林偉謙

摘要：目的：應(yīng)用反相高效液相色譜法分離和測(cè)定復(fù)方酮康唑乳膏中丙酸氯倍他索和酮康唑的含量。方法：該供試品經(jīng)80℃水浴鍋傳熱溶解，放冷至室溫以無(wú)水乙醇定容至50mL量瓶，超聲30min，濾紙過(guò)濾。再經(jīng)0.45μm濾過(guò)后采用Diamosilc18（2）為色譜柱，甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調(diào)PH值為7.2】（70：30）為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)239nm。結(jié)果：丙酸氯倍他索和酮康唑的線性范圍分別為0.01236～0.02884mg/mL和0.4799981～1.119995mg/mL，并與相應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為r1=0.9999611和r2=0.99999583;測(cè)得丙酸氯倍他索和酮康唑的平均回收率分別為和%。結(jié)論：該法可快速、靈敏、準(zhǔn)確測(cè)定丙酸氯倍他索和酮康唑含量，并應(yīng)用于日常樣品復(fù)方酮康唑乳膏的分析檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：反相高效液相法;丙酸氯被他索;酮康唑

引言：

復(fù)方酮康唑乳膏屬于外用制劑，主要用于皮膚淺表真菌感染。反相高效液相檢測(cè)的主要成分分別為丙酸氯倍他索和酮康唑。丙酸氯倍他索屬外用強(qiáng)效皮質(zhì)激素，作用迅速，具有較強(qiáng)的毛細(xì)管收縮作用及抗炎作用。酮康唑?qū)龠粮耦惪拐婢?，?duì)皮真菌、酵母菌、雙相真菌和真菌綱有抑菌和殺菌作用。目前，液相色譜儀法對(duì)乳膏制劑的測(cè)定已被廣泛的應(yīng)用。但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其丙酸氯倍他索和酮康總測(cè)定的方法過(guò)于繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)和效率較慢。因此，為了能快速、準(zhǔn)確地測(cè)定復(fù)方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量，本文建立其分析方法，并應(yīng)用于日常樣品復(fù)方酮康唑乳膏的液相分析。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司，配備LC-16型二元溶劑輸送泵、SPD-16型紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器、CTO-16型柱溫箱、SIL-16自動(dòng)進(jìn)樣器和labsolution5.83）、電子恒溫水浴鍋（型號(hào)HHS21-8）、十萬(wàn)分之一電子天平（島津AUW220D） 、PH計(jì)（雷磁PHS-3C）和超聲儀（潔康PS-60A）

丙酸氯倍他索對(duì)照品（系中國(guó)食品藥品檢定研究院公司提供，批號(hào)100302-201804），標(biāo)準(zhǔn)貯備液（8mg/ml）的制備：精密稱取酮康唑標(biāo)準(zhǔn)品800mg，加無(wú)水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，搖勻，備用。

酮康唑?qū)φ掌罚ㄏ抵袊?guó)食品藥品檢定研究院公司提供，批號(hào)100294-201203）標(biāo)準(zhǔn)貯備液（200μg/ml）的制備：精密稱取丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)品20mg，加無(wú)水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，搖勻，備用。

甲醇（色譜純），磷酸二氫鉀（分析純）、氫氧化鈉（分析純）、無(wú)水乙醇（色譜純）和蒸餾水

PH計(jì)標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液分別（廠家：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20180

308）：鄰苯二甲酸氫鉀0.05M、混合磷酸鹽0.025M和硼砂0.01M

（PH值分別為4.00、6.86和9.18）

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件 [1]

色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Diamosilc18（2）（迪馬200mm×4.6mm，5μm;批號(hào)9662493）;流動(dòng)相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調(diào)PH值為7.2】（70：30）;流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)239[1]，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積10μL。

2.2系統(tǒng)適用性

理論板數(shù)按酮康唑峰計(jì)算不低于2000，酮康唑與丙酸氯倍他索間的分離度應(yīng)大于2.0。[2]

2.3方法

2.3.1樣品的制備

取本品4g，精密稱重，置于50mL燒杯。加入無(wú)水乙醇25ml，再將其置于80℃電子水浴鍋進(jìn)行加熱溶解10min，時(shí)而搖勻，使溶解完全;將燒杯中樣品徐徐地轉(zhuǎn)移50ml量瓶中，再加入少量無(wú)水乙醇分三次轉(zhuǎn)移燒杯中殘留樣品，定容至刻度;最后置于超聲儀超聲30min，濾紙過(guò)濾，取續(xù)濾液放置至室溫;經(jīng)0.45μm濾過(guò)后直接上機(jī)。

2.3.2專屬性

測(cè)定：按2.1色譜條件項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，整個(gè)過(guò)程應(yīng)避光操作。丙酸氯倍他索和酮康唑。

2.3.3線性范圍和檢出限

丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)系列濃度校準(zhǔn)曲線：精密吸取丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)貯備液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分別置于酮康唑相應(yīng)濃度量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，搖勻。

酮康唑標(biāo)準(zhǔn)系列濃度校準(zhǔn)曲線：精密吸取酮康唑標(biāo)準(zhǔn)貯備液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分別置于不同的50ml量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，搖勻。

