左二訊 劉輝

(1. 河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 洛陽(yáng) 471000；2. 洛陽(yáng)市中心醫(yī)院超聲科，河 南洛陽(yáng)471000)

潰瘍性結(jié)腸炎屬于非特異性慢性腸道疾病，同時(shí)也屬于較為常見(jiàn)的胃腸道炎性疾病，多出現(xiàn)炎癥或潰瘍現(xiàn)象，可累及直腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸，臨床多表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、血便等癥狀。臨床對(duì)于潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制并不完全清楚，但有研究認(rèn)為潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)作主要與環(huán)境、遺傳、機(jī)體免疫功能以及腸道菌群有關(guān)[1]。

腸道內(nèi)存在細(xì)菌群體，正常情況下參與腸道內(nèi)物質(zhì)的分解、代謝，維持腸道正常生理功能以及免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定、抑制疾病的發(fā)生發(fā)展。當(dāng)處于慢性疾病狀態(tài)下，菌群數(shù)量、種類會(huì)出現(xiàn)，可能參與內(nèi)源性腸道感染的啟動(dòng)和免疫系統(tǒng)的抑制等[2]。對(duì)此，本研究對(duì)潰瘍性結(jié)直腸炎患者腸道菌群、炎性因子變化及相關(guān)性進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年2月至2020年7月于我院救治的122例潰瘍性結(jié)直腸炎患者為此次研究對(duì)象，根據(jù)分組時(shí)患者病情將其分為活動(dòng)組（n=75）以及緩解組（n=47）；其中活動(dòng)組女36例，男39例；平均年齡為（36.69±6.78）歲。緩解組女20例，男27例；平均年齡為（56.78±6.49）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)過(guò)臨床檢查，所有患者均符合《潰瘍性結(jié)腸炎中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)（2017年）》中潰瘍性結(jié)腸炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；（2）全程在本院治療且臨床資料完整；（3）患者及家屬均知情并同意參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）中途退出研究者；（2）患有其他感染性腸道疾病者；（3）精神疾病或存在相關(guān)家族史，不能配合本研究者。

另選取同時(shí)間在我院進(jìn)行健康體檢者62例設(shè)為對(duì)照組，男30例，女32例，平均年齡為（37.13±6.36）歲，將三組資料進(jìn)行比較無(wú)明顯差異，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

取所有患者0.5 g的糞便，放入含有4.5 mL稀釋液的小瓶?jī)?nèi)，將混合器設(shè)置為300 rpm將其震蕩1 min。后使用稀釋液根據(jù)10倍稀釋法將其稀釋至10-8后，取10 μL進(jìn)行接種，需氧培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌、腸球菌，厭氧培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌、雙歧桿菌，均置于37℃溫箱中培養(yǎng)。上述培養(yǎng)基均購(gòu)于常州貝源鑫生物科技有限公司。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.3.1 腸道菌群

經(jīng)革蘭染色、生化進(jìn)行鑒定，計(jì)算每克糞便所含菌群的數(shù)量（CUF·g-1）。

1.3.2 炎性因子

收集所有參與研究者早晨空腹靜脈血2ml靜置30 min后，使用離心機(jī)3000r/min分離血清，10 min后取出低溫保存。使用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme Linked Immune Sorbent Assay，ELISA）對(duì)腫瘤壞死因子-α( Tumor necrosis factor，TNFα) 、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）進(jìn)行檢測(cè)；內(nèi)毒素采用鱟試劑三肽顯色基質(zhì)偶氮法檢測(cè)。

1.3.3 免疫指標(biāo)

收集所有參與研究者早晨空腹靜脈血3ml，使用枸櫞酸鈉抗凝，隨后使用離心機(jī)3000 rpm離心20 min后獲取上清液，存放于-80℃冰箱待檢。使用免疫透射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgA）、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）、免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）

1.3.4 相關(guān)性

采用Spearman分析菌群數(shù)量和炎性指標(biāo)間雙變量相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

本研究數(shù)據(jù)使用SPSS22.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料通過(guò)平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）描述，t進(jìn)行檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料通過(guò)率或構(gòu)成比描述，χ2進(jìn)行檢驗(yàn)，菌群數(shù)量和炎性指標(biāo)間進(jìn)行雙變量相關(guān)性分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組腸道菌群比較

大腸桿菌、腸球菌數(shù)量：活動(dòng)組>緩解組>對(duì)照組，雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量：活動(dòng)組<緩解組<對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三組腸道菌群比較（±SD）

