張立恒，1任德強，1孫 博，1柴 晶2

（1.哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司， 黑龍江 哈爾濱150000；2.大連雅立峰生物制藥有限公司， 遼寧 大連116620）

試劑盒是具有特異、敏感、快速而且便于操作的檢測方式，所以目前在疾病診斷的過程中應(yīng)用的很多，而且占據(jù)相對比較重要的地位。當前國內(nèi)的獸用體外檢測市場上,試劑盒所占的市場份額也比較大，但仍然具有巨大的發(fā)展空間。本文主要針對獸用快速診斷技術(shù)的概況進行分析，總結(jié)相應(yīng)的實際生產(chǎn)研究經(jīng)驗，供參考。

1 ELISA技術(shù)的發(fā)展概況

ELISA技術(shù)在我國已經(jīng)應(yīng)用許多年疾病，并且實際應(yīng)用過程中衍生出對多類疾病成熟可靠的檢測方法，其檢測靈敏度及特異性都有提高。全自動酶免分析系統(tǒng)在國內(nèi)外的檢驗科被廣泛的應(yīng)用于臨床，是免疫檢測的主要的基礎(chǔ)手段。目前，ELISA技術(shù)已被的應(yīng)用于畜禽疾病的檢測中，對動物流行性疾病的檢測結(jié)果更加的可靠，是比較實用的檢測方式。由于酶標分析儀并不是每個獸醫(yī)從業(yè)人員都能接觸到,普遍應(yīng)用于比較大型的動物醫(yī)院,就是主要是大城市，以及之外各地的農(nóng)科院校開設(shè)的醫(yī)院有所應(yīng)用。因此目前在我國還沒有受到廣泛的普及應(yīng)用，還有比較大的研究和推廣空間。

2 分子生物學檢測手段

近年來，隨著科學技術(shù)的不斷發(fā)展，許多分子生物學檢測方式被開發(fā)和引入到動物疾病的檢測工作當中。

（1）RFLP、PCR以及PCR衍生技術(shù)。PCR-RFLP法主要是對特定酶切位點的有關(guān)突變進行檢測;而AS-PCR可對等位基因進行引物設(shè)計,并且根據(jù)PCR產(chǎn)物有無的情況以對基因型進行鑒定。PCR技術(shù)與蛋白質(zhì)免疫技術(shù)的結(jié)合衍生出新型的免疫PCR基因探針，采用特殊且有共價結(jié)合能力的分子,常見的如生物素-親合素、葉綠素等將蛋白質(zhì)和核酸進行鏈接,從而構(gòu)成具有特異性抗性的抗體基因探針。此種復合型的探針能夠診斷對基因的表達產(chǎn)物。但目前該技術(shù)仍處于研發(fā)的階段國內(nèi)外很多實驗室都看到了此方法所具的優(yōu)勢,競相開發(fā)此技術(shù)的檢測手段、自動化設(shè)備以及試劑盒。而且市場上已經(jīng)出現(xiàn)了不少此類試劑盒。

（2）肽核酸技術(shù)近年來,肽核酸也被應(yīng)用在PCR檢測中開辟了以PCR技術(shù)作為基礎(chǔ)的檢測的新領(lǐng)域。該項技術(shù)能對不同基固為點突變進行檢測。所以在檢測與SNP相關(guān)的位點突變中的運用前景很大。

（3）基因芯片該技術(shù)是高通量密集型技術(shù)的代表?；蛐酒夹g(shù)在最早稱為逆向點雜交技術(shù)，該技術(shù)正在向精密化和自動化的趨勢發(fā)展。最近開發(fā)的DNA芯片系統(tǒng)，是采用熒光素對DNA片段進行標記,然后應(yīng)用激光掃描技術(shù)來采集雜交結(jié)果的熒光信號。通過利用計算機處理熒光信號，對每一點的熒光強度數(shù)字化開展具體分析，可提高對樣品處理的自動化程度和檢測結(jié)果的準確性。

而研制出的新一代液相基因芯片技術(shù)，具有高通量的特點,而且在敏感性、重復性以及信息的量和精確性方面與傳統(tǒng)固相芯片相比都要更高些,在科研開發(fā)工作中屬于理想的工具,在疾病的檢測中同樣也是檢測核酸、蛋白質(zhì)最為可靠的工具。而基因芯片技術(shù)的優(yōu)勢是對樣品的處理能力強大、具有自動化程度高，準確性強。特別是在檢測突變型較多的遺傳疾病方面，表現(xiàn)出更加便捷、準確且可靠的優(yōu)點?；蛐酒夹g(shù)在工作原理和對樣品處理結(jié)果的過程方面比傳統(tǒng)檢測方法有了很大突破，有較強的樣品處理能力，用途也更加廣泛，自動化程度更高，所以有很高的商業(yè)價值,已經(jīng)成為分子生物學技術(shù)領(lǐng)域的熱點。

目前，分子生物學者對基因芯片的研究還在繼續(xù)發(fā)展階段，而分子生物學應(yīng)用與畜禽疾病的檢測過程中更具有先進性和未來性,雖然分子生物學檢測靈敏度方面要強于傳統(tǒng)的血清學檢測,但是血清學檢測方式具有特殊的臨床意義，也是分子生物學不能完全替代的。因此，ELISA技術(shù)還是具有自身發(fā)展空間的。因為應(yīng)用生物分子學和ELISA技術(shù)對疾病開展檢測對我國的廣大農(nóng)村養(yǎng)殖地區(qū)、發(fā)達飼養(yǎng)區(qū)的大型養(yǎng)殖場都比較適宜應(yīng)用，以及國家對野生動物疾病進行監(jiān)測的過程中也可以很好的應(yīng)用。