按2.1色譜條件項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，分別以丙酸氯倍他索和酮康唑的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，以各對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，丙酸氯倍他索和酮康唑的線性范圍分別為0.01236～0.02884mg/ml和0.4799981～1.119995mg/mL，其線性方程分別為Y=2.21615×107* X和Y=1.84691×107*X，相關(guān)系數(shù)分別為r1=0.9999611和r2=0.99999583。以3倍信噪比計(jì)算丙酸氯倍他索和酮康唑的檢出限平均值分別為0.00017mg/mL和0.00025mg/mL 。

2.3.4精密度

在同一天內(nèi)對(duì)同一份對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以測(cè)定值考察其精密度，結(jié)果測(cè)得丙酸氯倍他索和維生素D3的RSD分別為和，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該精密度符合要求，見(jiàn)表3。

2.3.5供試品分析

按2.3項(xiàng)下測(cè)定復(fù)方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量方法操作，共測(cè)定5批次，并與標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

3.1流動(dòng)相組成改變

由于在2020版《中國(guó)藥典》二部規(guī)定：復(fù)方酮康唑乳膏中涉及液相檢測(cè)的主要成分為丙酸氯倍他索與酮康唑，當(dāng)它們作為藥物原料時(shí)，各自色譜條件中流動(dòng)相分別采用緩沖鹽（0.05mol/L磷酸二氫鈉和0.34%硫酸氫四丁基銨溶液）與甲醇或乙腈組成比例，而在作為復(fù)方酮康唑乳膏藥物制劑，所采用流動(dòng)相為甲醇-水（74：26），而參照衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-HD-0030）-2002復(fù)方酮康唑發(fā)用洗劑在色譜條件中[4]，方法規(guī)定流動(dòng)相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調(diào)PH值為7.2】（70：30），因?yàn)樗鼈冎鞒煞忠彩潜崧缺端髋c酮康唑。

2020版《中國(guó)藥典》二部中復(fù)方酮康唑乳膏規(guī)定流動(dòng)相為甲醇-水（74：26），使主成分峰易產(chǎn)生前沿或拖尾，峰形變差，加之復(fù)方酮康唑乳膏的輔料較難洗脫，導(dǎo)致輔料洗脫時(shí)間不夠，易積存干擾下一針采集，只能延長(zhǎng)采集時(shí)間，經(jīng)改為緩沖鹽會(huì)抑制前沿或拖尾，改善峰形，提高理論塔板數(shù)，重復(fù)性高。同時(shí)易把輔料成分洗脫出來(lái)，大大縮短采集時(shí)間。

3.2分離度確認(rèn)

由于2020版《中國(guó)藥典》二部規(guī)定：復(fù)方酮康唑乳膏的系統(tǒng)適用性規(guī)定丙酸氯倍他索與酮康唑分離度應(yīng)大于2，為了符合上述規(guī)定，將流動(dòng)相比例以及組成調(diào)整為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調(diào)PH值為7.2】（70：30）。

優(yōu)化目的：解決色譜柱（尤其柱長(zhǎng)150mm）不適宜作為2020版《中國(guó)藥典》二部復(fù)方酮康唑乳膏規(guī)定色譜條件使用用色譜柱，因分離度稍微>2且，若色譜柱子使用頻率增加，分離度就會(huì)趨向臨界值（分離度接近2.0）。若更換柱長(zhǎng)250mm，雖能提高分離度，延長(zhǎng)采集時(shí)間，降低工作效率，若流動(dòng)相比例和組成更換后，提高分離度>3，縮短采集時(shí)間，提高工作效率

3.3流速的選擇

由于檢測(cè)復(fù)方酮康唑乳膏中主成分丙酸氯倍他索與酮康唑，仍采用2020版《中國(guó)藥典》四部規(guī)定默認(rèn)流速1.0ml/min，若采用流速1.5ml/min及以上，采集時(shí)間縮短反而降低兩者之間分離度，對(duì)檢測(cè)來(lái)說(shuō)毫無(wú)意義;若采用流速0.5ml/min，采集時(shí)間延長(zhǎng)反而減低工作效率，縮短柱子使用壽命。

4 結(jié)論

本文對(duì)復(fù)方酮康乳膏中所含的丙酸氯倍他索和酮康唑進(jìn)行樣品制備步驟處理，并采用液相色譜技術(shù)，使丙酸氯倍他索和酮康唑得到良好分離和取得較為滿意的測(cè)定結(jié)果。在測(cè)定的同時(shí)，與標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了比較，兩者測(cè)定結(jié)果基本一致，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合2020版《中國(guó)藥典》四部≤2%的規(guī)定要求[2]。該法操作簡(jiǎn)便、快速 、重現(xiàn)性好、分離度好、大大縮短測(cè)定時(shí)間;供試品專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為日常樣品復(fù)方酮康唑乳膏的快速分析。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國(guó)藥典（2020版），二部[S]復(fù)方酮康唑乳膏含量測(cè)定

[2]中國(guó)藥典（2020版），四部[S]高效液相色譜法：通則0512

[3]ZL-SOP615-04，藥品復(fù)方酮康唑發(fā)用洗劑含量測(cè)定操作規(guī)程[S]

[4]衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)第一冊(cè)WS-10001-HD-0030）-2002[S]復(fù)方酮康唑發(fā)用洗劑