libosch.)依照《中國(guó)藥典》炮制通則酒燉法和蒸法炮制加工而成的，其外觀烏黑發(fā)亮有光澤，質(zhì)柔軟黏性大而味甜[1]。近年來(lái)大量藥理實(shí)驗(yàn)證明熟地黃活性成分毛蕊花糖苷具有抗氧化、抗腎炎、神經(jīng)保護(hù)、強(qiáng)心等多種生物活性[2,3]。故本實(shí)驗(yàn)采用陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法和雙門(mén)蒸柜新工藝兩種不同的炮制方法制備熟地黃，考察新工藝對(duì)其質(zhì)量的影響，報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀(島津LC-15C)，電子分析天平(賽多利斯公司，CP225D型)，電熱恒溫水浴鍋(上海雙旭電子有限公司，HH.S11-4)，數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司，KH7200DB型)，高速萬(wàn)能藥材粉碎機(jī)(西安特普訊儀器設(shè)備有限公司，DFY-400C)，數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司，GZX-9146MBE)

1.2 藥品與試劑

地黃(產(chǎn)地：河南省，購(gòu)置于國(guó)藥樂(lè)仁堂河北藥業(yè)有限公司)，按《中國(guó)藥典》2020年版一部的檢測(cè)方法檢驗(yàn)合格。 試劑：甲醇(色譜純，OCEANPAK)；乙腈(色譜純，OCEANPAK)；娃哈哈純凈水

1.3 對(duì)照品

毛蕊花糖苷(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111530-201310，純度為93.3%)

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 性狀

兩種炮制工藝制得的熟地黃性狀相對(duì)穩(wěn)定。陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法制得的熟地黃樣品性狀較優(yōu)良達(dá)到了“黑如漆，甜如飴”的傳統(tǒng)炮制要求。雙門(mén)蒸柜新方法制得的熟地黃樣品性狀達(dá)到《中國(guó)藥典》要求。

2.2 熟地黃浸出物測(cè)定

依據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版四部，水溶性浸出物測(cè)定法(通則2201)項(xiàng)下的冷浸法測(cè)定。熟地黃水溶性浸出物的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 傳統(tǒng)炮制法制得熟地黃水溶性浸出物測(cè)定結(jié)果

表2 新方法制得熟地黃水溶性浸出物的測(cè)定結(jié)果

雙門(mén)蒸柜新方法制得的熟地黃水溶性浸出物(平均值為79.44%)比陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法制得的熟地黃水溶性浸出物(平均值為70.56%)含量高。

2.3 熟地黃毛蕊花糖苷含量測(cè)定

照《中國(guó)藥典》2020年版一部高效液相色譜法測(cè)定。

2.3.1 色譜條件 色譜柱：VP-ODS/C18/SHIMADZU(250 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%醋酸(16∶84)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：334 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)不低于5 000。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 取毛蕊花糖苷對(duì)照品5.04 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。另取1 mL，置10 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。對(duì)照品溶液濃度為(0.010 08 mg/mL×93.3%)9.404 64 μg/mL。

2.3.3 供試品溶液制備 稱(chēng)取熟地黃最粗粉約2 g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，密封，稱(chēng)定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

用島津LC-15C型高效液相色譜儀，對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣體積各為20 μL進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖，計(jì)算，即得。

2.3.4 方法學(xué)考察

2.3.4.1 線性關(guān)系 取上述毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液(濃度為9.404 64 μg/mL)進(jìn)樣，體積分別為5，10，15，20，25 μL，按“2.3.1”項(xiàng)下的含量測(cè)定的色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。所得線性關(guān)系結(jié)果見(jiàn)表3。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，其進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，得到的回歸方程為：Y=14 540X-6 006.3，r=0.999 6，見(jiàn)圖1。結(jié)果表明毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在0.047～0.235 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表3 毛蕊花糖苷線性關(guān)系

圖1 毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.4.2 精密度試驗(yàn) 取毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液(濃度為9.404 64 μg/mL)進(jìn)樣，體積為20 μL，按“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，所得的平均峰面積值為281 091.5，RSD為1.21%，結(jié)果表明該儀器具有良好的精密度。精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取一份供試品溶液，于室溫下放置，分別在0、4、8、10、12、16、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定毛蕊花糖苷的峰面積，在24 h內(nèi)毛蕊花糖苷的平均峰面積值為791 527.6，RSD為0.23%，表明熟地黃提取溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取相同批次的熟地黃粗粉6份，按“2.3.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，進(jìn)樣，體積為20 μL，按“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，并記錄色譜圖，計(jì)算含量，測(cè)得熟地黃中毛蕊花糖苷的平均含量為0.027 0%，RSD值為1.20%。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的熟地黃粗粉6份，每份約2 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入濃度為100 μg/mL的毛蕊花糖苷儲(chǔ)備液5 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并且按“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，并記錄色譜圖，然后計(jì)算回收率，所得的平均回收率為98.71%，其RSD值為1.29%，表明該方法的回收率良好。加回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4.6 熟地黃樣品含量測(cè)定結(jié)果 分別取不同批號(hào)的熟地黃粗粉，按“2.3.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣，體積各為20 μL，按“2.3.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，并計(jì)算各樣品中毛蕊花糖苷含量。色譜圖見(jiàn)圖2、3，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表8、9。

圖2 毛蕊花糖苷對(duì)照品

圖3 供試品溶液色譜圖

表8 陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法制得熟地黃毛蕊花糖苷含量測(cè)定結(jié)果

表9 雙門(mén)蒸柜新方法制得熟地黃毛蕊花糖苷含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明，陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量在0.021 9%～0.023 1%之間，雙門(mén)蒸柜新方法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量在0.025 5%～0.026 8%之間，比較穩(wěn)定。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)炮制工藝與新工藝兩種方法制得的熟地黃進(jìn)行檢測(cè)比較，兩種方法制得的熟地黃的毛蕊花糖苷含量、浸出物含量及性狀均達(dá)到《中國(guó)藥典》2020年版一部的要求，陶瓷蒸煮罐傳統(tǒng)炮制法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量及浸出物含量略低，雙門(mén)蒸柜新方法制得的熟地黃其炮制工藝還不夠成熟，在性狀上還需進(jìn)一步改進(jìn)。

4 討論

對(duì)于熟地黃的炮制一直以來(lái)都秉承著古法炮制九蒸九曬的傳統(tǒng)，近來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，地黃在炮制加工后會(huì)產(chǎn)生異毛蕊花糖苷，且異毛蕊花糖苷的產(chǎn)生及變化受時(shí)間及溫度的影響較大該發(fā)現(xiàn)對(duì)地黃炮制機(jī)制的探討及炮制工藝的優(yōu)化具有一定的參考意義。