朱曉龍，邱念念，狐啟貴

（貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科，貴州 貴陽(yáng) 550001）

特發(fā)性間質(zhì)肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種由多種原因引發(fā)的以兩肺彌漫性間質(zhì)纖維化為特征的疾病，導(dǎo)致患者彌散功能降低，最終心肺功能衰竭致死[1]。IPF發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且致死率高，無(wú)有效根治措施，成為全球共同關(guān)注的醫(yī)學(xué)熱點(diǎn)問(wèn)題。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將IPF歸為“肺痹”“肺痿”范疇，認(rèn)為其為本虛標(biāo)實(shí)之證，痰濁、瘀血為其病理因素[2-3]。有研究顯示，以溫陽(yáng)為主治療IPF療效顯著[4]，本研究探討溫陽(yáng)散纖湯對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)的小鼠肺間質(zhì)纖維化的保護(hù)作用，旨在為臨床治療特發(fā)性間質(zhì)肺纖維化提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 105 只C57BL/6 小鼠購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 溫陽(yáng)散纖湯（廣東一方制藥有限公司，批號(hào)：0139573621629）；鹽酸博來(lái)霉素（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：801G023）；甲基潑尼松龍（MACKLIN，批號(hào)：C10125981）；顯微鏡(CX41，OLYMPUS)。

1.3 動(dòng)物造模、分組及給藥[5]75只小鼠制作成實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停盒∈?%水合氯醛麻醉后，取仰臥位固定于操作臺(tái)上，頸部剃毛并用碘氟消毒后，沿頸部正中做1 cm切口，鈍性分離氣管前組織暴露氣管，然后迅速向小鼠氣管內(nèi)注入5 mg/kg博來(lái)霉素0.2～0.3 mL，注射后使小鼠直立并左右旋轉(zhuǎn)，以使博來(lái)霉素在肺組織內(nèi)均勻分布，最后在無(wú)菌條件下縫合皮膚。另取15只小鼠以同樣方法向氣管內(nèi)注入0.3 mL 0.9%氯化鈉溶液溶液，為假手術(shù)組。將造模成功小鼠隨機(jī)分為5 組，即模型組，“溫陽(yáng)散纖湯”低、中、高劑量組，陽(yáng)性組，另外設(shè)正常對(duì)照組（無(wú)任何外界刺激處理），每組15 只。溫陽(yáng)散纖湯組在造模后第2天，每天以5.663、11.325、22.650 g生藥/kg小鼠體質(zhì)量灌胃，陽(yáng)性組以甲強(qiáng)龍15 mg/kg小鼠體重腹腔注射，每天1次，共4周。正常對(duì)照組、假手術(shù)組及模型組灌以等體積的0.9%氯化鈉溶液，每天1 次，共4 周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取小鼠左肺組織用于HE染色實(shí)驗(yàn)。

1.4 HE 染色 取出組織流水沖洗數(shù)小時(shí)，經(jīng)70%、80%、90%各級(jí)乙醇溶液脫水，純酒精、二甲苯等量混合液15 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各放置15 min（至透明為止）。石蠟包埋，切片。將石蠟切片進(jìn)行烤片，然后脫蠟，水化。將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色3 min，鹽酸乙醇分化液分化15 s，稍水洗，返藍(lán)液返藍(lán)15 s，流水沖洗，伊紅染色，流水沖洗，脫水，透明，中性樹脂封片，鏡檢。

2 結(jié)果

2.1 模型建造并分組取樣 C57BL/6肺間質(zhì)纖維化小鼠模型構(gòu)建成，見圖1。

圖1 小鼠造模圖Figure 1 Model drawing of mice

2.2 HE 染色檢測(cè)各組小鼠肺組織病理變化 正常組小鼠肺間隔正常，無(wú)炎癥因子浸潤(rùn)；假手術(shù)組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)與正常組類似；模型組小鼠肺間隔增寬，肺泡結(jié)構(gòu)被破壞、肺泡炎癥明顯，大片炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；溫陽(yáng)散纖湯低、中、高劑量組小鼠肺間隔厚度有所改善，炎癥反應(yīng)減弱，肺泡結(jié)構(gòu)較為完整；陽(yáng)性組小鼠結(jié)構(gòu)肺間隔厚度正常，肺泡結(jié)構(gòu)完整度較好，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度低，見圖2。

3 討論

圖2 各組大鼠肺組織病理變化（HE染色，×200）Figure 2 Pathological changes of lung tissue in each group(He staining,×200)

中醫(yī)藥能有效改善IPF 患者臨床癥狀，降低患者死亡率，并提高患者生存質(zhì)量。溫陽(yáng)散纖湯是本研究的臨床經(jīng)驗(yàn)方，以補(bǔ)骨脂、熟地黃、黃精、淫羊藿、黃芪、麥冬為主方，具有補(bǔ)益肺腎，扶正固本，養(yǎng)陰生津之功效，再佐以川芎丹、參當(dāng)、歸地龍，兼具活血化瘀通脈之療效，諸藥合用，共奏益肺活血、納氣平喘，扶正祛邪之功效。以往研究顯示，此方劑中單藥對(duì)肺纖維化具有顯著改善作用，如黃芪甲苷可通過(guò)降低VEGF、VEGFR2 基因表達(dá)水平，發(fā)揮抗肺纖維化作用[6]。黃芪糖蛋白抑制小鼠肺纖維化的發(fā)展，其作用機(jī)制可能與降低肺組織中TGF-β1表達(dá)有關(guān)[7]。地龍可通過(guò)與靶蛋白TGF-β1結(jié)合從而抑制α-SMA 的表達(dá)以延緩肺纖維化進(jìn)程[8]。地龍通過(guò)抑制NF-κB 活性，下調(diào)TGF-β1 表達(dá)，抑制膠原合成進(jìn)而抑制博來(lái)霉素誘導(dǎo)的大鼠IPF[9]。丹參酮ⅡA通過(guò)iNOS通路調(diào)控下游炎性因子釋放，從而緩解小鼠肺纖維化[10]。提示復(fù)方中藥對(duì)于IPF小鼠具有改善作用。

IPF主要經(jīng)歷3個(gè)階段：早期機(jī)體啟動(dòng)炎癥/免疫反應(yīng)階段，多種致病因素?fù)p害肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞；中期階段，多種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并釋放大量炎癥因子，加重組織損傷，并引發(fā)肺間質(zhì)增生；晚期階段，大量成纖維細(xì)胞生成、膠原聚集、細(xì)胞外基質(zhì)代謝紊亂并以反饋形式加重炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肺泡正常結(jié)構(gòu)功能被異常的修復(fù)重建。

綜上所述，抑制肺組織炎癥反應(yīng)對(duì)于肺纖維化的改善具有重要意義，溫陽(yáng)散纖湯能顯著抑制肺組織炎癥反應(yīng)，進(jìn)而改善IPF小鼠肺組織結(jié)構(gòu)與功能。