表1 三組腸道菌群比較（±SD）

注：與緩解組、對(duì)照組相比，*P＜0.05。

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2.2 三組炎性因子比較

將三組炎性因子（TNF-α 、IL-6、IL-17）以及內(nèi)毒素進(jìn)行對(duì)比，活動(dòng)組>緩解組>對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表2

表2 三組炎性因子比較（±SD）

表2 三組炎性因子比較（±SD）

注：與緩解組、對(duì)照組相比，*P＜0.05。

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2.3 三組免疫指標(biāo)比較

IgG、IgA水平：活動(dòng)組<緩解組<對(duì)照組，IgM水平：活動(dòng)組>緩解組>對(duì)照組（P>0.05）。見(jiàn)表3。

表3 三組免疫指標(biāo)比較（±SD，g·L-1）

表3 三組免疫指標(biāo)比較（±SD，g·L-1）

注：與緩解組、對(duì)照組相比，*P>0.05。

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2.4 相關(guān)性

將菌群數(shù)量和炎性指標(biāo)間進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，大腸桿菌、腸球菌數(shù)量與TNF-α、IL-6、IL-1以及內(nèi)毒素呈正相關(guān)，雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量與TNF-α 、IL-6、IL-17以及內(nèi)毒素水平呈負(fù)相關(guān)，見(jiàn)表4。

表4 菌群數(shù)量和炎性指標(biāo)間進(jìn)行雙變量相關(guān)性分析

3 討論

機(jī)體內(nèi)復(fù)雜的腸道微生態(tài)系統(tǒng)大多由腸道菌群構(gòu)成，其在腸道免疫系統(tǒng)、抑制致病菌、吸收合成營(yíng)養(yǎng)等方面具有十分重要的作用[4]。有研究認(rèn)為，潰瘍性結(jié)直腸炎發(fā)病原因?yàn)槟c黏膜的屏障功能出現(xiàn)異常，腸道菌群紊亂、異常免疫反應(yīng)等共同的作用下所導(dǎo)致的[5]。

因此，本研究對(duì)潰瘍性結(jié)直腸炎患者的腸道菌群數(shù)量進(jìn)行分析比較，結(jié)果顯示，活動(dòng)組患者大腸桿菌、腸球菌數(shù)量高于緩解組、對(duì)照組，雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量明顯低于緩解組、對(duì)照組，說(shuō)明當(dāng)患者體內(nèi)菌群失調(diào)時(shí)，會(huì)導(dǎo)致腸黏膜的屏障功能降低，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，機(jī)體出現(xiàn)腸道炎癥。本研究對(duì)患者免疫指標(biāo)水平進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)三組免疫水平比較無(wú)差異，可能是由于本次研究納入病例數(shù)較少，同時(shí)潰瘍性結(jié)直腸炎是多種因素相互影響所形成的疾病，免疫因素并不是唯一因素，因此導(dǎo)致IgG、IgM、IgA無(wú)明顯變化。

炎性因子具有調(diào)節(jié)細(xì)胞功能、維持生理平衡等作用，其中促炎因子與抗炎因子失衡在潰瘍性結(jié)直腸炎發(fā)生發(fā)展中起到一定作用[6]?，F(xiàn)代研究表明TNF-a是炎癥啟動(dòng)因子，參與著炎癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。IL-6屬于促炎細(xì)胞因子，可加劇腸黏膜炎性反應(yīng)；IL-17對(duì)腸黏膜的炎癥損傷具有直接的介導(dǎo)作用[7-9]。因此本研究對(duì)患者體內(nèi)炎性因子進(jìn)行檢測(cè)，觀察其變化，同時(shí)還對(duì)炎性因子與腸道菌群的相關(guān)性進(jìn)行分析。

結(jié)果顯示?；顒?dòng)組TNF-α、IL-6、IL-17以及內(nèi)毒素均明顯高于緩解組以及對(duì)照組；且大腸桿菌、腸球菌數(shù)量與炎性因子呈正相關(guān)，雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量與炎性因子呈負(fù)相關(guān)。主要是由于腸管內(nèi)菌群失調(diào)致使機(jī)體產(chǎn)生或加劇炎性反應(yīng)，增加腸管黏膜通透性，促使內(nèi)毒素與相應(yīng)的炎癥因子分泌顯著增加[10]。

綜上所述，潰瘍性結(jié)直腸炎患者存在明顯菌群失衡，且菌群變化與疾病炎性程度關(guān)系密切。